Practica 12. Diagnostico genetico molecular Flashcards
es una enfermedad autosomica recesiva que se caracteriza por la alteracion de las celulas epiteliales
fq
en la fq es el _____ donde se presenta mayor tasa de morbilidad y mortalidad
pulmon
fq, es el transtorno genetico letal mas comin en las poblaciones de ascendenci del norte de
Europa
fq se presenta en 1 de cada
2500 nacimientos
fq 1 de cada 25 personas es portador
heterocigoto
fq es causada por diferentes mutaciones en el gen que codifica para la proteina:
reguladora de la conductancia transmembranal de la fq (cftr)
cftr funciona como
un canal de cloro
cftr controla la secrecion de
bicarbonato e inhibe el transporte de sodio
proteina es un miembro de la superfamilia
de transportadores del casete de union a atp (abc)
en la proteina se comprenden 2 regiones dee 6 segmentos transmembranales, cada una conectada a un dominion de union a nucleotidos (nbd1, ncd2) que une atp asi como un
dominio regulador (r)
el canal se une cuando el dominio R es fosforilado por la proteina
cinada A (pKa) y el ATP se une a los NBD
la homeostasis adecuada de la superficie de las vias respiratorias permite el transporte eficaz de la
mucossidad que sale de las celulas caliciformes de la superficie de las vias respiratorias y glandulas submucosas
la regulacion adecuada del bicarbonato y el ph permite que se forme
moco normal, lo que facilita la formacion de un gen el 2 capas que optimiza la limpieza mucociliar y la defensa de las vias respiratorias
el agotamiento del liquido de la superficie de la vias respiratorias se produce por la ausencia de
secrecion de liquido mediada por cftr, lo cual disminuye la profundidad del liquido de la superficie de la superficie de las vias respiratorias
la disminuciion del transporte de bicarbonato contribuye a
un ph acido
se han descrito mas de ______ mutaciones en cftr
2000
____ mutaciones causan la enfermedad
400
mutacion mas frecuente presente en el 90% de los enfermos de fq
delecion de los nucleotidos CTT del exon 11
-F508
-F508 resulta de la perdida del aa fenilalanina en la posicion
508 de la proteina
por la delecion se produce una proteina que no
se pliega correctamente y degrada la celula
mutacion -I507 es
-menos frecuente
-perdida de la isoleucina 507
-delecion del triplete ATC
refiere una variedad amplia de tecnicas que modifican la secuencia de adn silvestre/original en regiones de longitud variable, deleciones o inserciones, pudiendose incluso trar de cambios puntuales de un solo nucleotido
mutagenesis dirigida
la secuencia blanco puede ser amplificada aun cuando no haya 100% de complementariedad con la secuencia de los primers—
disminuyendo la t° de hibridacion/alineamiento para favorecer la hibridacion del primer modificado
se puede emplear un enfoque pcr cambiando de 1 a 3 bases en un segmento de adn determinado, sintetizando
primers para pcr que lleven estos cambios
el diagnotico genetico molecular permite indetificar una enfermedad por medio del
estudio de cambios en el genoma de una persona
se diseña un primer 5’ que tenga un cambio puntual (sustitucion de C por G) cercano de la
mutacion-f508
el cambio introduce un sitio de corte especifico para la enzima de restriccion
Mbol (5,-gatc-3’) en el alelo sano
el primer 3’ se diseña para
abarcar un sitio de corte constitutivo que sirve como control de la digestion
alelonormal general un producto de amplificacion de
262pb
alelo -f508 produce amplifacion de
259pb
las muestras se corren en un gel agarosa al
4%
la banda de 201 pbdel alelo normal se puede diferenciar de la de 215pb correspondiente
al -f508
las secuencias alineadas se escriben con letras que representan los nucleotidos en
filas
filas… que por convencion corresponde a la cadena positiva en direccion
5’-3’ de izq-der
los nucleotidos alineados aparecen en
columnas sucesivas
se pueden observar los nucleotidos que ocupan las diferentes posiciones en las
diferentes secuencias y comparar
ttt codifica para
fenilalanina
codifican para fenilalanina
uuu
uuc
codifican para isoleucina
auu
auc
aua
deleciones que causan la perdida de fenilalanina
tct
ctt
la ultima posicion depende el dna
molde
para diferenciar entre mutacion -f507 y f508 se utiliza
la enzima de restriccion BGIII, que presenta cortes escalonados en la secuencia especificade reconocimientp
