Genética Microbiana

Question 1

Qué factores aportan variabilidad y cuáles estabilidad?

Answer 1

Variabilidad: mutaciones, mecanismos de reparación propensos a error, transferencia de genes, recombinación
Estabilidad: enzimas de restricción, sistemas de corrección, rango de huesped de plasmidos

Question 2

Diferencia entre genotipo y fenotipo y cómo se escriben

Answer 2

Genotipo: constitución precisa de GENES del microorganismo, el gen tiene nombre con minúscula ejemplo hisC
Fenotipo: conjunto de propiedades observables de un microorganismo, va con mayúscula, ejemplo una prototrofa a His es His+ y una auxotrofa es His-

Question 3

Que tipo de mutaciones se pueden dar? Que efecto pueden tener?

Answer 3

Puntuales: sustituciones, microinserciones, microdeleciones
Pueden ser silenciosas, con cambio de sentido (cambia un aa y puede ser neutral o puede generar prot trunca) o sin sentido (generan la terminación prematura de la traducción)

Question 4

Por qué pueden darse mutaciones espontáneas y cuál es la frecuencia?

Answer 4

La frecuencia es de 10-7 a 10-11. Pueden darse por errores de la polimerasa, mutagenos endógenos, o inserción de elementos transponibles
Tienen relevancia porque las bacterias se replican muy rápido, hay muchas mutaciones en 24 hs

Question 5

Mutagenos químicos, efecto y ejemplos

Answer 5

-analogos de bases: generan transiciones sobre moléculas de adn en la replicación
Ej: 5-bromouracilo, 2-aminopurina
-agentes alquilantes: generan transiciones o deleciones
Ej: etilmetanosulfato, mostazas de nitrógeno, mitomicina, nitrosoguanidina
-agentes intercalantes: microinserciones y microdeleciones, alteran la recombinación.
Ej: bromuro de etidio
-compuestos que reaccionan con el adn: provocan errores en el apareamiento de bases
Ej: ácido nitroso, hidroxilamina

Question 6

Mutagenos físicos, efecto y ejemplos

Answer 6

-radiacion ionizante: produce la ionización del agua y otras sustancias, genera radicales libres
Ejemplo: rayos x, rayos gamma, rayos cósmicos
-radiacion no ionizante: produce dimeros de timina, activa el sistema propenso a error sos. Luz uv

Question 7

Mutagenos físicos, efecto y ejemplos

Answer 7

-radiacion ionizante: produce la ionización del agua y otras sustancias, genera radicales libres
Ejemplo: rayos x, rayos gamma, rayos cósmicos
-radiacion no ionizante: produce dimeros de timina, activa el sistema propenso a error sos. Luz uv

Question 8

Ejemplos de mutagenos biológicos

Answer 8

Secuencias de insercion, transposones, fagos

Question 9

Ejemplo de mutaciones positivas y cómo se da la selección

Answer 9

Una mutación positiva genera por ejemplo la resistencia a un antibiótico o a un fago. Facilita la selección porque se cultiva a todas las bacterias en tsa+el ab o fago al q es resistente. Solo crecen las mutadas, y luego para ver cómo es esa mutación hay que secuenciar

Question 10

Qué es el retardo fenotipico?

Answer 10

Es el tiempo necesario para que la población se divida varias generaciones y se exprese la mutación, permitiendo la selección. La mutación no se expresa inmediatamente luego de agregar el mutageno

Question 11

Ejemplo de mutaciones negativas y cómo es su selección

Answer 11

Ejemplo: mutaciones que generan auxotrofia para un factor de crecimiento.
Se agrega a la bacteria en tsb el mutageno, se espera el retardo fenotipico y luego se pasa a tsa. Se hace una réplica, y cada colonia que creció se pone en una placa con his y otra sin his. Se ve cuáles no crecieron en his y sí con his
Se puede hacer un enriquecimiento en un medio líquido sin histidina y con antibiótico para el q la bacteria es sensible. Como los antibióticos requieren que estén con actividad metabólica, sólo van a crecer las q son prototrofas y van a morir por el antibiótico, mientras que las auxotrofas seguirán viables por más tiempo. Luego se realiza la técnica

Question 12

Sistemas de corrección de lesiones en el ADN

Answer 12

-Actividad correctora de la ADN polimerasa
-Fotorreactivación (fotoliasa)
-Reparación por escisión de nucleótidos (UvrAB, UvrC y UvrD)
-Reparación por escisión de bases (nucleasas especiales)
-Escisión post-replicativa (Mut)
-Sistema SOS (LexA activa a UvrA y UmuCD)

Question 13

que es un revertante?

Answer 13

es un microorganismo que recupera su fenotipo original perdido por una mutación puntual, por una segunda mutacion llamada retromutación.

Question 14

diferencia entre reversiones verdaderas y supresoras

Answer 14

las reversiones verdaderas restauran el genotipo salvaje y por ende se recupera el fenotipo. Las supresoras restauran el fenotipo pero por una segunda mutacion que no restaura el genotipo.

Question 15

Qué es el Test de Ames? cual es su utilidad?

Answer 15

es un ensayo bioquimico que permite estudiar el potencial mutagenico de compuestos quimicos. se utilizan cepas de salmonella typhimurium mutadas con auxotrofia para histidina (His-),para evaluar la capacidad de revertir la mutacion y generar prototrofia nuevamente

Question 16

como es la composicion del medio minimo de Ames?

Answer 16

Agar, glucosa, agua, sales Vogel-Benner. Es un medio quimicamente definido. No puede aportar histidina o biotina.

Question 17

cuales son los mecanismos de transferencia horizontal de genes en bacterias?

Answer 17

-transformacion
-conjugacion
-transduccion

Question 18

en que se basa el mecanismo de transformacion?

Answer 18

la transformacion se da por la captacion de ADN desnudp por parte de una celula receptora. el adn debe estar libre, producto de la sis de otra celula

Question 19

como debe estar el receptor para que se de la transformacion?

Answer 19

debe estar en estado de competencia, ya sea natural o inducido. el estado de competencia natural se da en algunas especie que producen proteinas que permiten a la celula reconocer adn desnudo, ante estimulos dañinos como radiacion o antibioticos.
el estado de competencia inducido se genera alterando la membrana de las bacterias por alteracion de la permeabilidad o agregado de lps, seguido por CaCl2 y shock termico o electroshock

Question 20

que es el transformasoma?

Answer 20

es un complejo conformado por proteinas de union a adn simple cadena, endonucleasas y energia asociada a la membrana, responsable de unir el adn extracelular simple mientras degrada la otra hebra

Question 21

como puede terminarse la transformacion?

Answer 21

puede finalizar como una transformacion exitosa si se da recombinacion homologa con el adn del receptor, o puede darse transformacion no exitosa donde se degrada el adn ingresado por no ser compatible con el genoma receptor.

Question 22

como es la transduccion? que tipos hay?

Answer 22

es la transferencia de material genetico a traves de vectores virales (bacteriofagos o virus bacterianos) puede ser generalizada o especializada

Question 23

como es la transduccion especializada?

Answer 23

se puede transferir cualquier gen. En la infeccion de una primera bacteria, cuando se degrada el genoma las particulas virales pueden apropiarse de un fragmento del adn bacteriano. al infectar una segunda celula, ingresa ese adn de la primera celula infectada y puede tener recombinacion homologa con el adn de la 2da celula, puede tener replicacion autonoma como un plasmido o puede degradarse. Ej fago P1 y P22

Question 24

Como es la transduccion especializada?

Answer 24

solo se transfieren genes especificos dependiendo des sitio de union del genoma del fago. el virus primero no produce un ciclo litico sino que tiene una recombinacion con el adn bacteriano, y luego esa porcion especifica de la primer bacteria que se lleva puede recombinarse con una segunda bacteria infectada

Question 25

que es la conjugacion? como se da?

Answer 25

es una transferencia horizontal, directa, unidireccion y con polaridad del material genetico, en forma de plasmido que se transfiere de una bacteria a otra por el pili sexual. La celula donante se denomina masculina o F+ y la receptora femenina o F-.
Cuando ambas se unen por el pelo sexual, se sintetizan relaxasas que relajan la doble hebraa de adn del plasmido y orientan una hebra al pili. luego de transferirse se replica cada hebra en cada bacteria.

Question 26

que son los plasmidos conjugativos?

Answer 26

los plasmidos conjugativos o factores F son aquellos que tienen la region tra que permite la transferencia del plasmido, codifican para el pili sexual, las relaxasas y las proteinas que orientan la hebra. antes de la region tra tienen el OriT para asegurar que se replique en la segunda celula un plasmido conjugativo.

Question 27

que son los plasmidos movilizables?

Answer 27

son lo que presentan iguales regiones que los conjugativos pero sin tra, solo pueden transferirse a otra celula en conjunto con un plasmido conjugativo que le brinde el pili y las proteinas

Question 28

que son las celulas HFR?

Answer 28

son celulas bacterianas en las cuales el plasmido se inserta en el genoma cuando tienen una secuencia de insercion especifica homologa en ambos. si el plasmido es conjugativo, puede volver a transferirse pero lo hace conn una porcion del cromosoma de la primera celula aceptora–> HFR recombinante

Question 29

que son las celulas F`?

Answer 29

son celulas que tienen un plasmido formado por la mezcla de un plasmido original y el cromosoma bacteriano (se pierde una parte del cromosoma), es poco frecuente y se da cuando se escinde en un lugar equivocado del genoma bacteriano.

Question 30

como son las posibles combinaciones en la conjugacion y sus resultados?

Answer 30

-F+ x F- = puede dar 2F+ por replicacion autonoma, o Hfr por recombinacion sitio especifica
-Hfr x F- = Hfr + F- recombinado
-Fx F- = 2F

Question 31

que son los grupos de compatibilidad?

Answer 31

son grupos que separan los plasmidos segun si es posible que coexistan en una misma celula. si estan en el mismo grupo de incompatibilidad dos plasmidos no pueden coexistir en la misma celula porque tienen el mismo ori y el mismo locus par.