ΑΥΤΟΑΝΤΙΣΩΜΑΤΑ Flashcards
Από τι χαρακτηρίζεται η αυτοάνοση νόσος;
Παρουσία: - αυτοαντισωμάτων - Αυτοαντιδραστικών λεμφοκυττάρων Σε: - Αίμα - Ιστική βλάβη
Έναντι ποιων στρέφονται αυτά τα αυτοαντισώματα;
- οργανοειδικών και
- μη οργανοειδικών αυτοαντιγόνων
Πως εκφράζεται η ποικιλία μεταξύ των αυτοαντισωμάτων;
- έκφραση
- παραγωγή
- τελική δράση στον οργανισμό
Πόσες κατηγορίες αυτοαντισωμάτων υπάρχουν και τι περιλαμβάνουν;
1η κατηγορία: - φυσικά αυτοαντισώματα που βρίσκονται σε όλους τους οργανισμούς - τάξης IgM 2η κατηγορία: - αυτοαντισώματα που μπορούν να δημιουργήσουν νόσο στον άνθρωπο - συνήθως IgG -πολύ ειδικά με μεγάλη συγγένεια προς το αυτοαντιγόνο
Ποια είναι τα αυτοαντισώματα έναντι ειδικών των οργάνων αντιγόνων;
Αυτά που βρίσκονται σε
- κακοήθη αναιμία
- Hashimoto
- θυρεοτοξίκωση
- σύνδρομο Goodpasture
- μυασθένεια Gravis κλπ
Ποια είναι τα αυτοαντισώματα έναντι αντιγόνων μη ειδικών των οργάνων;
1) Αντιπυρηνικά αντισώματα (ΑΝΑ)
2) Ρευματοειδείς παράγοντες
3) Αντισώματα προς τα RBC
Τι είναι τα αντιπυρηνικά αντισώματα (ΑΝΑ);
Ετερογενή ομάδα αυτοαντισωμάτων που στρέφονται κατά διαφόρων αντιγονικών συστατικών του πυρήνα
Σε τι ποσοστό των ασθενών βρίσκονται τα LE κύτταρα;
80%
Τι ειδικότητα και ευαισθησία έχει ο έμμεσος ανοσοφθορισμός;
Απλή ευαίσθητη
Μη ειδική
Που εφαρμόστηκε αρχικά η εξέταση του έμμεσου ανοσοφθορισμού;
Υποστρώματα:
- ιστικές τομές από όργανα μη ανθρώπινης προέλευσης
- Hep2 κύτταρα => ανθρώπινα επιθηλιακά από λαρυγγικό καρκίνωμα
- ΚΒ κύτταρα => στοματοφαρυγγικό καρκίνωμα
- HeLa κύτταρα
- ανθρώπινοι εμβρυϊκοί ινοβλάστες κλπ
Για ποιο λόγο αμφισβητήθηκε η ύπαρξη φθορισμού στο υπόστρωμα με διάφορες εικόνες χρώσης του πυρήνα που συσχετίσθηκε με την κλινική εικόνα;
Διότι τα ΑΝΑ μπορεί να είναι θετικά σε
- φ.τ. άτομα
- ασθενείς με χρόνιες νόσους
- ηλικιωμένα άτομα
Που παρατηρούνται υψηλοί τίτλοι ΑΝΑ;
Κυρίως σε πάσχοντες από ΣΕΛ
Ποιος άλλος τύπος ανοσοφθορισμού ανιχνεύεται σε υποστρώματα κυτταρικών σειρών;
Κυτταροπλασματικός:
Κυτταροπλασματικά αντισώματα στρέφονται κατά:
1) συστατικών των κυτταρικών οργανιδίων (μιτοχόνδρια, ριβοσώματα, συσκευή Golgi)
2) διαφόρων συστατικών του κυττάρου (αντισώματα κατά των λείων μυϊκών ινών)
Από τι χαρακτηρίζεται ο αντιμιτοχονδριακός τύπος και τι τα αντισώματα κατά των λείων μυϊκών ινών;
- αντιμιτοχονδριακός τύπος: εμφάνιση κοκκίων που φθορίζουν στο κυτταρόπλασμα και τα οποία συρρέουν γύρω από τον πυρήνα
- αντισώματα κατά των λείων μυϊκών ινών: εικόνα “ιστού αράχνης”
Που είναι συχνοί οι δύο τύποι αντιμιτοχονδριακός τύπος και αντισώματα κατά των λείων μυϊκών ινών;
- αυτοάνοσα νοσήματα
- ηπατοπάθειες
- κακοήθη νοσήματα
Ποια είναι τα αντιπυρηνικά αντισώματα;
α) Αντι DNA αντισώματα
β) Αντισώματα κατά ιστονών
γ) Αντισώματα κατά μη ιστονικών πυρηνικών πρωτεϊνών και σύμπλοκα RNA-Πρωτεϊνών
Που ανακαλύφθηκαν για πρώτη φορά τα αντι DNA αντισώματα;
Ορό ασθενών με ΣΕΛ
Σε πόσες και ποιες κατηγορίες διακρίνονται τα αντι DNA αντισώματα;
3 μεγάλες κατηγορίες;
- αντί SS-DNA (έναντι απλής έλικας DNA)
- αντί ds-DNA (έναντι διπλής έλικας DNA)
- αντισώματα που αντιδρούν με SS-DNA ds-DNA
Ποιες είναι οι μέθοδοι προσδιορισμού των αντι DNA αντισωμάτων;
1) Έμμεσος ανοσοφθορισμός
2) Ραδιοανολογική μέθοδος (RIA)
3) Ανοσοπροσροφητική μέθοδος (ELISA)
Τι χρησιμοποιείται ως υπόστρωμα στην μέθοδο του έμμεσου ανοσοφθορισμού στον προσδιορισμό αντι DNA αντισωμάτων;
Πρωτόζωο Crithidia Lucilliae => τα μιτοχόνδριά του περιέχουν μεγάλη ποσότητα ds-DNA
Ποιο είναι το μεγάλο πλεονέκτημα των RIA & ELISA ως μεθόδους προσδιορισμού στα αντι DNA αντισώματα;
Υπάρχει η δυνατότητα να ανιχνεύουν πολύ μικρές ποσότητες αυτοαντισώματος μη προσδιοριζόμενες με τις άλλες τεχνικές
Που ανιχνέυονται πολύ υψηλοί τίτλοι αντισωμάτων: - - ds-DNA
- αντι SS-DNA
- Υψηλοί τίτλοι αντί ds-DNA αντισωμάτων βρίσκονται μόνο σε ΣΕΛ => αποτελεί ένα από τα κριτήρια για την διάγνωση του ΣΕΛ
- Αντί SS-DNA => δεν είναι ειδικά σε:
α) πρωτοπαθή χολική κίρρωση
β) χρόνια ενεργό ηπατίτιδα
γ) λοιμώδη μονοπυρήνωση
Ποιο είναι το βασικό χαρακτηριστικό των μεθόδων ανοσοφθορισμού;
Η χρήση αντιδραστηρίων σημασμένων με φθορίζουσες ουσίες => έχουν την ιδιότητα διεγειρόμενες από ακτινοβολία να εκπέμπουν, μετά πάροδο ελαχίστου χρονικού διαστήματος (10^-9 sec στην περίπτωση της ισοθειοκυανικής φλουορεσκείνης, FITC) ακτινοβολία μήκους κύματος μεγαλύτερου της προσπίπτουσας
Τι γίνεται στην περίπτωση σου άμεσου ανοσοφθορισμού;
Η ανιχνευόμενη ουσία συνδέεται με αντίσωμα που φέρει φθορίζουσα σήμανση κατά την διάρκεια επώασης
Η περίσσεια φθορίζοντος αντισώματος απομακρύνεται
Το παρασκεύασμα εξετάζεται σε μικροσκόπιο με σύστημα φθορισμού
Τι ανιχνεύεται με την μέθοδο του άμεσου ανοσοφθορισμού;
- Αντιγόνα
- Ανοσοσυμπλέγματα
- Μόρια κυτταρικής επιφάνειας κα που βρίσκονται σε κύτταρα, ή ιστούς, ή μικροοργανισμούς (μικρόβια, μύκητες, παράσιτα)
Ποια είναι η διαφορά του έμμεσου ανοσοφθορισμού από τον άμεσο;
Επιπρόσθετα στο πρώτο αντίσωμα συνδέεται ένα 2ο που είναι το φθορίζον
Για ποιο λόγο χρησιμοποιείται ευρύτατα η μέθοδος του έμμεσου ανοσοφθορισμού στα εργαστήρια;
- Αποτελεί μέθοδος εκλογής για ανίχνευση και ημιποσοτικό προσδιορισμό (τιτλοποίηση) μεγάλου αριθμού αντισωμάτων και αυτοαντισωμάτων στον ορό και άλλα βιολογικά υγρά, με χρήση ειδικών κυτταρικών ή ιστικών υποστρωμάτων
Πως βελτιώθηκαν η ειδικότητα και η ευαισθησία των μεθόδων του άμεσου και έμμεσου ανοσοφθορισμού;
- Χρήση μικροσκοπίου ανακλώμενου φθορισμού
- Μονοκλωνικών αντισωμάτων
Ποια είναι η βασική αρχή μιας τυπικής ELISA;
Ουσία που έχει σχέση αντιγόνου - αντιασώματος με την προσδιοριζόμενη προσροφάται σε κατάλληλη στερεά επιφάνεια (στερεά φάση)
Τι είδους προσροφητικές επιφάνειες χρησιμοποιούνται στην ELISA και σε τι μορφή;
- Πλαστικά (πολυστυρένιο, πολυβινύλιο):
α) σωληνάρια => macro-ELISA tubes
β) ειδικών πλακών με βυθίσματα => micro-ELISA plates
γ) σφαιρίδια - Κυτταρίνη, νιτροκυτταρίνη:
α) μικροί χάρτινοι δίσκοι => επεξεργασμένοι με βρωμοκυάνιο
Υπό τι συνθήκες εξετάζεται το δείγμα;
- Σε επαφή με την στερεά φάση
- Καθορισμένο χρόνο
- Καθορισμένη θ
Ποια είναι η διαδικασία της ELISA;
1) Προσδιοριζόμενη ουσία δεσμεύεται από την προσροφημένη
2) Επώαση
3) Ποσότητα που δεν δεσμεύτηκε απομακρύνεται με κατάλληλη έκπλυση
4) Προστίθενται αντίσωμα έναντι της προσδιοριζόμενης ουσίας, συνδεδεμένο με ένζυμο (αλκαλική φωσφατάση, υπεροξειδάση κ.α.)
5) 2η επώαση => αντίσωμα ενώνεται με τη δεσμευθείσα ουσία
6) Έκπλυση => απομάκρυνση περίσσειας αντισώματος
7) Προστίθενται δ/μα κατάλληλου υποστρώματος
8) Χρωματική μεταβολή => μετράται σε σπεκτροφωτόμετρο
Τι επιτυγχάνεται με την χρήση κατάλληλων προτύπων δ/των στην μέθοδο ELISA;
Προσδιορίζεται η σχέση μεταξύ της οπτική απορρόφησης και της συγκέντρωσης της προσδιοριζόμενης ουσίας
Ποια μέθοδος θεωρείται σαν η πιο κατάλληλη για την μέτρηση των ds-DNA αντισωμάτων και γιατί;
Μέθοδος ELISA
Μεγαλύτερη ευαισθησία
Έμμεση, μη ανταγωνιστική μέθοδος για την ποιοτική και ποσοτική καταμέτρηση των ds-DNA αντισωμάτων