Lab 3

Question 1

Défi de cadre de lecture

Answer 1

• Faire en sorte que MATtag et amplicon devrait avoir un cadre de lectre ajusté
• Différents enxymes de restriciton détermine nombre de nucléotides pour ajuster

Question 2

Ou se retrouve nucléotides pour ajuster cadre de lecture:

Answer 2

Entre boite 2 (site de reconnaisance de enzyme de restriction) et boite 4 (la séquence compatible avec l’ADN.

Question 3

Peux-je ajouter n’importe qu’elle nucléotides pour ajuster cadre de lecture

Answer 3

Il faut s’assurer de ne pas faire un codon d’arret

Question 4

Pourquoi on fait le cadre de lecture au sens

Answer 4

Car Mat est a gauche en 5’

Question 5

Qu’est ce qui se passe si MAT est a droitw en 3’

Answer 5

1) Anti sens doit etre ajusté
2) Codon arret doit etre enlevé

Question 6

Comment les bactéries peuvent partager matériels génétiques:

Answer 6

1)Transformation: moyen chimique permet ADN d’entrer
2)Transduction
3)Conjugaison

Question 7

Transformation chimique naturelle?

Answer 7

Augmentation artificielle
ADN très hydrophilique et membrane est très hydrophobe donc chalenge. Ca2+ et Rb+ se lit a membrane et déstabilise. Va aussi neutraliser ADN.

Question 8

Pouruqoi ADN doit etre circulaire?

Answer 8

• Dégrader si linéaire
  
  • Ne peut pas transcire si linéaire

Question 9

Pouruqioi ampicilline?

Answer 9

Focer bactéries a garder car on besoin pour survivre. Autrement il va se débarasser de plasmide

Question 10

Pourquoi les cellules E.Coli KRX bactéries sont bonnes?

Answer 10

• Sont F1 donc pas de fertilité qui fait échange de matériel génétique avec bact.ries extérieur
  
  • Son RecA - (qui fait la recombinaison entre génome et plasmide)
  • EndA- (absence de EndA qui dégrade ADN)
  • Ils ont pas gènes ompT qui clive ARN polymérase T7 en 2

Question 11

Comment est ce que le gène de résistance a l’amipicline fonctionne
?

Answer 11

Forme B-lactamase qui donne résistance a ampicilline

Question 12

Controles négatifs

Answer 12

• Un sans ADN: aucune résistance
  
  • Un sans ligase, seulement vecteur sans enzymes, pas de colonies

Question 13

Contrôle positif:

Answer 13

Contient vecteur circulaire non digérer qui peut entrer dans bact.eis, permet de voire la compétence des vactéries. Calculs permet de savoir si oui ou non compétant. 10 a la 5 ou 6 /ug devrait etre la réponse

Question 14

vecteurs plasmides de lab contiennent

Answer 14

ORI: permet d’etre répliquer indépendament de ADN chromosomqique, dicte le nombre de copies plasmidiques
SCM: sites de reconnaisance de endoncucléase de restriction
Marqueur de sélection: amiciline resistance

Question 15

amlification linéaire vs pcr conventionnelles calcules

Answer 15

conventionnelels = 2exp1 + 2exp2….. jusque a 26 si 26 cycles

linéaire: 26 si 26 cycles

Question 16

De manière à évaluer la compétence de vos bactéries, vous avez effectuer une transformation à l’aide de 0.5 ng d’ADN. Si 1/1000 de vos cellules transformées a été étalé sur des plaques LB-agar et que 150 colonies ont été observées après une incubation d’une nuit à 37°C, quel est la compétence de vos cellules compétentes?

Answer 16

0,5ng/1000/1000 = ans
150/ans = 3x108 unités formatrice de colonies/μg

Question 17

Seul facon d’avoir colonies

Answer 17

plasmide circulaire sans bris