Examen 2 Flashcards
mortier pilon
-Utilisé comme pré-traitement pour les tissus rigides (os,cartilages)
-Souvent combiné avec de l’azote liquide pour faciliter le broyage
-Peu couteux mais lent
-Combiner avec d’autres méthodes pour la lyse efficace des cellules
mélangeur
-Lames rotatives à haute vitesse
-Utilise comme prétraitement des tissus animaux + végétaux (grossier)
-Idéal pour les grands volumes, non adaptés pour les petits volumes
-Peu couteux
-Attention à la chaleur
rotor-stator
-rapide et efficace, homogénat uniformes
-Idéal pour les tissus mous, grande étendue de volumes
-Couteux
-Possibilité de lyser les cellules sans briser les organelles
-Chaleur
: Homogénéisateur de type Dounce et Potter-Elvehjem
-Piston ajusté dans un tube de verre, surtout cellules eucaryotes + tissus mous
-Adaptés pour ;es faibles volumes
-Idéal pour lyser les cellules sans briser les organelles
-Ne convient pas aux bactéries et levures avec parois rigides
Homogénéisateur à billes
-Pour cellules en suspension + faibles volumes
-Efficace pour briser les cellules difficiles à lyser comme les bactéries + levures
-Souvent combiné avec des méthodes chimiques
-Chaleur !!
Homogénéisateur à haute pression
-Très efficace pour briser les cellules difficiles à lyser comme les bactéries et levures
-Non adapté pour les grands volumes
-Très couteux
-Limité aux suspensions de cellules
-Sensible aux agglomérats
Sonication
-Ultrasons créant des forces de cavitation
-chaleur !
-Très efficace pour briser les cellules difficiles à lyser comme les bactéries et levures
-Limiter aux suspensions de cellules (inneficace pour morceaux de tissus)
-Homogénat très uniforme
-Brise les organites cellulaires
-Peut fragmenter l’ADN
Décrit le méthode d’extraction enzymatique : pour briser la MEC des tissus
-Utilisation d’enzyme comme la collagénase, pectinase
-Pratique pour isoler des cellules intactes è
-Pré-traitement dans un tampon adapté
-Parfois en combinaison à d’autres techniques pour la lyse complète des cellules
Décrit le méthode d’extraction enzymatique pour dégrader la paroi
-Pour les cellules difficiles à lyser, on peut utiliser les enzyme pour venir dégrader leur paroi
-Lysosyme, zymolyase, cellulase
-Pré-traitement dans un tampon adapté
- Souvent en combinaison avec lyse douce
Décrit le méthode d’extraction chimique : choc osmotique
- Chez les cellules animales
- Utilisation de solution hypotonique (cytolyse, cellule se gonfle d’eau) ou hypertonique (plasmolyse, toute eau sort de la cellule)
- On vient faire éclater nos cellules dans les solutions pour venir récupérer nos organelles
Décrit le méthode d’extraction chimique : Détergents
- Sur les composés amphiphile (tête hydrophile et corps hydrophobes)
- Détergent ionique ou non-ionique
- S’incorporent dans les membranes
Nomme deux détergents
SDS : détergent ionique fort (dénaturant) + pouvoir moussant
Triton x-100 : détergent non-ionique, beaucoup plus doux que le SDS
Décrit le méthode d’extraction chimique : agent chaotropique
-Déstabilisent les interactions hydrophobes et pont H, dénaturent les protéines
-Très pratique pour extraire les protéines insolubles, dénaturation acides nucléiques
* Très dénaturent *
Nomme des solutions pour préserver la conformation/activité/structure de molécules avec le tampon de lyse ?
- Lyse en milieu physiologique avec système de tampon
-Lyse douce + précaution à prendre - Travailler sur glace pour ralentir l’activité des enzymes cellulaires
- utilisation d’inhibiteurs de protéase (purification de protéines)
- Ajout d’agents réducteurs
Pourquoi on utilise des inhibiteurs de protéases ?
Empêche la dégradation de l’enzyme d’intérêt par les protéases
pourquoi on utilise les agents réducteurs ?
Protègent les groupes (SH) des cystéines dont les enzymes contre l’oxydation + empêchent la formation de ponts disulfure non spécifique
Qu’est-ce que la dialyse ?
- Méthode de purification
- Utilise principe de physico-chimie :
- 2 compartiments séparés par une membrane semi-perméable
- Diffusion de solutés grace à un gradient de concentration (atteinte de l’équilibre)
- Méthode simple mais lente
- Utilisée pour dessalage, retrait de contaminants
- possible de traiter de grands volumes
-Types de contaminants : sels, ions, tampons, impuretés
Qu’est-ce que la filtration ?
-Méthode de purification
-Utilisation de filtres avec une porosité de grande taille
-Basse pression
- Utilisée pour retirer les débris cellulaires, bactéries et résidus solides
- Étape souvent utilisé après extraction et avant la purification par centrifugation
Qu’est-ce que l’ultrafiltration ?
- Méthode de purification
- Filtres avec porosité très petite
- Haute pression (centrifugation)
- Utilisée pour concentrer les macromolécules, éliminer les petites molécules
- Méthode simple + rapide
- Pour les petits volumes
