Protéines Liq. Bio.

Question 1

Deux familles principales de protéines

Answer 1

1. Fibreuse: jouent un rôle structurel et constitutif.
2. Globulaire: jouent un rôle important dans le métabolisme.

Question 2

Les protéines plasmatiques et sériques :

Answer 2

protéines plasmatiques sont les protéines retrouvées dans le sang contenant du fibrinogène

sang sérique, il y aura absence de fibrinogène et de plusieurs protéines impliquées dans les mécanismes de coagulation

Question 3

Protéines totales dans le sang:

Answer 3

entre 60 – 80 g/L

—> albumine représente ~60% des protéines totales

• Autres protéines:
• Globulines entre 0,1 - 15,0 g/L
• alpha2-macroglobuline entre 1,5 - 3,5 g/L
• Transferrine entre 2 - 3,5 g/L

Question 4

Synthèse des protéines :

Answer 4

• Principalement synthétisée au niveau du foie : Albumine en très grande quantité, ainsi que la majorité des globulines (transferrine, protéines de la coagulation, etc.).

• Plasmocytes (Globules blancs) : Immunoglobulines (Ig)

• Épithélium intestinal : lipoprotéines des chylomicrons.

• Glandes : hormones protéiniques (insuline, glucagon, hCG (hormone de grossesse), TSH (axe thyroïdien) etc.).

Question 5

Mécanismes de variation de la concentration protéique dans le sang :

Answer 5

1) Les sécrétions après synthèse: foie, plasmocytes, etc.

2) Pertes: rénales, intestinales, épithéliales, etc.

3) Diffusion après un dommage cellulaire: infarctus du myocarde, marathon, dystrophie musculaire, etc.

4) Catabolisme (généralement via l’oxydation): principalement au niveau du foie et des reins.

Question 6

pression oncotique:

Answer 6

la force qui attire l’eau en direction des protéines.

Ex.: Le résultat d’une ⬇️ de pression oncotique → œdèmes pouvant mener à un Kwashiorkor !!!

Question 7

Rôles des protéines plasmatiques

Answer 7

• Relié aux protéines spécialisées : nutrition, transport (hormones, médicaments, électrolytes, etc.)

• Maintien de la pression oncotique

• Réparation

• Défense

• Métabolisme

Question 8

propriétés physico-chimiques étudiées

Answer 8

• Masse ou Poids moléculaires (PM):

• Point isoélectrique (pI)

• Demi-vie (1⁄2 vie)

Question 9

Dosage des protéines - méthodes (grossièrement)

Answer 9

Méthodes Quantitatives (mesure de la substance):

1) Colorimétrique : Protéines totales, albumine

2) Immunochimique : Protéines spécifiques

Méthodes Semi-quantitatives / Qualitatives (détermination de la substance):
3) Électrophorèse : Fractionnement des protéines sériques

4) Immunofixation (IFX) : Caractérisation d’immunoglobuline (Ig) suite à l’éctrophorèse des protéines sériques
—> détection de cancer, maladie de crohn, etc

Question 10

Dosage des protéines totales
-objectifs

Answer 10

Identification des hyper protéinémies (⬆️ des protéines):

• mécanisme de déshydratation
• ⬇️ ingestion d’eau
• perte importante, diarrhée, vomissements, insolation
• synthèse ⬆️ (cancer plasmocytaire → ⬆️ d’Ig)

Identification des hypo protéinémies (⬇️ des protéines):
• mécanisme d’hémodilution
• ⬆️ ingestion d’eau (infusion, intoxication à l’eau)
• malnutrition (anorexie, kwashiorkor, etc.)
• synthèse ⬇️ (cirrhose hépatique, chimiothérapie)

Question 11

Méthode pour le dosage des protéines totales

Answer 11

Méthode de Biuret (Méthode automatisable)

protéines qui possèdent au moins 4 liaisons peptidiques réagissent et forment avec les ions cuivre (Cu2+) d’une solution alcaline un complexe bleu-violet. La densité optique (concentration) de ce complexe est mesurée à une longueur d’onde 540 nm.

colorimetrie

Question 12

Dosage de l’albumine:
Objectifs:

Answer 12

Identification des hyper albuminémies:

• mécanisme de déshydratation
• transfusion d’albumine ⬆️

Identification des hypo albuminémies:

• malnutrition (anorexie, kwashiorkor, etc.)
• synthèse ⬇️ (cirrhose hépatique)
• maladies inflammatoire et infections

Identification des néphropathies (rein)

Utilisé pour l’évaluation d’autres substances et molécules qui se lient à l’albumine

Question 13

Dosage de l’albumine méthode

Answer 13

Méthode au bromocrésol vert ou pourpre: colorimetrie

adsorption spécifique par l’albumine de colorants anioniques à un pH déterminé (pH 4,2 pour le bromocrésol vert et 5,2 pour le bromocrésol pourpre).
—> coloration de l’échantillon sera proportionnelle à la concentration d’albumine dans cet échantillon

Question 14

Dosage des protéines spécifiques:
Objectifs:

Answer 14

Identification spécialisée de différentes pathologies ou conditions:

• Évaluation d’un état inflammatoire aiguë ou chronique
• Hémolyse in vitro vs in vivo
• Anémie ferriprive vs inflammatoire
• Évaluation de la fonction rénale ou hépatique
• Gammapathie monoclonale (sécrétion d’Ig ⬆️)
• Etc.

Question 15

Dosage des protéines spécifiques:
Méthodes

Answer 15

Méthodes immunologiques

complexe Ac-Ag peut-être mesurée par différentes méthodes :

1) Néphélométrie
—> mesure l’intensité de lumière dispersée (réfléchie) à un angle de (30°, 70° ou 90°) par le complexe Ag-Ac suite à un rayonnement de lumière émis.

2) Turbidimétrie
—> mesure l’intensité de lumière transmise (non- absorbée) à un angle de (180°) par le complexe Ag-Ac suite à un rayonnement de lumière émis.

3) Essai immunoenzymatique (ELISA)

Question 16

Effet prozone ou effet crochet

Answer 16

cause de Dx faux negatif

Quand la quantité d’Ac ajoutés pour doser des protéines spécifiques est trop faible en comparaison aux Ag

—> pas de formation de complexe = pas de précipitation = mauvais résultat

doit faire des dilutions
—> si le résultat augmente avec des dilutions : identification d’effet crochet

ou ajout d’un calibrateur

Question 17

ELISA étapes

Answer 17

—> basé sur le principe que l’Ag (protéine à doser) est capté par un 1ier Ac de capture fixé sur une paroi solide (billes, tubes ou puits dans une plaque) et est révélé par un 2ième Ac couplé à une enzyme.

Étapes:
1. Sérum (Ag) + Ac → incubation
Ici, l’Ag (protéine à doser) est adsorbé par le 1ier Ac fixé sur une phase solide

2. Lavage (On élimine les protéines non fixées).
3. On ajoute le 2ième Ac marqué avec une enzyme → incubation.
4. Lavage (On élimine les Ac non fixés sur les Ag (protéines)).
5. Ajout d’un substrat pour l’enzyme liée → incubation.
6. Mesure de la D.O. proportionnelle à la concentration Ag.

Question 18

Fractionnement des protéines sériques:
Objectif:

Answer 18

• Permet d’obtenir un profil général des différentes classes de protéines dans le sérum.

• L’identification des protéines peut se faire en les séparant par différentes techniques électrophorétiques ou chromatographiques.

• L’électrophorèse sur gel d’agarose à pH 8,6 est la méthode de séparation privilégiée en laboratoire clinique. Quoique très grossière, elle permet de refléter les variations pathologiques des principales protéines d’intérêt clinique.

Question 19

Fractionnement des protéines sériques différentes zones

Answer 19

Prealbumine
Albumine
Alpha1
Alpha2
Beta1
Beta2
Gamma

Question 20

Affections hépatiques sévères
Protéines?

Answer 20

⬇️ synthèse (plusieurs protéines)

Question 21

États inflammatoires
Protéines?

Answer 21

⬆️ synthèse (alpha1 + alpha2-globulines) et ⬇️ (transferrine(beta1), albumine)

Question 22

Déficit héréditaire proteines?

Answer 22

⬇️ génétique (alpha1-antitrypsine)

—> inhibiteur de protease : pas inhibé = dégradation de protéines dans le corps

Question 23

Maladies auto-immunes protéines?

Answer 23

⬆️ synthèse (immunoglobulines)

Question 24

Syndrome néphrotique proteines?

Answer 24

⬆️ synthèse (alpha2-macroglobuline) et ⬇️ (pertes) (toutes les autres protéines)

Question 25

Myélome

Answer 25

⬆️ synthèse (immunoglobulines)

Question 26

Malnutrition protéines?

Answer 26

⬇️ synthèse par le foie (plusieurs protéines)

Question 27

Grossesse protéines?

Answer 27

⬇️ catabolisme (plusieurs protéines)

Question 28

Inhibiteurs de protéases:

Answer 28

inhibent l’activité des protéines à activité protéolytiques et permet ainsi la régulation de différents mécanismes physiologiques (digestion, coagulation, protection tissulaire, etc.)

—> alpha1-antitrypsine
—> alpha2-macroglobuline

Question 29

Transporteurs:

Answer 29

Pré albumine
Albumine
Haptoglobine (alpha2)
Transferrine (beta1)

Question 30

Protéines de la coagulation:

Answer 30

—> formation d’un caillot de fibrine et la réparation des tissus endommagés

coagulation est initiée lorsque le sang est exposé à une surface chargée négativement ou à un facteur tissulaire (lipoprotéine à la surface de certaines cellules)

—> induisent l’activation d’une cascade de protéines (facteurs I à XIII produites par le foie) ayant une activité protéolytique.

Question 31

Voie Intrinsèque coagulation

Answer 31

Mécanismes utilisant principalement les protéines produites par le foie lorsque la voie extrinsèque n’est pas suffisante.

Question 32

Voie Extrinsèque coagulation

Answer 32

Mécanismes utilisant principalement les protéines libérées par les cellules endommagées (Thromboplastine, lipoprotéines, phospholipides, etc.)

Question 33

Protéines du complément:

Answer 33

joue 3 rôles:
1) Défense contre les infections
2) Élimination des déchets (complexes immuns et corps apoptotiques)
3) Immunité adaptive (transition immunité innée à acquise)

L’activation du complément suit 3 voies:
1) Voie classique
2) Voie alterne
3) Voie des lectines

—> se fusionnent en une seule voie terminale (protéines C5 à C5b → lyse/ opsonisation) conduisant à la destruction des membranes des cellules pathogènes et libération du contenu cellulaire → Mort cellulaire!

Question 34

La voie classique:

Answer 34

fait intervenir Ac IgG ou IgM

habituellement activée par la formation de complexes Ag-Ac (il y aura reconnaissance d’un Ag connu), par l’ADN ou par la CRP (protéine C-réactive)

—> C1q détecte ces signaux endogènes ce qui déclenche la cascade

• C1qrs clive
C2 —> C2a C2b
C4 —> C4a C4b

C4bC2a (C3 convertase) clive C3
C3 —> C3a C3b

C4bC2aC3b (C5 convertase) clive C5

C5b —> commence MAC

PAS À RETENIR EN DÉTAIL

Question 35

La voie alternative:

Answer 35

indépendante d’une activation par des Ac !!!

activée par :

• la liaison du C3b/surface de différents microorganismes (levures, bactéries)

• par des substances telle les venins

—> voie induit également le clivage du complément C3 de la voie classique puis le C5 en C5b de la voie terminale.

—> complément C4 n’intervient pas dans cette voie!!!

Question 36

La voie des lectines:

Answer 36

indépendante d’une activation par des Ac !!!

—> initiée par la liaison de la MBL (Mannan-Binding Lectin qui ressemble à la C1q) aux lectines/sucres terminaux de glycoprotéines retrouvés à la surface de certains microorganismes (pas tous!)

• La MBL circule en association avec des enzymes de type sérine protéase nommées MASP (MBL-Associated Serine Protease),
• Suit ensuite les mêmes étapes que la voie classique.

Question 37

L’activation du complément C3 (voie classique, alterne ou lectines) peut déclencher plusieurs activités biologiques:

Answer 37

• La lyse cellulaire
• L’opsonisation des substances à éliminer (ex. bactéries)
• La chimiotaxie (attraction des c immunitaires vers le site d’inflammation)
• L’⬆️ de la perméabilité vasculaire
• La contraction des muscles lisses vasculaires

Question 38

protéine du système du complément dont la concentration plasmatique est la plus importante.

Answer 38

Le complément C3

—> la ⬇️ uniquement de la concentration de C3:
• Indique l’activation du complément par la voie alterne

—> la ⬇️ des compléments C3 et C4:
• Fournit un indice de l’activation de la voie classique ou la voie des lectines

Question 39

Protéines d’inflammation (symptômes cause)

Answer 39

Les protéines d’inflammation = Réponse non spécifique à l’inflammation ou aux dommages tissulaires.

Symptômes :
• Chaleur
• Douleur
• Rougeur et tuméfaction (enflure)

Causes :
• Atteinte traumatique
• Physique (brûlure, engelure, radiation …)
• Chimique
• Septique
• Tumorale

Question 40

Inflammation locale vs systemique

Answer 40

Réponse locale (vasculaire)
• Libération : histamine, sérotonine, kinines et prostaglandines
• Vasodilatation + œdème
• Agrégation plaquettaire + dépôt de fibrine

Réponse systémique (cellulaire)
• Fièvre
• Douleur
• Afflux leucocytaire (hyperleucocytose: macrophages, polymorphonucléaires, lymphos T)
• Libération d’enzymes
• Libération d’IL-1 qui stimule l’expression de gènes hépatiques de synthèse de protéines de phase aiguë

Question 41

3 contextes d’inflammation

Answer 41

a) Inflammation aiguë :
• ⬆️ des protéines de phase aiguë positive (c.-à-d. des protéines qui ⬆️ lors d’une inflammation)
• ⬇️ des protéines de phase aiguë négative (c.-à-d. des protéines qui ⬇️ lors d’une inflammation)
• Immunoglobulines normales

b) Inflammation subaiguë:
• État intermédiaire entre ce qui est chronique et ce qui est aigu
• ⬆️ modeste des protéines de phase aiguë positive
• Protéines de phase aiguë négative ~ normales

c) Inflammation chronique:
• ⬆️ des protéines de phase aiguë positive
• ⬆️ des immunoglobulines (particulièrement IgG)

Question 42

CRP (protéine C-réactive)
Inflammation

Answer 42

Se lie aux Cell. endommagées, bactéries, plaquettes, lymphocytes

—> reponse Positive très forte à l’inflammation
1/2 vie 5h

Question 43

1/2 vies pré albumine, albumine, transferrine, CRP

Answer 43

Pré albumine —> 2 jours

Albumine—> 20 jours

Transferrine—> 8 jours

CRP (protéine C-réactive)—> 5 heures

Question 44

La malnutrition =

Answer 44

perte protéinique → affecte la fonction des organes (contractilité du cœur, réponse immunitaire, guérison d’une blessure, etc.).

• Souvent responsable d’hospitalisations prolongées et de complications.

Question 45

marqueurs idéaux de dénutrition devraient:

Answer 45

• Avoir une courte 1⁄2 vie (< 2 j)
• Répondre rapidement aux apports alimentaires et aux pertes modérées
• Être non affecté par une dysfonction hépatique ou rénale

Question 46

L’albumine: nutrition

Answer 46

• 1⁄2-vie: longue (19 jours)
• Réserve sanguine importante (35-50 g/L)
• Bon indicateur de dénutrition chronique sévère (< 21 g/L)
• Insensible à malnutrition aiguë
• Bonne corrélation avec morbidité et mortalité

Question 47

Pré albumine (transthyrétine): nutrition

Answer 47

• 1⁄2-vie: courte (2 jours)
• Transporte la thyroxine (T4 (hormone thyroïdienne)) et la vitamine A
• Faible réserve sanguine (200 – 400 mg/L)
• Bon indicateur de malnutrition sévère (si < 100 mg/L)
• Réponse rapide à un apport alimentaire (⬆️ de 10 mg/L/jour)
• Peut être difficile à interpréter si : traitement/corticostéroïdes, contraceptifs oraux, alcool → car ils
⬆️ la pré albumine

Question 48

La transferrine (Tf): nutrition

Answer 48

• 1⁄2-vie: ~ 8,8 jours
• Synthèse hépatique
• Transporte les ions ferriques (99% du fer lié/Tf)
• Meilleur indicateur des changements alimentaires que l’albumine
• Indicateur pour les interventions long terme vs soins aigus

Question 49

La protéine C-réactive (CRP): nutrition

Answer 49

• 1⁄2-vie: 5 heures
• Absente chez patients normaux
• ⬆️ très rapidement et fortement lors d’inflammation
• Protéine de phase aiguë positive
• Mauvais marqueur de malnutrition

très sensible, pas specifique

Question 50

pré albumine: Causes des variations:

Answer 50

•⬇️ causée par:
Malnutrition, inflammation, nécrose tissulaire, néoplasie, cirrhose hépatique, perte protéinique (intestinale et/ou rénale), salicylates (ex.: aspirine)

• ⬆️ causée par:
Stéroïdes, lymphome d’Hodgkin, acromégalie, alcoolisme

Question 51

l’albumine: Causes des variations:

Answer 51

• ⬇️ causée par:
Inflammation, malabsorption, malnutrition, pertes protéiniques intestinales/rénales/brûlures, gammapathies monoclonales

• ⬆️ causée par: Déshydratation

PM: 66 kD

Question 52

Alpha1-antitrypsine
&causes des variations

Answer 52

représente (90% alpha1-globulines)

• Synthétisée par le foie
• 1⁄2-vie (complexée) ~ 3 heures
• Protéine de phase aiguë positive
• Antiprotéase (élastase, collagénase, trypsine, chymotrypsine …)

⬇️ causée par:
• Déficience héréditaire (< 0,5 g/L) → syndrome de détresse respiratoire (bébé),
emphysème pulmonaire précoce

⬆️ causée par:
• Inflammation
• Maladies hépatocellulaires
• Contraceptifs (œstrogènes) ou fin de grossesse

Question 53

Alpha1-fétoprotéine (AFP):
Et causes de variation

Answer 53

Femme enceinte: ⬆️ entre les 13 – 30 semaines de grossesse ~ 1/3 protéines plasmatiques fœtales
• Adulte ~ absente (< 30 μg/L); si présence ⬆️ possibilité de cancer

⬇️ causée par:
• Syndrome de Down (trisomie 21)

⬆️ causée par:
• Plusieurs cancers (ex.: foie, pancréas, intestin, poumon, tumeurs des cell. germinales
(testiculaires ou ovariennes)
• Utile pour le suivi post-thérapie tumorale

Question 54

Alpha2-macroglobuline:

Answer 54

Synthétisée par le foie et le système réticulo-endothélial (SRE) (c.-à-d. fibroblastes,
monocytes/macrophages, etc.)
• 1⁄2-vie: 2-4 jours
• Inhibe les protéases

⬇️ causée par:
• Myélome multiple, ulcère gastrique.

⬆️ causée par:
• Syndrome néphrotique (perte protéique rénale importante) → synthèse hépatique
compense pour la perte d’albumine rénale, car le rein laisse tout passer. Maintien ainsi la pression oncotique !!!
• Infections et réactions inflammatoires aiguës.

Question 55

Transferrine (TRF): zone des β1-globulines
causes de variation

Answer 55

Synthétisée par le foie et un peu dans le SRE, testicules, ovaires
• 1⁄2-vie: 8 jours
• Protéine de phase aiguë négative
• Transporte 2 Fe3+ de l’intestin → le foie, la moelle osseuse et le SRE
• Dans la moelle osseuse: synthèse de l’hémoglobine (Hb)

⬇️ causée par:
• Inflammation aiguë, maladie hépatique chronique, malnutrition, perte protéinique
rénale/intestinale

⬆️ causée par:
• Anémie ferriprive/hypochrome (hypochrome = Globule rouge avec de l’Hb ⬇️ fer),
grossesse

Question 56

β1-lipoprotéine (LDL : Low Density Lipoprotein)
Causes des variations

Answer 56

Surtout apolipoprotéine B (B48, B100)
grosse protéine synthétisée par le foie

Se lient aux récepteurs membranaires pour faire entrer le cholestérol (CHO) dans les c
(macrophages phagocytent le LDL oxydés → athérosclérose) → ⬆️ du risque d’infarctus cardiaque !!!

⬇️ causée par:
Hypo-β-lipoprotéinémie et a-β-lipoprotéinémie (déficience génétique)

⬆️ causée par: Déficiences génétiques des récepteurs (les cellules manquent de CHO→ ⬆️ synthèse LDL)

Question 57

Complément : zone des β2-globulines
Variations

Answer 57

l’activité du complément en dosant deux protéines importantes de la cascade:
C3 et C4
• Protéines de phase aiguë positive (tardive)

⬇️ causée par:
• C3 + C4: maladies auto-immunes, infection bactérienne subaiguë, déficience héréditaire
• C3: glomérulonéphrite, déficience héréditaire

⬆️ causée par:
• C3 + C4: inflammation aiguë

Question 58

Protéine C-Réactive (CRP):

Variations

Answer 58

Migre entre les zones β et gamma sur l’électrophorèse des protéines, mais est observable que
lorsque la concentration est très ⬆️⬆️⬆️

• Protéine de phase aiguë positive (⬆️ précoce et très ⬆️)
• Se lie aux polysaccharides (bactéries, levures, …), polycations (histones)
• Très sensible, mais non spécifique!

⬆️ causée par: ⬆️ d’~2000 X des valeurs normales lors d’une inflammation

Infarctus aiguë du myocarde, stress, trauma, infection, chirurgie, néoplasie

Question 59

Zones gamma-globulines

Answer 59

Immunoglobulines (Ig):
• Rôle: reconnaissance des Ag et initiation de destruction des Ag
• Synthèse: lymphocytes B différenciés en cellules plasmatiques

Compose de 2 chaînes lourdes (constante) et 2 chaînes légères (variables- lambda ou kappa)

—> Assemblage H2L2 dans plasma par liens disulfures

Question 60

IgG
Variations

Answer 60

Seules les IgG traversent le placenta

Monomère
—> Activation du complément (Voie classique)
—> Immunisation secondaire (post IgM)

Synthèse : Dans les ganglions et la rate par les c plasmocytaires

⬇️ causée par:
• Déficience sélective
• Agammaglobulinémie (ex: déficit immunitaire congénital d’origine génétique)
• Bébé entre 2 – 6 mois
• Myélome IgA (suppression de synthèse des IgG)
• Maladie chaînes légères (pathologies lymphoprolifératives de la lignée B)

⬆️ causée par:
• Infection (polyclonal)
• Hépatite chronique active
• Maladie auto-immune
• Myélome IgG

Question 61

Quand il y a un myélome d’un Ac qu’est-ce qui arrive avec les autres

Answer 61

Les autres Ac ne sont pas produits

—> ⬇️⬇️⬇️

Question 62

IgA
Variations

Answer 62

Monomère, dimère ou trimère

Synthèse: Sous muqueuses / c plasmocytaires
(salive, larmes, voies respiratoires, génito-urinaires, système digestif)

Fonction: Protection précoce anti-virale et anti-bactérienne Causes des variations:

⬇️ causée par:
Agammaglobulinémie, nouveau-né, maladie des chaînes légères, myélome IgG (suppression de synthèse)

⬆️ causée par:
Infections associées/systèmes sécrétoires externes (gastro-intestinal, respiratoire),
maladies hépatocellulaires,
myélome IgA

Question 63

IgM

Answer 63

Monomère ou pentamere

Fonctions :
• Immunisation primaire
• Activation du complément
• Opsonisation + agglutination pour faciliter phagocytose

⬇️ causée par:
Agammaglobulinémie, nouveau-né, myélome IgG ou IgA (suppression de synthèse des IgM), maladie des chaînes légères (production majoritaire de chaînes légères au détriment des chaînes lourdes)

⬆️ causée par:
Infection, cirrhose biliaire primaire, maladie de Waldenström, infection

Question 64

IgD

Answer 64

Synthèse: lymphocytes B (surface)

• Fonction: Peu de connues, mais peut activer les lymphocytes B. Peuvent lier les granulocytes, basophiles et les mastocytes, ce qui a pour effet de les activer.

⬆️ causée par: Lymphome d’Hodgkin, myélome à IgD

Question 65

IgE

Answer 65

Synthèse: Sous-muqueuses / c plasmocytaires

Fonction:
• S’attache/mastocytes et lie les Ag (allergènes)
• Stimule les mastocytes à relâcher l’histamine (molécule vasoactive)
• ⬆️ la perméabilité vasculaire et contraction muscles lisses (réaction allergique)

⬆️ causée par:
allergie, asthme intrinsèque, certaines maladies parasitaires, myélome à IgE