8.PCR Flashcards
es una herramienta altamente sensible que puede amplificar selectivamente
pcr
la pcr se utiliza para producir cantidades exponencialmente grandes de una secuencia especifica de ADN a partir de
trazas o cantidades muy pequeñasde material genetico denominado plantilla o molde de ADN
la pcr, en teoria solo se necesita una unica hebra intacta de ADN molde que se encuentre presente
en una mezcla compleja de moleculas de ADN sin purificacion previa
componentes de la reacción:
-buffer de reaccion
-dNTPs
-ADN polimerasa termoestable
-Dos oligonucleotidos (cebadores o primers) de ADN
-ADN molde
componentes
mantiene un ph 8.0 y contiene MgCl2 como cofactor enzimatico
buffer de reaccion
componentes
(adenina, guanina, timina, citosina)
para incorporarse a las nuevas cadenas de adn
dNTPs
componentes
-flanquean y delimitan la region que sera amplificada sirviendo cada uno como punto de partida para la polimerizacion de cada una de las cadenas complementarias
-reconocen e hibridan/unen especificamente una secuencia complementaria del ADN dentro de un genoma completo
dos oligonucleotidos (cebadores o primers) de adn
componentes
en cantidades diminutas que contiene la secuencia blanco que se desea amplificar
ADN molde
es la replicacion o copia del material genetico que se lleva a cabo bajo 3 principios moleculares
amplificacion por pcr
3 principios moleculares, que conforman en su conjunto un ciclo de pcr son:
-desnaturalizacion
-alineamiento
-extension
_______ del ADN doble cadena para generar cadenas sencillas lo cual se consigue incrementando la t°
desnaturalizacion
__________ (hibridacion/union) de los primers a la secuencia especifica en el ADN molde
alineamiento
______ o sintesis por accion de la ADN polimerasa
extension
el primer provee
el 3’oh
los oligonucleotidos estan formados por
+20nucleotidos
despues de 35 ciclos de reaccion habra
2^35 moleculas de ADN a partir de una sola
la pcr involucra una serie de ciclos repetitivos con etapas de desnaturalizacion, alineamiento y extension, los cuales se llevan a t° diferentes, que son:
94
52
72
respectivamente
posee un bloque de aluminio en donde se colocan los tubos de reaccion para que sean rapidamente calentados, enfriados y/o mantenidos a diferentes t°s por periodos programables de tiempo a traves de un numero determinado de ciclos de reaccion
termociclador
al finalizar el numero de ciclos programados de reaccion, las muestras son
mantenidas por el equipo a baja t° (4° p ejemplo) para detener la reaccion y permitir que enseguida sean analizados los productos de reaccion
en el equipo se pueden programar y almacenar diferentes programas con diferentes
temperturas T
tiempor t
X numero de ciclos
para recuperarse y realizar en cualquier momento con las muestras y protocolos de estudios adecuados
en el genoma humano hay alrededor de _____ millones de pares de bases, siendo el 99% identico entre los diferentes individuos
3,500
no controlan ningun rasgo conocido ni tiene funciones conocidas
regiones loci de nuestros cromosomas
son basicamente direcciones o ubicaciones geneticas
los loci (plural)
puede tener diferentes formas o tipos; estas diferentes formas se llaman, alelos
un solo locus (singular)
un locus puede ser bi-alelico con 2 formas diferentes o polimorfico con
muchas formas diferentes
se refiere al uso de metodos geneticos moleculares para determinar el genotipo de una muestra individual de adn
huella genetica
es el conjunto particular de variaciones geneticas (polimorfismos), ya sea marcadores geneticos o alelos
genotipo
si las huellas geneticas obtenidas de dos muestras biologicas coiciden se asume que dichas muestras proceden
del mismo individuo o de gemelos homocigotos
las secuencias polimorficas de adn empleadas para la determinacion de la huella genetica son
regiones no codificantes que contienen segmentos de repeticiones cortas en tandem o STR localizadas en distintos cromosomas
la huella genetica se determina analizando muchos loci para
mejorar el poder de discriminacion de las pruebas
es la capacidad del analisis de la huella genetica para distinguir la diferencia genetica entre diferentes individuos
poder de discriminacion
cuanto mayor sera el numero de loci analizados, mas
poderosa sera la capacidad de discriminacion
la determinacion de la huella genetica requiere la amplificacion de las regiones polimorficas mediante
la pcr
a una t° mayor a _____ no hay da doble cadena que se mantenga en duplex, se rompen los puentes de hidrogeno
90
ej de primer/cebador para pcr especificos del str
bxp007
t° de desnaturalizacion
94
t° de alineamiento
52
t° de extension
72
t° de mantenimiento
12
numero total de ciclos en esta practica
38
