Enzymo Flashcards
Localisation de la plupart des enzymes dans l’organisme
Localisation intracellulaire
—> peu activement sécrétées dans la circulation
détermination sanguine des enzymes normalement intra-c permettent de donner une indication de quoi?
indication du tissu ou du type cellulaire dont elles proviennent
enzymes retrouvées dans le plasma font partie de deux groupes différents :
1) Celles qui sont spécifiquement plasmatiques:
ont une fonction dans le plasma qui est leur lieu d’action normal
(Ex. Coag., syst. rénine-angiotensine, Lipoprotéine lipase)
2) Celles qui sont tissulaires:
n’ont pas de rôle physiologique dans le sang
(ex.: ALT, AST, CK, LD, etc.)
2 sous groupes des enzymes tissulaires
1) enzymes de sécrétions
2) enzymes du métabolisme
Utilité clinique du dosage des enzymes:
• Dépistage de plusieurs maladies
• Évaluation de conditions physiologiques (croissance, grossesse, etc.)
• Aide au diagnostic (Dx)
• Suivi de l’évolution de la maladie
• Suivi de l’évolution de la thérapie
• Pronostic
(PAL) : sources principales & applications principales
Phosphatase alcaline
—> Foie, Os, Intestin, reins, placenta
—> Maladies osseuses, Maladies hépatiques
(utilisé dans le remodelage osseux
présent dans les enfants en croissance)
Amylase: sources principales & applications principales
Glandes salivaires, Pancréas, Ovaires
—> Maladies pancréatiques
ALT: sources principales & applications principales
Alanine aminotransférase
—> Foie, Reins, GR
—> Maladies hépatiques
CK: sources principales & applications principales
Créatinine kinase
—> Muscle squelettique et lisse, Cerveau, Cœur
—> Infarctus cardiaque, Maladies musculaires
(C élevés suite à grand effort : lyse cellulaire dans les muscles)
GGT: sources principales & applications principales
Gamma-Glutamyltranférase
—> Foie, Reins
—> Maladies hépatique et obstruction biliaire
LD: sources principales & applications principales
Lactate déshydrogénase
—> Cœur, Foie, Muscle squelettique, GR, Plaquette sanguines
—> Hémolyse, Maladies hépatiques, Infarctus cardiaque
Mesure l’activité catalytique dépend de?
L’intégrité de la structure de l’enzyme
—> Conditions d’incubation (T°C, pH, force ionique vs dénaturation)
—> Conditions de conservation (20°C, 4°C, -20°C, -80°C)
Vitesse de réaction = Vmax mesure quoi?
(mesure de disparition de S ou apparition de P): activité enzymatique
—> si [S] est saturante
On doit déterminer les conditions d’incubation pour obtenir Vmax durant tout le temps de mesure
(diluer échantillon lorsque activité > limite supérieure de linéarité, car la concentration n’est plus exact !!!)
Km?
constante de Michaelis spécifique de l’enzyme
—> la [S] pour laquelle Vmax/2
(en mol/L)
L’activité catalytique s’exprime?
L’activité s’exprime en unité (U) = 1 μmole de substrat hydrolysé/min. On évalue un variation D.O./min
Quelle est la méthode courante de dosage des enzymes
La mesure cinétique en continu
—> on effectue la mesure par (D.O.) de la disparition du substrat ou apparition du produit
Variantes de réactions enzymatiques à suivre (3)
1) inactivation de l’enzyme
—> par chaleur afin d’analyser des mélanges d’iso enzymes
2) inhibition sélective de l’enzyme
—> avec inhibiteurs ou avec Ac (pour identifier prédispositions génétiques ou mesurer activité des sous-unités)
3) Activation enzymatique
—> par cofacteurs minéraux, coenzymes nicotiniques, ou Groupes prosthétiques
(Pour s’assurer de doser les enzymes meme si personne à des déficiences)
PAL —> différentes isoenzymes et façon de les différentier
À 56C, la PAL hépatique est plus stable que la osseuse.
—> exposition à la chaleur (56C) inactive la PAL osseuse après 10 min
—> mesure avant et après l’inactivation de la PAL osseuse
Cholinestérases?
Identification de leur phénotype ?
Enzyme impliqué dans les synapses du système nerveux
—> leur phénotype est déterminé par l’utilisation d’inhibiteurs comme la dibucaïne(médicament)
—> Permet l’identification de prédispositions génétiques innées à l’apnée médicamenteuse (ex.: anesthésie médicale)
Gr prosthétique ajoute dans le dosage pour l’AST et l’ALT
pyridoxal-PO4 (pyridoxal phosphate)
—> alcooliques sont déficients de pyridoxal phosphate
—> rajouté dans les réactifs du dosage du AST et ALT pour s’assurer du fonctionnement et dosage correct des enzymes
Mesure de la ‘‘Masse’’ enzymatique :
Avantages?
Ac spécifiques aux enzymes produites par des compagnies
—> Ac permettent de doser la ‘‘masse’’ de l’enzyme ( μg/L)
[enzyme active + enzyme inactive]
Avantages de ces méthodes :
• Plus grande sensibilité analytique
• Très grande spécificité
• Permets de doser des enzymes inactives
• Peu d’interférences
Mécanismes d’augmentation de la [enzymes]
1) Libération extracellulaire suite a un dommage cellulaire
2) Synthèse / Induction : responsable de 75% des ⬆️ sériques
3) Diminution de l’élimination
4) Causes d’augmentation
hypoxie
carence de O2 = apoptose
Le BNP (brain natriuretic peptide) et l’ANP (atrial natriuretic peptide) sont :
• deux marqueurs cardiaques.
• ne sont pas des enzymes!
• ⬆️ lorsque la pression artérielle est ⬆️ (ex.: hypertension artérielle), et ce, pour ⬇️ cette dernière.
• évalués lors d’insuffisance cardiaque (augmente CK, BNP, ANP), apnée du sommeil, etc.
3 mécanismes de diminution de l’élimination des enzymes
• Catabolisme enzymatique ralenti
• Excrétion / Clairance enzymatique ⬇️
(Ex. Insuffisance rénale et macro-enzymes)
• Inactivation enzymatique ⬇️
(⬇️ alpha1-antitrypsine = ⬆️trypsine = Problèmes!!!
⬇️ alpha2-macroglobuline = ⬆️ élastase = Problèmes!!!)
LD isoenzymes
5 isoenzymes (4 sous unités )
—> 2 gènes codent pour 2 sous unités (H + M)
(Heart + Muscle)
Mesure de la clairance d’amylase par les reins / clairance de créatinine
Lipase permet Dx de?
Pancréatite aiguë
—> ⬆️ en parallèle avec amylase
mais est + spécifique à la pancréatite aiguë
—> permet d’exclure sources ectopique a d’amylase (cancer poumon, ovaire)
Pic = 2-50x limite supérieur le de référence
—> persiste + long qu’amylase dans le sang
Insuffisance rénale peut ⬆️ lipase un peu
Lithiase
C’est quoi?
Peut faire quoi?
Des pierres
—> peuvent bloquer le canal de la vésicule biliaire = obstruction biliaire
Test pour évaluation alcoolisme
Dosage ALT AST
ratio > 2:1
—> normalement ALT>AST
—> Stimulation de l’AST mitochondriale (ASTm) et il semblerait y avoir un
mécanisme de suppression de l’ALT.
GGT
Gamma -glutamyl-transférase
Le plus sensible des marqueurs de maladies hépatiques
⬆️⬆️⬆️ chez alcooliques
Acétylcholinestérase (AChE) dans synapses
Formation de l’ACh à partir de la choline (recyclage) et de l’acétyl- CoA (mitochondries)
Dans la synapse, l’ACh provoque une modification de la perméabilité ionique membranaire et est rapidement dégradée par l’AChE
La choline recapturée dans la région terminale de l’axone. Permet une synthèse de novo de l’ACh
Intoxication aux organophosphorés/carbamates :
• Les carbamates (ex.: pesticides) s’éliminent spontanément environ 48 h après l’exposition.
• Les organophosphorés, peuvent irréversiblement se lier à l’AChE
• Faiblesse musculaires
• Signes respiratoires (râles, wheezing et une hypoxie, qui peut être sévère)
• Bradycardie et troubles cardiaques (allongement de l’intervalle QT-c, donc provoque une arythmie)
• Hypotension (cas d’intoxication sévère)
• Toxicité du SNC est fréquente (convulsions, excitabilité, léthargie et coma)
• Pancréatite possible
