Inmunohistoquimica Flashcards
¿Que es inmunohistoquimica?
Técnicas de reconocimiento de antígeno por su anticuerpo en un corte de tejido “in situ”. Permite IDENTIFICAR reacción antígeno/anticuerpo
Depende de afinidad especifica de anticuerpos con su epitope.
Marcaje con oro.
¿ Que condiciones básicas se necesitan para el desarrollo de estos métodos inmunohistoquimicos ?
1.- Preservación del antígeno in situ
2.- Mantener la inmunoreactividad del antigeno
3.- Disponer del anticuerpo especifico para el antigeno
¿Qué anticuerpos comerciales hay?
Monoclonales: Laboratorio, de un linfocito se expande y produce anticuerpo con un determinante antigénico
Policlonales: Anticuerpo para un antígeno, que vienen de diferente clones de células.
¿Que requisitos debe tener el fijador?
1.- Preservar la morfología tisular (considerar el mo que se ocupa)
2.- Inmovilizar el antígeno
3.- Preservar la inmunoreactividad del antigeno . Ej: Formalina produce entrecruzamiento de proteínas, distorciona, se usa un desenmascaramiento para volver el antigeno a su posicion normal
4.- Proporcionar una permeabilidad adecuada del tejido a los reactivos inmunohistoquimicos
Fijadores
Alcohol, acetona (las dos para celulas), formaldehido (formalina 10% de solucion 40) , tetraoxido de osmio (Mo electronica) Mezcla de acido citrico, formalina y acido acetico
¿Como se preparan los tejidos?
tejido va a formalina, después se mete en una matriz de parafina solida o sintetica, se incluye y se corta en 4-5 micras. se pega en un vidrio, se saca la parafina se hace tincion con H-E, en este caso tincion inmunohistoquimica.
Muchas veces se trabaja en tejido no fijado y se congela, se le pone nitrogeno liquido y se va a un criostato, se pega en una platina el tejido congelado y se corta, después se fija o no. (se usa en investigacion)
¿como fijar las celulas?
se pueden fijar con frotis (examen de sangre) o impronta (trozo de tejido sobre un vidrio que lo separa, como un timbre)
suspensiones celulares, como las células sanguíneas, también cultivo celulares (para saber si hay un virus por ejemplo)
Usos de inmunohistoquimica
es mas preciso que el histopatológico
Constituyentes de los tejidos. (Ej: queratina, tumor epitelial o no)
Antígenos de diferenciación celular
Moléculas (anticuerpos/ receptores) (EJ. En cáncer de mama aumenta el receptor de estrógeno, y pueden haber complejos de anticuerpo/ antígeno en el riñón y se utiliza un anticuerpo marcado para saber si hay un anticuerpo ahi)
Antígenos tumorales
Agentes infecciosos (virus, hongos, bacterias )
Marcadores tumorales
puden encontrarse en tumores solidos (que puede ser una neoplasia) hay tumores que se manifiestan en las celulas que circulan en la sangre (leucemia). tumores como los linfosarcomas, y medula espinal.
Marcadores tumorales en fluidos (MF, orina, etc)
se puede identificar y ver el estado del tumor, y el pronostico viendo el nivel de diferenciación de las celulas, lo que ayuda a saber el tratamiento tambien. en su desarrollo la celula va expresando diferentes marcadores. Hay proteinas tumorales especificas como el cromosoma filadelfia (lecucemia), o relacionadas a celulas malignas como el antigeno carcinoembrionario y alfa feto proteina (igual aparece postcarrete). otras se sobreexpresan como el antigeno prostatico especifico.
Métodos inmunohistoquímicos
- Localización de antígenos mediante anticuerpos marcados con fluorocromos: Marcaje que utiliza la inmunofluorescencia, fluorescencia con anticuerpo.
- Localización de antígenos mediante métodos enzimáticos con anticuerpos marcados (Inmunoenzimaticos): Inmunoperoxidasa, Conjugado abidina biotina enzima porque mejoran la marca
- Complejos enzima- antienzima: Anticuerpos no marcados, dirigidos contra la enzima.
Inmunofluorescencia
Mo de fluorescencia, tiene una fuente luminosa extra y un par de filtros que nos permiten seleccionar longitudes de onda. Hay que activar el fluorocromo, hay un filtro de excitación, y un filtro que tiene un espejo para activar el fluorocromo y produce una luz distinta de mayor longitud de onda, el espejo dicroico lo deja pasar y va hacia el ocular, hay otro filtro de barrera que selecciona la luz que emite el fluorocromo y permite hacer el diagnostico. Ej: Fluoresceína (verde, mas utilizado), rodamina (rojo)
Tipos de fluorescencia
Fluorescencia primaria: elastica de los vasos sanguineos se ven fluorescentes, o sea que de por si se ve asi ?
Fluorescencia secundaria: se utiliza un producto que se pega a un tejido o bacteria
inmunofluorescencia: anticuerpo marcado con fluorocromo
Tipos de Inmunofluorescencia
Directa: se utiliza anticuerpo marcado directamente contra el antígeno que estamos usando
Indirecta: se utiliza un anticuerpo para localizar el antígeno, y después otro anticuerpo contra ese anticuerpo (actúa como antígeno para este anticuerpo) que localizo ese antígeno.
Se usa una tinción de contraste para los núcleos
Ejemplos de utilizacion de metodos de inmunofluorescencia
Indirectos: en el riñon puede que haya un complejo inmunologico contra la membrana basal incluso, y se utiliza una antiinmunoglobulino (anticuerpo para anticuerpo)
En el caso del VIH SE CONFIRMA CON WESTERN BLOT , o con inmunofluorescencia, suero del paciente se coloca en contacto con linfocitos, y se usa un segundo anticuerpo marcado para detectar el anticuerpo del suero del paciente.
¿Qué es la citometría de flujo?
Prueba inmunocitoquimica que utiliza anticuerpos marcados, sirve para estudios de celulas. Puede determinar con fluorescencia, cantidad y tamaño
