Lab 7

Question 1

Immunobuvardage permet

Answer 1

Déterminer identité de protéine

Question 2

Comment faire immunobuvardage

Answer 2

1) SDS Page
2) SDS linéaire et chargé
3) Petite protéine bas et haut est grand
4) Force protéines de se coller a membrane PVDF. Transfert électropgorétique des protéines dans un gel
Toute les composantes doivent etre dans un liquide

Question 3

Le sandwich

Answer 3

anode - 2 paphier filtre 0 membrane PVDF - Gel SDS - paphier filtre - cathode

Les filtre doivent etre mise dans tampon de stockage

Vont du cathode (-) a anode (+)

Question 4

anticorps primaire

Answer 4

anticorps reconnait étiquette MAT. Est monoclonale car reconnait seulement 1 bout de séquence donc une partie de protéine très spécifique

Question 5

deuxième anticorps

Answer 5

reconnait le premier anticorps, attacher avec
enzyme nommée phosphatase alcaline (sa fait la couleur) fait incolore en bleu foncer insoluble

Question 6

Poruquoi blocker ma membrane

Answer 6

anticorps sont des protéines, si on bloque pas anticorps vont se coller sur membrane

Question 7

Après mettre anticorps 1 on fait quoi

Answer 7

Lavage on enlève ecxès anticorps et liaisons non-spécifiques

Question 8

autres mécanismes de détection

Answer 8

colometricy
fluorecence
chemioluminescnece

Question 9

C’est quoi le blocage de la membrane

Answer 9

Saturation de membrane avec lait powder

Question 10

Essai enxymatique comment mesurer ARN

Answer 10

a toute 30 sec, combien de fluoresnce produit par sauvage et mutante. comparer pente

Question 11

Qunantification de la fluoresence en temps réel

Answer 11

Utilise un thermocycleur de type qPCR

On utilise tubes spécifique qui laisse UV de passer, ecxite fluoresence qui va etre enregistrer par la machine

Question 12

Réaction de PCR quantitative

Answer 12

SYBR safe (SYBR green) peut se lier a ADN double brin. A la fin de chaque cycle met UV. Dans notre cas c’est une ARN simple brin qui est dans une forme en épingle a cheveux, La séquence ARN s’appelle brocoli et lit le DFHBI et il émet fluroescence lorsque ecxité par UV

Question 13

Matrice ADN utilisé pour essai enzymatique

Answer 13

Promoteur t7: ou se lit promoteur
ARN5S:
dBroccoli
Terminateur

ARN former va faire strucure secondaire. Épingle de cheveux a 2 boucle trucs et 2 DFHBI va aller se coller au 2 boucles ou boules (sur segment dBrocolli)