Lab 6

Question 1

L’étiquette MAT contient quoi

Answer 1

Des histidines qui vont etre utilise pour purifié, va se lier a colonne IMAC

Question 2

Emplacement de étiquette et pourquoi

Answer 2

N terminale, facile a etre reconnaitre, mieux qu’a l’intérieur d e la protéine

Question 3

Comment IMAC fonctionne généralement

Answer 3

Nickel sont sur colonne et vont se lier a nickel

Question 4

Qu’est ce qui maintient nickel au billes

Answer 4

Ni est attacher par de l’eau et IDA (2 groupements carboxyles et azote de l’IDA et 3 molécules d’eau

IDA s’attache a billes

Question 5

Quel acide aminé a affinité pour Ni

Answer 5

pleins a.a surtout histidine

Question 6

comment pratéine attacher a colonne

Answer 6

his de étiquette MAT (qui a 4 His par étiquette prend place de eau, donc BEAUCOUP d’affinité)

Question 7

Comment élué les protéines voulue de la colonne

Answer 7

L’imidazole va competitionner avec l’histidine de MAT et prendre sa place.
- Petite concentration d’imidazole pour les protéine non mat attacher avec faible affinité
- Grande concentration pour enlevé MAT qui sera toute seul

Question 8

Problème d’imidazole

Answer 8

Inhibe enzyme T7

Question 9

Comment enlevé imidazole

Answer 9

Technique de dessalage par ultrafiltration (utilise un petit filtre)

Question 10

Technique de dessalage

Answer 10

membrane poreuse filtré, laisse seulement passer plus petit que 50 kDa. TOute les contaminants passe

Question 11

On veut remplacer quelles tampon

Answer 11

Tampon d’élution avec tampon de stockage (Tween 20 va faire en sorte que protéine garde sa forme)

Question 12

SDS-Page( faite de quoi?)

Answer 12

faite de polyacrylmamide

Question 13

La polymérisation nécessite

Answer 13

du persulfate d’allumium et un catalyseur TEMED

Question 14

Gel % et pores

Answer 14

Un gel avec un plus grand % d’acrylamide a des pores plus petit

Question 15

Comment sds-page gel de protéine focnctionnne

Answer 15

électrode - a anode +, migration proportionnelle a la taille, les protéine vont avoir une charge négatif. Petite protéine vont descendre plus rapidement

Question 16

Pouruqoi les protéines sont négatif?

Answer 16

2 molécules du tampon de chargement donne protéines négatif:
- SDS: détergent, pertube intéractins polaires et hydrophobique de strture tertiaire. SDS est nég qui va rendre protéine NÉGATIVE! inépendante de la migration distance.
- B-mercaptoéthanol: Réduits les ponts disulfures dans la strucuture tertiaire de poréine, il dénature protéine

Question 17

Comment visualiser protéines

Answer 17

Coloré gel soit le bleu Coomassie - il se lit au groupement amino et carboxyl des protéines fortement et faiblement au gel.

On fait décoloration du colorant lié au gel toute en gardant colorant au protéine

Nous on utilise au lieu le GelCode Blue: débrasse coloration du gel juste sur protéine

Question 18

what does sds permit

Answer 18

trouver poids moléculaire de protéines

Question 19

quel sorte de liens se font entre IDA et avec les billes

Answer 19

liens covalents

Question 20

Quel types de liens se font entre les Mat-tag et les Nickel

Answer 20

Liens chélateur

Question 21

loi de beer lambert

Answer 21

A=coefficient d’extinction b C

C est en molarité (mol/L)

Question 22

demande pour concentration non dillué et comment faire conversion

Answer 22

x4 si concentration est une dillution x4

avec masse molaire

Question 23

Abondance relative de tyr et trp sont de 2,3% et 1,3%

1 tyr contribue a 1480 extinction globale

1 trp contribue a 5540 extinction globale

c’est quoi extinction globale de 350 a.a

Answer 23

2,3% de 350 =a

1,3% de 350 = b

a(1380)+b(5540)
= réponse