Examen 8 Flashcards
Qu’est-ce que la microscopie optique composé ?
Type de microscopie optique permettant un grossissement jusqu’à 2000x
Utilisation de lentilles pour agrandir l’image de l’objet
La différence entre la microscopie droit, inversé et stéréomiscroscope
Droit : Microscope traditionnel
Inversé : regarde l’image par en dessous avec lumière qui vient du dessus
Stéréomicroscope : surtout pour regarder les petits détails
nomme les caractéristiques du microscope en fond clair
- Configuration simple et peu couteux
- Lumière traverse l’échantillon qui parait foncé sur fond claire
- Pour les spécimens colorés ou avec un bon contraste naturel
- Peu de contraste si le spécimen est transparent
Nomme les caractéristiques de la microscopie sur fond noir
- idéal pour augmenter le contraste des échantillons transparents ou peu contrastés
- Illumination oblique de l’échantillon
- Seuls les rayons diffractés par l’échantillon atteignent l’objectif
- L’échantillon apparait clair sur fond sombre
Qu’est-ce que la microscopie en contraste de phase ?
- Permet de visualiser les structures transparentes avec un indice de réfraction qui diffère de celui de leur voisinage
- Change les différences de phase en contraste
- Lumière qui passe au travers d’une structure = déphasage par rapport aux autres rayons
- Idéal pour les spécimens vivants offrant peu de contraste et difficilement visibles en champ clair
- Mal adapté aux échantillons colorés
Qu’est-ce que la microscopie à contraste interférentiel ?
- Utilise la polarisation et la séparation de la lumière afin de produire une image en relief
- Les faisceaux traverse l’échantillon avec des angles différents et réagissent différemment selon indice de réfraction
- Les faisceaux sont recombinés ensemble et la différence de phase crée des zones d’interférences
- Idéal pour les spécimens vivants offrant peu de contraste et donc difficilement visibles en champs clair
- Mal adaptés pour les échantillon épais + colorés
Nomme les caractéristiques d’un montage humide et frais
idéal pour observer les cellules vivantes
Aucune préservation du spécimen
Certaines cellules ne possèdent pas suffisamment de contraste naturel
Non adapté pour les tissus épais et complexes
Comment peut-on faire pour augmenter le contraste d’un spécimen ?
On peut utiliser la microscopie à fond clair, contraste de phase ou fluorescence
On peut ajouter des colorants spécifiques qui ciblent certaines structures
Nomme les caractéristiques d’un montage fixé
il peut être fixé chimiquement ou par la CHALEUR
Si l’on veut préserver le spécimen dans son état actuel
Décrit la fixation par la chaleur
- Fixe l’échantillon à la lame et empêche le mouvement, métabolisme et la décomposition du spécimen
- Rapide et simple, mais peut altérer structures cellulaires + dénaturer les protéines
- surtout utiliser pour visualiser les microorganismes en fond clair
Décrit la fixation chimique
Protège le spécimen en empêchant sa dégradation, stabilise ses structures cellulaires et arrête les processus biologiques
Certains fixateurs peuvent aider ou nuire à la coloration
Qu’est-ce qu’une coupe histologique dans la paraffine ?
- Pour venir augmenter la rigidité du tissu pour coupe mince
- Fixation chimique, déshydratation et infiltration
Qu’est-ce que la microscopie à fluorescence ?
- Permet d’observer l’émission de la lumière des molécules fluorescentes se nommant fluorophores
- Produit des images sur fond noir ou seulement les fluorophores sont visibles
- Échantillons doivent presque toujours être préalablement colorés
Nomme des exemples d’applications de la microscopie à fluorescence
- Détection de cellules spécifiques
- Détection de structures cellulaire
- Détection de molécules spécifiques
- Détection de certaines réactions
La différence entre fluorophores réactifs , conjugués et protéines fluorescentes
réactifs : utilisés directement comme réactif et ciblent des structures ou réactions métaboliques
conju: ne ciblent aucune structure particulière mais sont conjugués à d’autres molécules qui eux cibleront les structures désirées
Prot: protéines naturellement fluorescentes ( GFP)
Décrit ce qu’est l’immunofluorescence
Permet de faire émettre de la lumière aux structures que l’on veut observer
ex: visualisation des microtubules , détection de dommages à l’ADN
Les cellules doivent être fixée et perméabilisé
Qu’est-ce que la détection par un acide nucléique fluorescent (FISH)
- Permet de cible et détecter une séquence spécifique d’ADN ou d’ARN
- Technique utilisée pour la détection de loci dans un génome ou pour vérifier la présence de certains ARN dans une cellule
- Les cellules doivent être préalablement fixée et perméabilisées
Nomme des exemples d’application de la méthode fish
- Détection des télomères sur des chromosomes
- Détection d’ARNm spécifique
Quels sont les avantages des protéines fluorescentes ?
- Pas besoin de colorer ou fixer/ perméabiliser les cellules
- Non-toxiques, permet de visualiser les cellules vivantes
- Division cellulaire avec tubuline marquée à la GFP
- Fusion avec Histone H2B permettant de visualiser la chromatine en temps réel
La différence entre la microscopie épifluorescence et confocale ?
Épifluorescence : échantillon est illuminé en entier, et la lumière au focus et hors-focus est captée
Confocale : utilisation de lasers et filtres optiques pour capter seulement la lumière du focus
Nomme les
avantages/désavantages de la microscopie à épifluorescence
Avantages : temps d’acquisition rapide, simple d’utilisation
Désavantages : contamination par la lumière hors focus, ne permet pas la reconstruction
Utilisation : coupe mince de tissus + caractérisation grossière de cellules
Nomme les avantages et désavantages de la microscopie confocale
Avantages : permet d’éliminer la lumière hors focus + images composées de sections optiques minces + Bruit de fond réduit
Désavantages : temps d’acquisition beaucoup plus long et cher
Utilisation : échantillons avec beaucoup d’auto fluorescence + reconstruction 3D
Qu’est-ce que la microscopie électronique ?
- Utilise un faisceau d’électrons
- Préparation des échantillons plus compliquée qu’en microscopie optique
- Ne permet pas de faire l’imagerie d’organismes vivants
- Deux types de microscopie électronique : à transmission et à balayage
Qu’est-ce que la microscopie électronique à transmission
Très gros grossissement ( 10 000 000 x)
Le faisceau d’électron traverse une section d’échantillon ultra-mince
Absorption des électrons du à l’épaisseur ou à la composition de l’échantillon forme l’image
Pour voir petites structures des bactéries
