Lab 1

Question 1

PCR - what does it stand for et combien étapes

Answer 1

Réaction de polymérastion en chaine - 3

Question 2

How much DNA amplify will exist et qu’est ce quon a besoin pour une PCR

Answer 2

On veut amplifier a des dixiène de millions de copies en utilisant:
- ADN polymérase thermostable (survivre dénaturation de 90 degé celcius)
- Amorces (ADN simle brin de 20-25 nucléorides
Des nucléotides triphosphates

Question 3

Étape 1 PCR (temp trops élevé et pas assex élevé)

Answer 3

• Dénaturatioin
  
  • Briser liasion H, ADN double brin devient simple brin

Si temp est trops basse lors de dénaturation:
- ADN sb va se rehybrider

Si temp trops élevé
Dénaturation de la polymérase

Question 4

Étape 2 - explique et temp trops élevé et pas assez

Answer 4

• Hybridation
  
  • Amorces peuvent coller a ADN
    Température nécessaire est calucler grace a équation pas a apprendre par cœur - un Tm pour sens et un pour anti-sens. Prend le plus bas et soustraire 5 degré cela sera Ta (température d’hybridation)

TA trops basse:
Liaison non-spécifiques des amorces résultant en produits indésribles, donc il peut y avoir 2 bandes

TA trop élevé
Plus élevé qu’un TM d’une des amorces donc il ne peut meme pas s’hybriderDais

Question 4

Étape 3 PCR

Answer 4

Élongation
Polymérase polymérise de 5’ a 3’ a partir de l’amorce
A 72 degré celcius

Question 4

Amorce ADN ou ARN

Answer 4

• ADN
• Délimite la région qu’on amplifie!!!! Thats why il y a des séqances spécifiques trouver

Question 4

AMorce sens et antisens début et direction

Answer 4

Amorce sens et antisens
- Sens se lit a brin antissens (3’ a 5’) -ATG

• Antisens se lit a brin sens (5’ a 3’)

Si on écrit séquence amorce quel direction
5’ a 3’

Question 5

TM amorces imporantance: keep in mind when making amorces

Answer 5

TM des 2 amorces devrait etre très proch

Question 5

Keep in mind when making amorces

Answer 5

On ne veut pas que amorces s’hybide (sur eux-mêmes ou sens et anti sens)

Question 6

sous-clongage?

Answer 6

Sous clonage:
- Lab 1-4
Mettre amplicon dans plasmide

Question 7

Comment ajoute ces sites de restirction dans amplicon

Answer 7

Ils doivent etre dans amorce!

Question 8

AMorces sens et antisens contiennt

Answer 8

Amorce sens contient:
- Random 6 nucléotides additionnels pour assurer une activité optimale de digestion par HindIII
- Site de reconnaisance restriction
- Ajustement de cadre de lecture
- Séquence codante (commence avec ATG donc au lieu de U il y a T)

Amorce antisens contient:
Meme que sens sauf pour cadre de lecture

Question 9

Tampon

Answer 9

• Plus grand % pour étudier molécules plus petites

Question 10

Comment SYBR safe se fait?

Answer 10

Comment SYBR safe se fait?
- Entre dans ADN, s’intercallent
- Quand on veut voire gel, ecxite gel avec UV et SYBR safe va émettre fluorescence

Question 11

Comment électrophorèse fonctionne

Answer 11

Comment électrophorèse fonctionne
- ADN sont négatif odonc va de - a positif (va de électrode - a anode +)

Question 12

Ce semestre quel type d’ADN va etre analyser a electrophorèse

Answer 12

Linéaire

Question 13

Info de électrophorèse

Answer 13

• Longueur d’un fragment ADN (marqueur d’ADN, estimation visuelle)
• Quantité d’ADN retrouvé sur gel (marqueur d’ADN, intensité de bande, doit connaitre combien on a charger marqueur)

Question 14

C’est quoi un MSC

Answer 14

Site de clonage multiple ou vecteur peut etre coupé

Question 15

Ou est ce que la transciption commence chez le sous clonage

Answer 15

• Commence au AUG du vecteur avant MAT

Question 16

Quand on choisi enzymes de restrictions quoi garder en tete

Answer 16

1.La séquence de restriction devrait pas etre au milieu de la séquence codante
2.Il faut respecter l’ordre du vecteur: l’enzyme choisi pour la séquence sens du vecteur doit etre avant (a gauche) de l’enzyme de restriction choisi pour l’enzyme antisens

Question 17

What is the name of dna polymerary

Answer 17

taq

Question 18

Combien de grammes de poudre d’agarose devriez-vous utiliser pour préparer un gel de 1.5% dans 50mL de tampon? Vous n’avez pas à ajouter les unités dans votre réponse, seulement le chiffre.

Answer 18

50/100*1,5

Question 19

Vous devez préparer une solution diluée d’une concentration de 20μM dans 0.4mL d’eau à partir d’une solution concentrée d’amorces à 2μg/μL (poids moléculaire de l’amorce est de 5000g/mol). Combien de microlitres de la solution concentrée devez-vous utiliser pour préparer la solution diluée? Vous n’avez pas à ajouter les unités dans votre réponse, seulement le chiffre.

Answer 19

converti 2μg/μL en 2μg/1x10 a la 6L et divise par masse molaire et ensuite fait c1v1 = c2v2

Question 20

figure out that calculs from practical lab exam

Question 21

Comment calculer séquence codante de chaines de nucléotides

Answer 21

1981-1772+1 = pb /3 pour trouver nombre de codons

Question 22

Amorce sens et antisens séquence complémentaire

Answer 22

En ADN. sens c'est exactement les 20 premiers et anti sens c'est complémentaire et inverse

Question 23

longueur de l'amplicon comment calculer

Answer 23

C'est la longueur entre codon arret et stop comme calculer avant + les nucléotides de reconnaisance de digestion de chaque amorse et les 6 nucléotides qui aide a la reconnaissance de chaque amorces