Praktikum VL4: Aerobe Sporenbildner und Differenzierung von Mikroorganismen (Teil2)

Question 1

Gram färbung

Answer 1

Verantwortlich für gram+ / Gram- Verhalten ist die Struktur der zellwand

1. Hitzefixierter ausstrich mit kristallviolett 1min abfärben -> alle Zellen sind violett
2. Jodlösung 3min einwirken lassen -> alle Zellen bleiben violett
3. Etwa 20s mit Alkohol entfärben -> gram+ = violett/ gram- = farblos
4. 1-2min mit Safranin gegenfärben -> gram+ = violett/ gram- = rosa bis rot

Question 2

Gram+

Answer 2

Viele Dicke PeptidoglykanSchicht und Cytoplasmamembran

Oligosaccharide im peptidogykan werden über glycin-pentapeptids verknüpft

Peptidoglykan ist mit zellwandgebundenen Proteinen teichonsäure durchzogen
Auf PeptidoglykanSchicht folgt die Cytoplasmamembran

Gramfärbung:
Violett

Question 3

Gram-

Answer 3

Äußere Membran,im Periplasma dünne PeptidoglykanSchicht, Cytoplasmamembran

Oligosaccharide im Peptidoglykan werden direkt verknüpft

LPS, äußere Membran, Periplasma (teils murein), Cytoplasmamembran

Identifikation durch
gramfärbung:
-nach Safraninfärbung rosa bis rote Zellen
Schnellverfahren:
- Zellen mit sterilem zahnstocher in einem Tropfen KOH verreiben -> schleimfaden

Question 4

Atmung

Answer 4

Oxidation von NADH durch schrittweise Übertragung der Elektronen auf terminale akzeptor (O2, NO3-, SO4–

Question 5

Gärung

Answer 5

Oxidation von NADH durch Reduktion von Stoffwechselzwischenprodukten, diese reduzierten Verbindungen werden ausgeschieden

Question 6

Produkte der Glucose-Vergärung

Answer 6

2,3-Butandiol
Ethanol 
Succinat 
Lactat 
Acetat 
Formiat 
Wasserstoff 
Kohlenstoffdioxid

Question 7

IMViC-reihe

Answer 7

Indolbildung aus tryptophan

Methylrotprobe (pH Indikator)

Voges-Proskauer-Reaktion (Nachwe6von Acetoin, einem zwischenprodukt der Butandiolgärung)

iC Verwertung von citrat als einzige C und Energiequelle (Alkalisierung)

Question 8

Nachweis von indol

Answer 8

Indolbildung entsteht beim Abbau der AS Tryptophan
Mittels Kovacs Reagenz (Dimethylaminobenzaldehyd):
Indolverwertung -> Kirschtorte färbung
TryptophanVerwertung -> rot

Question 9

Nachweis von Gärungsprodukten

Answer 9

Enterobakterien sind fakultativ anaerobe-> können unter luftausschluss wachsen

Mittels methylrotprobe

PH 4,4:
Rot-> Formiat, Acetat, lactat, succinat

PH6,2:
Gelb-orange-> ethanol, 2,3-Butandiol

Question 10

Nachweis der Butandiolgärung

Answer 10

Mittels Voges-Proskauer-Reaktion

Oxidation von Acetoin mittels O2 zu Diacetyl
Diacetyl +Kreatin-> rot braunes Kondensationsprodukt

Question 11

Nachweis von Citrat-Verwertung

Answer 11

Alkalisierung durch Decarboxylierung von citrat

Prinzip: stöchiometrischer Verbrauch von Protonen

Nachweis der alkalisierung mittels Bromthymolblau

Question 12

Enterobakterien

Answer 12

Gram-, oxidasenegativ, nicht sporulierende, fakultativ aerobe Stäbchen

zb
Escherichia coli 
Raoultella fertigen
Enterobacter 
Citrobacter