Enzymo Flashcards
Localisation de la plupart des enzymes dans l’organisme
Localisation intracellulaire
—> peu activement sécrétées dans la circulation
détermination sanguine des enzymes normalement intra-c permettent de donner une indication de quoi?
indication du tissu ou du type cellulaire dont elles proviennent
enzymes retrouvées dans le plasma font partie de deux groupes différents :
1) Celles qui sont spécifiquement plasmatiques:
ont une fonction dans le plasma qui est leur lieu d’action normal
(Ex. Coag., syst. rénine-angiotensine, Lipoprotéine lipase)
2) Celles qui sont tissulaires:
n’ont pas de rôle physiologique dans le sang
(ex.: ALT, AST, CK, LD, etc.)
2 sous groupes des enzymes tissulaires
1) enzymes de sécrétions
2) enzymes du métabolisme
Utilité clinique du dosage des enzymes:
• Dépistage de plusieurs maladies
• Évaluation de conditions physiologiques (croissance, grossesse, etc.)
• Aide au diagnostic (Dx)
• Suivi de l’évolution de la maladie
• Suivi de l’évolution de la thérapie
• Pronostic
(PAL) : sources principales & applications principales
Phosphatase alcaline
—> Foie, Os, Intestin, reins, placenta
—> Maladies osseuses, Maladies hépatiques
(utilisé dans le remodelage osseux
présent dans les enfants en croissance)
Amylase: sources principales & applications principales
Glandes salivaires, Pancréas, Ovaires
—> Maladies pancréatiques
ALT: sources principales & applications principales
Alanine aminotransférase
—> Foie, Reins, GR
—> Maladies hépatiques
CK: sources principales & applications principales
Créatinine kinase
—> Muscle squelettique et lisse, Cerveau, Cœur
—> Infarctus cardiaque, Maladies musculaires
(C élevés suite à grand effort : lyse cellulaire dans les muscles)
GGT: sources principales & applications principales
Gamma-Glutamyltranférase
—> Foie, Reins
—> Maladies hépatique et obstruction biliaire
LD: sources principales & applications principales
Lactate déshydrogénase
—> Cœur, Foie, Muscle squelettique, GR, Plaquette sanguines
—> Hémolyse, Maladies hépatiques, Infarctus cardiaque
Mesure l’activité catalytique dépend de?
L’intégrité de la structure de l’enzyme
—> Conditions d’incubation (T°C, pH, force ionique vs dénaturation)
—> Conditions de conservation (20°C, 4°C, -20°C, -80°C)
Vitesse de réaction = Vmax mesure quoi?
(mesure de disparition de S ou apparition de P): activité enzymatique
—> si [S] est saturante
On doit déterminer les conditions d’incubation pour obtenir Vmax durant tout le temps de mesure
(diluer échantillon lorsque activité > limite supérieure de linéarité, car la concentration n’est plus exact !!!)
Km?
constante de Michaelis spécifique de l’enzyme
—> la [S] pour laquelle Vmax/2
(en mol/L)
L’activité catalytique s’exprime?
L’activité s’exprime en unité (U) = 1 μmole de substrat hydrolysé/min. On évalue un variation D.O./min
Quelle est la méthode courante de dosage des enzymes
La mesure cinétique en continu
—> on effectue la mesure par (D.O.) de la disparition du substrat ou apparition du produit
Variantes de réactions enzymatiques à suivre (3)
1) inactivation de l’enzyme
—> par chaleur afin d’analyser des mélanges d’iso enzymes
2) inhibition sélective de l’enzyme
—> avec inhibiteurs ou avec Ac (pour identifier prédispositions génétiques ou mesurer activité des sous-unités)
3) Activation enzymatique
—> par cofacteurs minéraux, coenzymes nicotiniques, ou Groupes prosthétiques
(Pour s’assurer de doser les enzymes meme si personne à des déficiences)
PAL —> différentes isoenzymes et façon de les différentier
À 56C, la PAL hépatique est plus stable que la osseuse.
—> exposition à la chaleur (56C) inactive la PAL osseuse après 10 min
—> mesure avant et après l’inactivation de la PAL osseuse
Cholinestérases?
Identification de leur phénotype ?
Enzyme impliqué dans les synapses du système nerveux
—> leur phénotype est déterminé par l’utilisation d’inhibiteurs comme la dibucaïne(médicament)
—> Permet l’identification de prédispositions génétiques innées à l’apnée médicamenteuse (ex.: anesthésie médicale)
Gr prosthétique ajoute dans le dosage pour l’AST et l’ALT
pyridoxal-PO4 (pyridoxal phosphate)
—> alcooliques sont déficients de pyridoxal phosphate
—> rajouté dans les réactifs du dosage du AST et ALT pour s’assurer du fonctionnement et dosage correct des enzymes
Mesure de la ‘‘Masse’’ enzymatique :
Avantages?
Ac spécifiques aux enzymes produites par des compagnies
—> Ac permettent de doser la ‘‘masse’’ de l’enzyme ( μg/L)
[enzyme active + enzyme inactive]
Avantages de ces méthodes :
• Plus grande sensibilité analytique
• Très grande spécificité
• Permets de doser des enzymes inactives
• Peu d’interférences
Mécanismes d’augmentation de la [enzymes]
1) Libération extracellulaire suite a un dommage cellulaire
2) Synthèse / Induction : responsable de 75% des ⬆️ sériques
3) Diminution de l’élimination
4) Causes d’augmentation
hypoxie
carence de O2 = apoptose
Le BNP (brain natriuretic peptide) et l’ANP (atrial natriuretic peptide) sont :
• deux marqueurs cardiaques.
• ne sont pas des enzymes!
• ⬆️ lorsque la pression artérielle est ⬆️ (ex.: hypertension artérielle), et ce, pour ⬇️ cette dernière.
• évalués lors d’insuffisance cardiaque (augmente CK, BNP, ANP), apnée du sommeil, etc.
