4. Determinacion del contenido de proteinas Flashcards
la cuantificacion de proteinas suele ser necesaria antes de su aislamiento o purificacion y si analisis mediante
cromatografia
electroforesis
inmuoensayos
proteinuria o albuminuria
los riñones no funcionan adecuadamente, las proteinas pueden pasar la orina
niveles elevados de proteinas en el lcr
hiper proteinorraquia
*menigitis, encefalitis, tumor medular o puncion sanguinolenta
las proteinas estan codificadas por genes y determian la
-forma
-funcion
-fenotipo
de un organismo
es el conjunto completo de proteinas en un organismo
proteoma
es el estudio
-ubicacion
-funcion
-estructura
-cantidad
-interaccion de las proteinas entre si y su entorno
proteomica
en estudios de proteomica cuantitativa se requieren cuantificar los extractos proteicos analizados para el estudio de las variaciones de los niveles de
expresion de proteina en determiandos momentos y bajo ciertas condiciones de la celula
permite detectar aquelas proteinas cuya
-presencia
-ausencia
-alteracion se correlaciona con
determinados estadios fisiologicos
para estudiar una enzima en el laboratorio se debe tener en cuenta
-cantidad total del proteina presenta
-nivel de actividad enzimatica
con el tiempo muchasenzimas pierden su activdad aunque la proteina total presente en la muestra permanece
constante
integran una grupo de macromoleculas que participan en una gran variedad de funciones como la
-respuesta inmunologica
-catalisisinzimatica
-mantenimiento de presion osmotica oncotica del plasma
-procesos de coagulacion
proteinas plasmaticas
casi todas las proteinas del suero se producen en el higado, a excepcion de
-componentes del complemento
-inmunoglobulinas
proteinas plasmaticas
son catabolizadas principalmente por
-macrofagos
-celulas del endotelio capilar
-proteinas pequeñas se pierden pasivamente en el:
*glomerulo
*pared intestinal
proteinas plasmaticas
su determinacion en suero proporciona informacion sobre
-fx gastrointestinal
-hepatico
-hematologico
-inmunologico
-renal
fracciones
albumina
globulina a1,a2,b y y
-es la proteina mas abundante del plasma
-contribuye a mantener el liquido dentro de los vasos sanguineos evitando que se filtre a los tejidos
-principal componente proteico del lcr
albumina
niveles elevados de proteinas en sangre
hiperproteinemia
hiperproteinemia puede presentarse en
-amiloidosis
-hemoconcentracion consecutiva a deshidratacion
-mieloma multiple
-gammapatia monoclonal de significado incierto
situaciones como traumatismos o infeccion el higado incrementa
la sintesis de proteinas como respuesta protectora para contribuir a limitar el daño y promover la reparacion
en la reaccion de fase aguda incrementa
-concentracion toal
-propocion de las fracciones
niveles normales
6.2-7.8 g/dL
nivel normal de albumina
3.5-5.0 g/dL
55%
nivel normal de globulina
2.0-2.5 g/dL
38%
concentracion de fibrinogeno es
0.2-0.45g/dL
7%
niveles bajos de proteina en sangre
hipoproteinemia
hipoproteinemia puede deberse
-disminucion de la ingesta de proteinas
-absorcion intestinal deficiente
-disminucion de la sintesis proteica en enfermedades hepaticas, higadograso o desnutrcion
debe identificarse algo medible que sea proporcional a la concentracion de
la sustancia de interes
describe la tecnologia que se centra en la interaccion de los materiales biologicos con la luz y otras formas de energia radiante cuya unidad cuantica es el foton
biofotonica
es la energia que viene de una fuente y puede viajar a traves de la materia o el espacio
radiacion
en el espectro electromagnetio de la luz se observan los colores asociados
con las longitudes de onda de la luz visible
la luz puede interactuar con las biomoleculas de varias maneras:
-reflexion
-absorcion
-transmision
-dispersion de luz
establece que cuando un soluto absorbe luz de una determinada longitud de onda, la absorbancia es directamente proporcional a la concentracion del soluto en solucion
ley de beer
las proteinas no absorben suficiente luz para
analizarlas por si mismas
se basa en la absorcion de la luz en funcion de la longitud de onda
ensayo de bradford
la eliminacion de estas longitudes de onda de la luz visible le da
al material su color
el colorante coomassie brillant blue G-25 de la solucion de Bradford en su estado CATIONICO libre de proteinas presenta un colo ROJIZO debido a que el pico de absorcion de luz es de
470 nm (luz azul)
las propiedades quimicas unicas del colorante le permiten interactuar con las cadenas lat, o grupos r, de aa especificos convirtiendo en una forma SIN PROTONAR de color AZUL debido a la eliminacion de longitudes de onda amarillas de la luz a
595nm por el complejo proteina-colorante
a mas proteinas
mas intenso el color azul
el ensayo permite medir los resultados
-cualitativamente: simple vista
-cuantitativamente: espectofotometro
el ensayo de bradford es simple, altamente sensible (1ug/ml) y no se ve afectado por muchos reactivos y productos quimicos del lab a diferencia de otros ensayos colorimetricos como
biuret
lowry
leucina
no polar
estructura peptidica
interaccion hidrofogiba
no polares
leucina
triptofano
phenilalanina
positivos
histina
argininca
lisina
polar nuetro
tirosina
el colorante se une a las proteinas mediante 3 tipos de interacciones
-principal: del colorante con proteinas con la arginina (muy basico) interactua con los grupos sulfato cargados negativamente a traves de interacciones electrostaticas
-otras: mas debiles
*interaccion con anillos aromaticos del colorante cromassie g-250 con los anillos aromaticosde aa como triptofano a traves de interacciones de pilamiento de electrones
-interactua con aa no polares que tienen grupo r hidrofobicos
-principal proteina de la sangre
-tiene 609aa
-peso molecular: 67kda
-64 aa interactuan fuertemente con el cromassie g-250
*27arg
*2 triptofanos
*19tiro
*16 his
albumina humana
-mucho mas grande que el aa tipico
-854daltos
-facil de visualizar
-pocas moleculas pueden unirse y recubrir una proteina tipica en solucion
-esta union es el principio del ensanyode bradfor
molecula del colorante coomassie
