Examen final 3 Flashcards
Quel est le principe de la centrifugation ?
Une particule est soumise à une force quand le tube est tourné à une certaine vitesse.
Plus le rayon est grand et plus la force de centrifugation sera grande.
Comment exprime-t-on la vitesse de centrifugation ?
RPM
Dans la sédimentation plus une particule est dense..
plus elle aura une grande vitesse de sédimentation
Dans la sédimentation plus le milieu est dense…
plus la vitesse de sédimentation sera petite
La vitesse de sédimentation dépend de quoi ?
De la masse et densité d’une particule. La forme de la particule peut aussi avoir un effet.
Quelles sont les différents types de centrifugeuses ?
-Différents rotors, volumes, vitesses
- Avec ou sans contrôle de vitesse d’accélération
-Avec ou sans contrôle de température de centrifugation
Nomme différents types de rotors
-Rotor à angle fixe (centrifugation rapide)
-Rotor à godets oscillants (gros volumes)
Quel type de précaution faut-il avoir avec la centrifugation ?
Il faut s’assurer que tout balance à l’intérieur. Les échantillons doivent avoir le même poids et être face à face pour ne pas débalancer la centrifugeuse.
Qu’est-ce que la centrifugeuse différentielle ?
-Permet de séparé grossièrement les constituants cellulaires selon leur vitesse de sédimentation
-Séparation selon taille, densité et forme
-Procède à une série de centrifugation avec des forces centrifuges croissantes (vitesse de plus en plus vite)
-Utilisée pour la récupération de culots et pour obtenir des préparations partiellement pures d’organelles
Qu’est-ce que la centrifugation sur gradient de densité ?
-Souvent combinée à la centrifugation différentielle
-On dépose notre échantillon sur une certaine solution possédant un gradient de densité
-Gradient discontinu ou continu
-Méthode la plus utilisée pour la séparation des organelles et macromolécules
-Une seule vitesse de centrifugation
Quelles les deux catégories de la centrifugation sur gradient de densité ?
-Centrifugation isopycnique (densité)
-Centrifugation zonale sur gradient (taille/masse)
Qu’est-ce que la centrifugation isopycnique (gradient densité) ?
-Séparation selon densité des particules
-Densité de la particule doit être entre les limites du gradient
-On centrifuge à l’équilibre, chaque particule se stabilise à la position à laquelle la densité du gradient est égale à leur densité
-La masse impacte seulement la vitesse de sédimentation vers la position d’équilibre
-Le gradient peut être généré d’avance ou autogénéré
Qu’est-ce que la centrifugation zonale sur gradient de densité ?
-surtout utilisée pour séparer des particules avec densité similaires
-Séparation selon taille, les plus lourdes sédimentent plus rapidement
-Densité de la particule à purifier doit être plus grande que la densité la plus élevé du gradient
-On ne centrifuge pas à l’équilibre, le gradient sert à ralentir la sédimentation
Quel est le principe de la précipitation ?
-Réduction de la solubilité de molécules vi altération des interactions avec le solvant
-Changement de pH, sels, ajout de solvants, température
-Formation d’un précipité sous forme d’agrégats en solution
-La sédimentation est accélérée par la centrifugationQ
Qu’est-ce que la précipitation de protéines au sulfate d’ammonium (sel) ?
-Chaque protéine est plus ou moins soluble en solution selon sa composition
-La modification de la force ionique de la solution permet de précipiter plus rapidement celle-ci
-Faible concentration : les ions neutralisent les charges ioniques en surface = maintient solubilité
-Haute concentration: ions compétitionnent pour les molécules d’eau = sortie de solution
Qu’est-ce que la Salting-in ?
Augmentation de la solubilité d’une protéine dans l’eau par l’ajout de faibles concentrations de sels - les ions augmentent les interactions des protéines avec le solvant aqueux, alors favorise leur solubilitéQ
Qu’est-ce que le Salting out ?
Diminution de la solubilité d’une protéine dans l’eau par l’ajout de fortes concentrations de sels- la quantité de molécules d’eau disponible pour solubiliser les protéines diminue, ce qui fait précipiter les protéines
