DNA isolatie

Question 1

Welke bestandsdelen zitten er mogelijk in een lysis solution?

Answer 1

SDS
EDTA
TRIS
Proteinase K

Question 2

Wat doet SDS?

Answer 2

dit is een zout + ditergent oplossing. De ditergent gaat een reactie aan met het celmembraan zodat deze oplosbaarder wordt en openbreekt. Eerst gaan de rode bloedcellen kapot, vervolgens de witte bloedcellen.

Question 3

Wat doet proteinkase K

Answer 3

Dit breekt de eiwitten af die in de vrijkomen van de cellen die open gebroken zijn zodat het DNA profiel schoner wordt en er dus een beter resultaat uitkomt.
Daarnaast zorgt het ervoor dat nucleases inactief worden.

Question 4

Wat doet EDTA?

Answer 4

EDTA zorgt voor inactivatie van DNases. EDTA bindt eerder aan zoveel mogelijk metaal ionen zodat het enzym DNases dit niet meer kan doen om deze vervolgens kapot te maken.

Question 5

Wat doet TRIS

Answer 5

buffer voor het DNA

Question 6

Stappenplan DNA isolatie?

Answer 6

1. RBC lysis solution
2. incuberen en centrifugeren
3. cell lysis solution toevoegen
4. protein pricipitation solution
5. centrifugeer
6. isopropanol in nieuw epje - supernatant
7. 70% ethanol toevoegen na centrifuge
8. vloeistof afpippeteren
9. DNA hydration solution toevoegen
10. incuberen voor 5 minuten op 65 graden (lysis volledig plaatsgevonden)

Question 7

Wat doet de protein precipitation solution?

Answer 7

verlaagd de oplosbaarheid van de eiwitten zodat deze neerslaan. De supernatant kan dan verwijderd worden met het DNA maar zonder vervuilende eiwitten.

Question 8

Wat doet isopropanol?

Answer 8

DNA lost niet goed op in isopropanol, dit wordt zichtbaar.

Question 9

Waarom wordt het DNA gewassen met 70% ethanol?

Answer 9

De moleculen die oplossen in water lossen dan op. De moleculen die beter oplossen in alcohol lossen op in de alcohol. Het DNA wordt puurder.

Question 10

Waarvoor dient de DNA hydration solution

Answer 10

Dit is een buffer voor het DNA zodat dit niet verder degradeerd.