QPCR

Question 1

Wat is een QPCR?

Answer 1

Quantitive PCR. Tijdens een QPCR, kun je real time meekijken naar de vermeerdering van het DNA. Zo weet je gelijk de concentratie van het DNA. Je hoeft het DNA niet nog in de microfotospectero meter te doen.

Question 2

treshold

Answer 2

minimale fluoriscentie van je sample

Question 3

Ct value

Answer 3

het aantal cycli wanneer het signaal boven je treshold uitkomt.
Lage Ct waarde -> veel DNA
Hoge Ct -> weinig DNA

Question 4

SYBR GREEN

Answer 4

Meest voorkomende Dye voor QPCR. Als dit niet bindt aan DNA dan heeft het een lage fluoriscentie. Als de SYBR Green aan dubbelstrengs DNA bindt neemt de fluoriscentie 1000x toe. Er geldt; hoe meer dna, hoe meer fluoriscentie er gemeten wordt.

Question 5

Waarom wordt er een DYE bij een QPCR toegevoegd.

voor en nadelen sybr Green

Answer 5

Deze zorgen voor de fluoriscentie van het DNA.
bindt aan dnDNA, goed inzetbaar in PCR systeem, minder carcinogeen.
bindt a-specifiek –> onverschatting van het resultaat (nadeel)

Question 6

Probe in QPCR

Answer 6

TAQMAN probe. Een probe is een enkelstrengs sequentie en kan hierdoor binden aan een specifieke sequentie die onderzocht moet worden. Deze sequentie moet tussen de forward en reverse primer liggen.

Question 7

Wat zit er in een probe?

Answer 7

Bestaat uit een fluorchroom en een quencher (einde). Als de fluorchroom en quencher dicht bij elkaar zitten, onderdrukt de quencher de fluorchroom. Tijden amplificatie, zal het fluorchroom loskomen en fluoriseren.

Question 8

Fases van een QPCR grafiek?

Answer 8

1. exponentiele groei
2. lineaire groei
3. plateau