Expresión génica Flashcards
¿qué es la transfección?
proceso de introducción de material genético en células eucariotas
¿qué utiliza la lipofección?
liposomas para transportar ADN
¿qué utiliza la electroporación?
campos eléctricos para aumentar permeabilidad celular
¿qué es un policistrón?
secuencia que codifica para más de una proteína
técnicas de introducción de material genético
microinyección:
introducción directa de material genético mediante el uso de una micropipeta fina
transfección:
en cultivo. Puede realizarse por:
- lipofección
- electroporación
- bombardeo de partículas microscópicas recubiertas con ADN
transducción:
utiliza virus como vectores
Crispr-Cas9:
guía de ARN que dirige enzima Cas9 a una ubicación específica del ADN
¿para qué sirven los microarreglos?
diagnóstico
comparar A contra B
se sabe que tipo de bacteria es y a qué antibiótico es resistente
diferencias mutagénesis dirigida e mutagénesis al azar
dirigida:
- utiliza PCR
- introduce mutaciones específicas en un gen particular
azar:
- introduce mutaciones de manera no específica
- utiliza transposones
Interferencia de RNA (ARNi)
técnica que permite la inhibición selectiva de la expresión génica
se introducen moléculas de ARN pequeñas que son complementarias a la secuencia de ARNm que se desea silenciar
reduce temporalmente la expresión de un gen
diferencias mutaciones nulas/knockout y mutaciones knokin
knockout:
- eliminación completa o inactivación de un gen
knockin:
- introducción copia modificada del gen
¿qué es la recombinación homóloga?
inserción o eliminación precisa de secuencias de ADN en el genoma de un organismo
¿para qué se usa CRISPR-Cas9?
la enzima Cas9 produce roturas de hélice de ADN
cuando estas roturas se reparan se pueden producir cambios específicos como inserciones, deleciones o modificaciones puntuales
se usa para la corrección de mutaciones
Técnicas de detección y cuantificación de mRNA
Northern blot:
- presencia y cantidad de ARNm
- separación de fragmentos de ARN por tamaño a través de electroforesis
- luego se transfiere a una membrana
qRT-PCR (transcripción reversa acoplada a PCR cuantitativo):
- transcripción reversa + amplificación cuantitativa de este cDNA mediante PCR
Microarrays:
se basan en la hibridación de sondas de ADN con el ARN de muestra
la detección de la señal proporciona información sobre la expresión relativa de los genes
Técnicas de detección e identificación de proteínas:
Western blot:
- se utiliza para detectar proteínas
- separación de las proteínas por tamaño a través de la electroforesis, transferencia a membrana y detección mediante anticuerpos
Proteómica:
- espectrometría de masas
