9.Analisis electroforetico de adn en gel agarosa Flashcards
es una de las herramientas moleculares fundamentales para aislar y purificar macromoleculas en base a su movilidad dentro un unsoporte o matriz solida en un campo electrico
electroforesis
los acidos nucleicos de distinta procedencia pueden ser identificados en base a sus
corrimientos electrofreticos y su integridad o ausencia de degradacion pueder ser tambien determinada
para saber si se tiene o no producto amplificado las moleculas de acido nucleico se tienen que analizar usando
electroforesis en gel y lueg visualizarlo usando una tincion de ADN
tincion fastblast
-para geles agarosa
-contiene un compuesto cationico colorido cuyas moleculas son atraidas
-se unen a los grupos fosfato negativamente cargados del adn a ph ligeramente basico
tincion con promuro de etidio BrEt
-se intercala entre las bases
-permite visualizar/detectar hasta 1ng de adn doble cadena (dsDNA) al emitir fluorescencia rojo-naranja (560nm) bajo luz ultravioleta (260-360nm)
nm de la fluorescencia rojo-naranja
560
nm de la luz uv
260-360
las pequeñas cantidades de adn en las muestras biologicas no pueden ser
visualizadas previo a su amplificacion por pcr
dado que las moleculas de adn tienen carga se pueden separar mediante
una corriente electrica
en electroforesis de gel agarosa, el adn se coloca en agarosa solificada que forma una matriz que contiene poros que varian
de tamaño segun la concentracion de agarosa
el movimiento a traves del gel ocurre cuando se aplica la corriente electrica a traves
del gel
dado que el gel esta sumergido en el buffer salino, la corriente viajara a traves del
buffer y gel, llevando consigo adn cargado (-) hacia el anodo (+)
el tamaño de una molecula de adn es su peso molecular, el cual se expresa como
el numero de pares de bases que forman la molecula
las moleculas de mayor peso molecular, presentan
menor movilidad electroforetico y por lo tanto quedan mas cerca del pozo
el buffer de carga contiene glicerol, el cual incrementa
la densidad de la muestra y asegura que entre en el pozo del gel agarosa al cargar la muestra
