Examen 7 Flashcards
Qu’est-ce qu’un anticorps humain ?
- Complexe protéique produit par le système immunitaire adaptatif en réponse à la présence d’un antigène
-Reconnaissance d’un antigène
-Neutralise les agents pathogènes
Qu’est-ce qu’un antigène ?
-Substance qui est reconnue par les anticorps
- Naturelle ou synthétique
- Capacité de provoquer une réaction immunitaire
La différence entre paratope et épitope ?
Para : région de 5-10 acides aminés qui est responsable de la reconnaissance moléculaire des anticorps
Épito: courte région moléculaire présente sur les antigènes qui est reconnu par les CDRs
Qu’est-ce qu’une substance immunogène ?
Substance qui a la capacité de provoquer une réaction immunitaire
Nomme les 5 classes d’anticorps chez les humains
IgM
IgG : retrouvé dans le sang
IgA : retrouvé dans le lait maternelle
IgE:
IgD: rôle dans les réactions allergiques
La différence entre un épitope séquentiel et conformationnel ?
Séquentiel : Les aa vont y être continue
Conformationnel :Les aa sont pas nécessairement linéaire, mais les protéines n’est pas dénaturé, les aa vont être très rapproché l’un de l’autre
Qu’est-ce qu’un anticorps polyclonaux ?
Un anticorps qui est capable de reconnaitre plusieurs épitopes
Le produit va être très hétérogène
Qu’est-ce qu’un anticorps monoclonaux ?
Un anticorps qui reconnait un seul épitope
Va produire un produit final très homogène
Nomme les avantages et inconvenants des anticorps polyclonaux
- Population très hétérogènes
- Reconnaissance de différents épitopes
- Plus grande sensibilité pour la détection de faibles quantités d’antigènes
- Production rapide
Nomme les avantages et inconvénients des anticorps monoclonaux
-Population homogène
- reconnaissance d’un seul et même épitope
- Spécificité très élevée
- Production longue
- Très haute reproductibilité
Comment se passe la purification d’un antigène/anticorps par chromatographie d’affinité ?
- On mets nos anticorps que l’on veut purifier dans notre colonne de purification remplie de ligands (chromatographie d’affinité)
- On fait un premier lavage qui va venir retirer tous les composantes qui ne se sont pas liés aux ligands
- On met une solution d’élution dans notre colonne, ce qui va provoquer l’élution de nos anticorps voulus
Qu’est-ce que le Western Blot ?
Permet de venir détecter seulement une protéine d’intérêt en utilisant notre gel d’électrophorèse et en le transférant dans avec une membrane avec anticorps
Nomme les étapes du Western Blot
- Utilisation de colorants réversible pour montrer qu’on a des protéines sur notre gel
- Lavage
- On bloque notre membrane sinon nos anticorps collent et vont faire un bruit de fond. On ajoute d’autres protéines pour venir bloquer
- Incubation avec les premiers anticorps qui viennent se lier avec la protéine.
- Lavage avec détergent à 1% pour garder le lien spécifique entre la protéine et l’anticorps, on supprime les liens non spécifiques
- incubation avec le second anticorps qui reconnait le premier anticorps
- Lavage
- Ajout de chimiluminescence ou coloration
Si il y a absence de bande dans notre Westen Blot, qu’est-ce que cela signifie ?
- Trop basse expression de l’antigène
- Incompatibilité entre anticorps secondaire x primaire
- Épitope conformationnel
Si il y a des bandes de mauvaise masses moléculaires dans notre Westen Blot, qu’est-ce que cela signifie ?
- Dégradation par protéase
- Modification post-traductionnelles
- Dénaturation insuffisante
Si il y a un bruit de fond élevé de bande dans notre Westen Blot, qu’est-ce que cela signifie ?
-Concentration trop élevée de l’anticorps primaire
- Blocage/ lavages insuffisant
- Réactivité croisée avec d’autres antigènes
Qu’est-ce que l’ELISA ?
Essai de plaques conçu pour détecter et quantifier anticorps ou antigènes
Nomme les différents types d’ELISA
- Direct ELISA
- Indirect ELISA
- Sandwich ELISA (indirect)
Qu’est-ce que l’ELISA indirect ?
- Utilisation d’un anticorps primaire er secondaire
- Plus grande flexibilité que l’ELISA direct
- Meilleure sensibilité car liaison de >1 anticorps secondaire par anticorps primaire
- Immobilisation non spécifique de l’Antigène (bruit de fond)
Qu’est-ce que l’ELISA direct ?
-Variante la plus simple et la plus rapide
- L’anticorps sélectionné doit être conjugué à un système de détection
- Bruit de fond parfois plus important en raison de l’immobilisation non-spécifique de l’antigène
Les étapes de ELISA direct
- Fixation de l’Antigène
- Lavage + blocage
- Anticorps primaire vient se fixer
- Lavage + blocage
- Mesure du signal
Nomme les étapes de l’ELISA indirect
- Fixation de l’Antigène
- Lavage + Blocage
- Anticorps primaire vient se lier
- Lavage + blocage
- Anticorps secondaire vient se lier à l’anticorps primaire
6.Lavage + blocage - Mesure du signal
Qu’est-ce que ELISA sandwich ?
- Capture spécifique de l’Antigène via anticorps primaire immobilisé à la surface du puit
- anticorps secondaire qui reconnait un épitope distinct
- Parfait pour détecter antigènes dans mélanges complexes
-Détection direct ou indirect
Nomme les étapes de ELISA sandwich
- Anticorps primaire déjà dans la solution
- Lavage + blocage
- Capture de l’antigène en solution
- Lavage + blocage
- Anticorps secondaire vient se fixer qui vient reconnaitre un épitope disctinct
- Lavage + blocage
- Mesure du signal
