Immunologi

Question 1

Varför tar man så många glas av samma vävnad på immun?

Answer 1

Man vill kunna färga in med flera olika antikroppar

Question 2

Hur många snitt tar man per glas?

Answer 2

3 st

Question 3

Vad är skillnaden på glasen som används på immun jämfört med andra glas?

Answer 3

De är laddade, vilket gör att snitten fäster bättre

Question 4

Varför grovsnittar man inte på immun? Och varför tar man alla snitt man får?

Answer 4

På immun kommer det främst efterbeställningar, klossen kommer alltså redan vara snittad på. I och med att man redan snittat och man ska ta så många glas så har man inte råd att snitta bort massa vävnad i onödan. Det kanske inte finns så mycket kvar i klossen

Question 5

Vilken tjocklek snittar man på?

Answer 5

3,5 um (2,5 på transplantation, njure)

Question 6

Ett snitt ska man göra tjockare. Varför och hur tjockt?

Answer 6

Det ska vara 7 um för att det är en viss färgning som kräver det. Blir inte bra annars.

Question 7

Hur bränns immunglas? Varför?

Answer 7

60 minuter i 60 grader

Måste brännas ordentligt så att de klarar prepareringen

Question 8

Varför har man kontroller på alla glas?

Answer 8

Alla glas i ett fall färgas individuellt med olika antikroppar. För att försäkra sig om att varje färgning blivit bra behöver alla glas ha en kontroll

Question 9

Vad är nackdelen med de laddade glasen

Answer 9

Även vatten kommer sitta hårdare på glasen under snitten. Viktigt att man läskar glasen ordentligt innan bränning.

Question 10

Vad sker i PT-link?

Answer 10

• Glasen avparaffineras

- Metylenbryggorna bryts

Question 11

Hur bryts metylenbryggorna i PT-link?

Answer 11

Genom värme då glasen kokas och genom antingen högt (9) eller lågt (6) pH på bufferten

Question 12

Varför vill man bryta metylenbryggorna?

Answer 12

För att öppna upp epitopen för antikroppar att kunna binda in till senare

Question 13

Vad för alternativ prepareringsmetod finns?

Answer 13

Med mikrovågsugn. Man har antingen citrat (pH 6) eller EDTA (pH 9).
Med denna metod måste man dock avparaffinera först

Question 14

I vilka fall vill man använda preparering med mikron?

Answer 14

Det är en lite snällare metod, kan användas om man har lite extra känsliga vävnader

Question 15

Vad är Autostainer?

Answer 15

Automatiserad färgningsmaskin.

Använder polymerbaserad immunhistokemi

Question 16

Vilka är stegen i polymerbaserad immunhistokemi

Answer 16

1. Peroxidasblock
2. Primär antikropp
3. Linker (inte alltid den behövs)
4. Sekundär antikropp med pelymerkedja och peroxidas
5. DAB
6. Hematoxylin

Question 17

Varför använder man peroxidasblock?

Answer 17

Kromogenet DAB binder in till peroxidas. Vi har lite persoxidas naturligt i vävnaden. Detta behöver blockas så att man inte får en ospecifik infärgning

Question 18

Varför använder man ibland en linker?

Answer 18

Om man har en svag antikropp kommer linkern att förstärka så att man ändå kan se någon färgning.
Kan binda in flera sekundära antikoppar

Question 19

Vad är HRP?

Answer 19

Horseradish peroxidas

Det ör hela komplexet med sekundärantikroppar, polymerkedja och peroxidas

Question 20

Varför har man flera olika sekundärantikroppar på polymerkedjan?

Answer 20

Så att man inte ska behöva ha en specifik sekundärantikropp till varje primärantikropp. Man kan använda samma till alla oavsett sort.

Question 21

Vad gör DAB?

Answer 21

Det är kromogenet. Ett enzym som reagerar med peroxidaset och ger en brun färg

Question 22

Varför färgas man med hematoxylin efter immunfärgningen?

Answer 22

För att få en bakgrundsfärg och så att man ser även den vävnad som är negativ för just den antikroppen.
Blir blått.

Question 23

Varför kan man vilja använda en annan kromogen än DAB?

Answer 23

Exempelvis myelom kommer få en brun färg. Då vill man inte att kromogenet också ska vara brunt då resultatet kan misstolkas. Man kan då istället använda ett rosa kromogen

Question 24

Berätta om antikropp Ki-67

Answer 24

• IgG-antikropp från kanin
• Färgar in cellkärnor/nukleärt
• Tonsill som kontrollmaterial (germinala center där många B-celler delas)
• Nukleärt protein närvarande vid celldelning
• Bra markör för gradering av neoplasi i colon carcinom, bröst carcinom, lymfom och sarcom