Mecanismos de Apresentação Antigénica

Question 1

Quem leva proteínas maiores: MHC I ou MHC II?

Answer 1

MHC II leva proteínas maiores que MHC I

Question 2

Proteínas responsáveis por transporte de péptidos para o interior do RE

Answer 2

TAP 1 e TAP 2:

- Transportadores associados a Processamento de Ags;

Question 3

Proteossoma -> Imunoproteossoma

Answer 3

Para conseguir passar por TAP e encaixar em MHC

• Nas células APC;
• Substituição de subunidades ativas no protessoma;
• Ação do IFN-gamma e TNF-alpha;

Question 4

MHC I: estrutura

Answer 4

Três estruturas:

• Precisa de beta 2 microglobulina para estabilizar;
• Tapasina: aproxima MHC de TAP;
• Calnexina: chaperone, quando se liga a beta 2 microglobulina, troca com Erp57

Question 5

Complexo MHC I:péptido

Answer 5

1. • MHC I alfa liga-se à calnexina até B2m se ligar;
2. • MHC I alfa:B2m liberta-se da calnexina, ligando-se a um complexo de chaperones (calreticulina, Erp57) e liga-se ao TAP com ajuda da tapasina;
3. • As proteínas citosólicas e os produtos ribossomais defeituosos são degradados pelo proteossoma;
4. • TAP entrega os péptidos ao retículo endoplasmático;
5. • Péptido liga-se ao MHC I e termina o seu folding;
6. • MHC I liberta-se do complexo TAP e é exportada para a superfície membranar da célula.

Question 6

E se MHC expressar péptido self?

Answer 6

NÃO há resposta => timo já eliminou todas as células T que respondem a Ags self

Question 7

Mecanismos de evasão virais com ação no complexo MHC I:péptido

Answer 7

• Evasinas virais US6 e ICP47 bloqueiam a apresentação antigénica, prevenindo o movimento de péptidos pelo TAP;
• Proteína adenoviral E19 compete com tapasina e inibe descarga de péptidos para MHC I;
• Proteína mK3 do HSV é uma ligase E3-ubiquitina, que sinaliza o MHC I para ser degradado pelo proteossoma;

Question 8

Complexo MHC II:péptido

Answer 8

Péptidos que se ligam ao MHC II formam-se nas vesículas endocíticas;
- VIA endocítica:
º Ag é endocitado para vesículas intracelulares;
º Nos endossomas precoces, com pH neutro, as proteases endossomais estão inativas;
º A acidificação das vesículas ativa as proteases e degrada o Ag em fragmentos peptídicos;
º A vesícula com os péptidos funde-se com vesículas contendo MHC II;

Question 9

Cadeia invariável no complexo MHC II:péptido

Answer 9

CLIP = Class II associated Invariant chain Peptide

• A cadeia invariável liga-se ao sulco na molécula de MHC II;
• A cadeia invariável é inicialmente clivada, deixando um fragmento no sulco do MHC II;
• A cadeia invariável sofre uma segunda clivagem, formando CLIP, que continua no sulco do MHC II e evita que péptidos sejam carregados em MHC II;

Question 10

Formação do complexo MHC II:péptido

Answer 10

º CLIP está a “bloquear” MHC II;
º Ags endocitados são degradados em péptidos nos endossomas, mas o CLIP está a bloquear a sua ligação a MHC II;
º HLA-DM liga-se a MHC II e liberta CLIP, permitindo que outros péptido se liguem ao MHC II;
º MHC II viaja até à superfície da membrana celular;

Question 11

HLA-DM e HLA-DO

Answer 11

º HLA-DM tem função estabilizadora => é uma molécula não clássica de MHC II; que não apresenta Ag, mas contribui para carregamento;
º HLA-DO pode inibir HLA-DM;
º HLA-DM é estimulada por IFN gamma

Question 12

Quais os péptidos apresentados ao MHC?

Answer 12

Os péptidos com maior afinidade => conferem maior estabilidade ao MHC

Question 13

Processamento e apresentação de Ags

Answer 13

• Via citosólica (Ags endógenos);

- Via endocítica (Ags exógenos);

Question 14

Via citosólica

Answer 14

Ags endógenos;

• Ação de TAP;
• Processamento por MHC I;

Question 15

Via endocítica

Answer 15

Ags exógenos;

• São endocitados ou fagocitados;
• Processamento por MHC II;

Question 16

Apresentação cruzada

Answer 16

Célula expressa os 2 MHC ao mesmo tempo:
º Ags endógenos apresentados por MHC II;
º Ags exógenos apresentados por MHC I;

Question 17

Componentes essenciais para apresentação de antigénio

Answer 17

1. Péptidos;
2. TCR;
3. MHC;

Question 18

Exceções no processamento e apresentação antigénica

Answer 18

• Superantigénio: interagem num sítio diferente:
  º Porção transmembranar;
  º Moléculas solúveis - Ativação POLICLONAL;
  º Muitos dos superantigénios são tóxicos;
  º Há ativação descontrolada de diferentes braços da resposta => ex: síndrome do choque tóxico;

Question 19

Células APC

Answer 19

Antigen presenting cells, podem ser:
- Profissionais: células dendríticas, macrófagos e células B
º Expressam constitutivamente MHC II e coestimuladores;
º Início de resposta muito regulado;
º Elevada eficiência em internalizar e processar Ags;
- Não profissionais: todas as células nucleadas
º Expressão de MHC II pode ser induzida;
º Não têm grande capacidade endocítica nem de processamento antigénico;
º Não expressam coestimuladores;
- Atividade coestimuladora é regulada pelo reconhecimento de PAMPs / agentes patogénicos => para limitar reconhecimento do self;
LOCALIZAÇÃO DAS APC NOS OLS:
º Células dendríticas: região paracortical (onde também estão a maioria das células T);
º Macrófagos;
º Células B: centros germinativos;

Question 20

Célula dendrítica

Answer 20

APC

• A APC “mais altruísta”: amplifica as outras;
• Apresenta sobretudo Ags extracelulares;
• Ação sobretudo em infeção viral => capaz de passar a MHC I;
• 2 tipos: convencionais (cDC) e plasmacitoides (promovem resposta antiviral, promovem diferenciação de cDC a partir de monócitos e promovem apresentação antigénica pelas cDC)

Question 21

Macrófagos

Answer 21

APC

- Não é célula apresentadora por definição => função paralela: amplificam ação;

Question 22

Células B

Answer 22

APC
- A mais diferente: não faz fagocitose => transporte mediado por BCR;
º BCR reconhece Ag;
º Célula internaliza Ag;
º Apresentação do Ag a MHC II do linfócito B;
- Importante para class switch e formação de células de memória;
- Precisam de infeção para haver coestimulação;

Question 23

Principais vias de entrada de Ag

Answer 23

Pele;
Trato GI;
Trato respiratório;

Question 24

Onde são captados os Ags pelas APCs?

Answer 24

Os Ags são captados nos tecidos pelas APCs;

Os Ags que circulam na corrente sanguínea são captados pelas APCs no baço;

Question 25

Migração das células dendríticas

Answer 25

- Células dendríticas imaturas nos tecidos periféricos encontram patogénios e são ativadas por PAMPs; - Sinalização TLR induz CCR7 e promove processamento de Ags patogénicos; - CCR7 direciona migração para tecidos linfoides e aumenta expressão de coestimuladores e MHC; - Células dendríticas maturas na zona T apresentam Ag a células T naive; º DC imaturas: CR4 e LFA4; º DC maturas: CCL18 (DC-CK);

Question 26

Migração dos linfócitos para órgãos linfoides secundários

Answer 26

Através: - HEV (high endotelial venules); - Circulação normal; 1. Rolamento (seletinas: L-seletina interage com hidratos de carbono); 2. Ativação (quimiocinas: CCL21); 3. Adesão (integrinas: LFA-1); 4. Diapedese (quimiocinas: CCL21 e CXL12);

Question 27

Seletinas: HEV vs. circulação normal

Answer 27

L-seletina liga-se a: HEV: CD34 ou GlyCAM-1 => reconhecimento da CCL21 pelo CCR7 das células T naive => ligação CCR7:CCL21 Circulação normal: MAdCAM-1;

Question 28

Ligação CCR7:CCL21

Answer 28

Ativa LFA: - Aumenta a sua afinidade para ligandos nas células dos HEV (ICAM-1 e ICAM-2); - Aumenta mobilidade e dirige-se à zona de contacto com HEV;

Question 29

Integrinas: ligação a moléculas de adesão

Answer 29

- HEV: LFA-1 pouco reativa liga-se a ICAM-1; - Endotélio das mucosas: LPAM-1 liga-se a MAdCAM-1; - Endotélio ativado: VLA-4 liga-se a VCAM-1;

Question 30

O que é que as células T naive reconhecem?

Answer 30

Gradientes de ligandos CCR7 (CCL21 e CCL19); Produção de CCL18 pelas DCs; - Migram para as zonas T e contactam com várias APC; - Quando não encontram Ag, saem dos nódulos linfáticos pelos sinusoides corticais; º Gradiente de S1P (lípido) = direciona cél. T naive pelos sinusoides até vaso linfático eferente; - Quando encontram o seu Ag específico, são ativadas pela apresentação antigénica pelas DCs e perdem a capacidade de sair do nódulo (diminui recetor S1P); º Células T ativadas diferenciam-se em células efetoras e saem do nódulo linfático (aumenta recetor S1P);

Question 31

Ativação das células T naive

Answer 31

- Células T ligam-se a APC por interações LFA-1:ICAM-1 de baixa afinidade; - Ligação de TCRs subsequente sinaliza LFA-1; - Alterações conformacionais no LFA-1 aumentam afinidade e prolongam contacto entre as células; PARA ATIVAR CÉL. T NAIVE: º Interação Ag / TCR; º Coestimulação; º Citocinas: IL-2; I. MHC:péptido inicia processo que leva à formação de complexo de sinalização; II. p56 associadas a CD4/8 fosforila ITAMs para criar zonas de ancoragem para ZAP-70; III. ZAP-70 fosforila moléculas que recrutam componentes de vias de sinalização (IP3, DAG, GEF) IV. São ativados fatores de transcrição (NFAT, AP-1, NFkB), que promovem transcrição de IL-2 (fator de sobrevivência e de diferenciação); V. Produção de IL-2 induz entrada da célula T no ciclo celular => proliferação T; VI. Cross link de CD28 coestimula a ativação T e induz expressão de CTLA-4 (CD152); VII. CTLA-4 liga-se a B7 (CD80 ou CD86) com maior avidez do que ao CD28 e dá sinais inibitórios às células T ativadas;

Question 32

CD3

Answer 32

Rodeia TCR; | Sinaliza interação da célula dendrítica e da célula T

Question 33

LICENSING: ativação das células T naive

Answer 33

CD8+ precisa da interação de CD4+ com célula dendrítica para ser ativada

Question 34

CD27

Answer 34

Expresso em células T naive; Liga-se ao CD70 das células dendríticas; Potente sinal coestimulador precoce para as células T

Question 35

4-1BB

Answer 35

Expresso em células T naive; Liga-se ao 4-1BBL das APCs; Duplo sinal ativador: para linfócito T e APC;

Question 36

CD40L

Answer 36

Ligação CD40:CD40L - Promove expressão de B7 nas APCs; - Promove secreção de citocinas que ativam células T º Promove e mantém proliferação;