Lab 8

Question 1

PCR q première étape

Answer 1

ARNm doit etre converti en ADNc: transciption inverse. Rend ARN simple brin en ADN double brin. Un enzyme va enlevé ARN simple brin et va le remplacer avec un ADN complémentaire a celui qui vient d’etre crée

Question 2

PCRq

Answer 2

Utiliser pour évaluer quantité d’ARN dans un échantillion

Question 3

Différence entre PCR traditionnel et quantitatif

Answer 3

PCR quantitatif c’est détecter a chaque cycle
pareille a les mems phases:
- Phase exponentielle (meilleur phase, amplification parfaite, réaction optimale)
- Phase linaire
- Plateau (on manque de dNTP, manque d’amorces)

Question 4

Phase exponentielle

Answer 4

Quand on compare differents ARN on regarde a leurs phases exponentielles. quantifié. comparé quantités.

Question 5

qPCR threshold ou seuil

Answer 5

Dès que fluoresence option seuil, ccycle seuil est la région ou seuil arbitaire obtenue

Question 6

Si tu fait différents cycle PCR,

Answer 6

Réaction avec plus d’ADN va etre la première a atteindre seuil. C’est comme sa qu’on peut comparer réaction

Question 7

niveau de fluoresence trouver comment

Answer 7

avec SYBR Green.
1) hybridation
2) amorce se lit
3) polymérisation, SYBR green se lie
4) UV rejetter pour voire fluoresence a la fin du cycle

Question 8

Désavantage de SYBR green

Answer 8

va se lier a n’importe qu’elle séquence d’ADN. On commence souvent avec autre ADN non spécifique. Amorces doivent donc crées des amplifications très spécifiques

Question 9

Sondes d’ADN - concept de FRET

Answer 9

Les sonde vont etre vendue avec amorces. la sonde doit etre entre les 2 amorces. cette sonde a 2 bouts (1 bout fluorephore et l’autre bout un extinction). Le fluorophore va etre ecxité et va transmettre énergie a extincteur qui arrete la fluoresence d’etre exprimer. La polymérase va dégrader la sonde qui va permettre a celui-ci a relacher fluprescence car agent d’extinction est loin. A chaque cycle on dégrade de plus en plus de sonde

Question 10

Désavantage et avantage de SYBR

Answer 10

couteux
spécifique

meme si amorces va a mauvais adn et fait plein de réplication sa va quand meme faire le bon niveau de fluoresence

Question 11

Quantification absolue ou relative

Answer 11

Si molécule utilisé provenant d’un gene d’interet ont été transcit en absence ou présence de drogue: quantification absolue

Est-ce que on a une augmentation/diminutaion relative de l’ARNm est suffisante dans mon expérience (est beaucoup + utilisé)
- quantification relative

Question 12

Quantification absolue

Answer 12

1.Dilution
2. réaction PCR quantitatif de chaque dilution

Le niveau expérimental d’ARNm du GOI a partir du Ct expérimental

Question 13

FRET

Answer 13

la sonde

Question 14

Quantification relative

Answer 14

courbe standard est pour absolue, tu dois faire une courbe standard pour chaque différent pcr

relative tu compare avec deux valeurs de Ct enter 2 échentillons. Échantillon traité et controle expression relative = 2 exposant delt Ct.

delta Ct = CtSOItraité - Ct SOI controle

Ct = cycle seuil

Sa ne prend pas en considération quantité d’ARN

Question 15

Quantification relative ajuster

Answer 15

2 memes échantillions - gene de référence et séquence d’interet. Peut importe gène de référence est toujours pareille (par exemple n’est définitivement pas traité par la drogue)
Quantification comparative (relative) deltadelta Ct

Question 16

QUantification relatice deltadelat Ct

Answer 16

Fait un controle pour relative et SOI. Avant ajouter drogue et après ajouter drogue pour les 2. RÉférence ne devrait pas changer. SOI devrait changer

Trouve la moyenne de chaque 4 Ct
deltadeltaCt = delta Ct traité - delta Ct référence

delta Ct traité = CtSOI traité - Ct référence traité

DE;ta Ct controle = CtSOI controle - Ct référence controle

Question 17

réponse relative?

Answer 17

20x plus de traité que controle. RELATIF au controle