ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΑΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ (ELISA)

Question 1

Ποια είναι τα βασικά σημεία μιας τυπικής ELISA που απαντώνται σε όλες τις τεχνικές παραλλαγές;

Answer 1

1) Ουσία, που έχει σχέση αντιγόνου-αντισώματος με την προσδιοριζόμενη προσροφάται επί κατάλληλης στερεάς επιφάνειας (στερεά φάση).
2) Το δείγμα (ορός ή άλλο υγρό του σώματος) επωάζεται σε επαφή με τη στερεά φάση, επι καθορισμένο χρόνο και σε ορισμένη θoC
3) Η προσδιοριζόμενη ουσία δεσμεύεται από την προσροφημένη και στο τέλος της επώασης, η ποσότητα που δεν δεσμεύτηκε απομακρύνεται με κατάλληλη έκπλυση
4) Στο σύστημα προστίθενται αντίσωμα έναντι της προσδιοριζόμενης ουσίας, συνδεδεμένο με ένζυμο (αλκαλική φωσφατάση, υπεροξειδάση κλπ)
5) Δεύτερη φάση επώασης, κατά την διάρκεια της οποίας το αντίσωμα ενώνεται με τη δεσμευθείσα ουσία
6) Η περίσσεια του αντισώματος απομακρύνεται πάλι με έκπλυση
7) Τέλος, στο σύστημα προστίθεται διάλυμα κατάλληλου υποστρώματος
8) Αντίδραση ένζυμο-υπόστρωμα => παράγεται προϊόν που προκαλεί χρωστική μεταβολή
9) Μέτρηση με σπεκτροφωτόμετρο

Question 2

Τι χρησιμοποιείται ως προσροφητική επιφάνεια;

Answer 2

• πλαστικά (πολυστυρένιο ή πολυβινύλιο)
• κυτταρίνη
• δεξτράνη κτλ

Question 3

Τι μορφή έχουν οι κλασσικές επιφάνειες;

Answer 3

Α) Μορφή σωληναρίων (macro-ELISA)
Β) Μορφή ειδικών πλακών με βυθίσματα (micro-ELISA plates)
Γ) Σφαιριδίων

Question 4

Τι μορφή έχουν οι επιφάνειες κυτταρίνης;

Answer 4

Μικρών χάρτινων δίσκων => επεξεργασμένων με βρωμοκυάνιο

Question 5

Πως προσδιορίζεται η σχέση μεταξύ της οπτικής απορρόφησης και της συγκέντρωσης της προσδιοριζόμενης ουσίας;

Answer 5

Μέσω χρήσης κατάλληλων προτύπων δ/των