Croissance et divisions des cellules (partie 2 - exam 3) Flashcards
Comment fonctionne un chémostat ?
C’est un bioréacteur, dans lequel poussent, de façon contrôlée, les microorganismes. On y insère un volume fixe.
- État non clos (entrée et sortie)
- Ajout constant de milieux frais.
- Élimination du milieu épuisé
- Contrôle du : pH, T°, agitation, gaz, etc.
Comment se calcul le taux de dilution pour une culture en continue ?
volume ajouté/volume total/heure
Le contrôle du débit d’arrivée du milieu permet de calculer quoi ?
Le taux de dilution.
Le contrôle du taux de croissance ce fait grâce à quoi?
Le taux de dilution.
Que signifie un taux de dilution = au taux de croissance ?
Qu’on est en conditions optimales.
Que signifie un taux de dilution < au taux de croissance ?
Qu’on est en conditions limitantes.
Que signifie un taux de dilution > au taux de croissance ?
Élimination des bactéries (lavage).
Que permet la chambre de Petroff-Hausser ?
Énumération cellulaire ( compte des cellules dans un volume prédéterminé).
Quels sont les avantages de la chambre de Petroff-Hausser ?
Minimum d’équipement, rapide, population de 10^7-10^8/ml
Viabilité des cellules ?
Quelles sont les différentes méthodes d’énumération cellulaire ?
- Chambre de Petroff-Hausser
- Énumération électronique
- Énumération des unités viables
- Méthodes turbidimétriques
- Méthodes moléculaires
Comment fonctionne la méthode d’énumération électronique ?
Le débit est contrôlé par laser visible/UV.
il y a un trie des cellules.
donne le nombre de corps bactérien
Quels sont les inconvénients de l’énumération électronique ?
Sensibilité : limite -> taille des bactéries. il y a témoin interne qui sont des billes de tailles et de concentrations connues.
Quelle méthode d’énumération cellulaire permet la détection de spores dans l’air et la caractérisation des populations hétérogènes ?
Énumération électronique.
Comment fonctionne l’énumération des unités viables ?
Dilutions séquentielles et étalement, en surface ou en profondeur
Comment un échantillon est-il déterminé valable dans un énumération des unités viables ?
Il doit y avoir entre 30 et 300 colonies par pétri.
Quelles sont les unités pour la méthode d’énumération des unités viables ?
UFC ou unités viables.
*unités formatrices de colonie n’égale pas cellule ou population totale. UFC = colonie
Sur quel type d’organisme se fait l’énumération des unités viables ?
Organismes viables, population diluée (très diluée = filtration)
Comment fonctionne la méthode turbidimétrique ?
Cette méthode mesure le trouble dans un milieu liquide. À un certain seuil, il y a assez de trouble et donc possibilité de disperser ou absorber la lumière.
Quel appareil mesure la lumière absorbée et quel appareil mesure la lumière dispersée ?
Lumière absorbée : spectrophotomètre
Lumière dispersée : néphélomèter
La méthode turbidimétrique se fait en quel condition ?
Conditions standardisées : même espèce, même milieu…
Permet de faire une courbe d’étalon (D.O. en fonction de UFC)
10^7 à 10^8 UFC/ml
Comment fonctionne la méthode moléculaire ?
Se base sur la quantité d’ADN (extraction), amplification enzymatique d’une séquence spécifique d’ADN
extrêmement précise, demande beaucoup de mise au point.
Quels sont les avantage de la méthode moléculaire ?
Pas besoin de cultiver des microorganismes, demande nutritionnelle pas à connaître, seulement besoin d’amplifier ADN.
Quantification d’organismes non cultivables
Quantification simultanée de plusieurs organismes.
Quels sont les inconvénients de la méthode moléculaire ?
$$$, spécificité de ce qui est amplifié, spécificité des séquences : longue mise au point
Comment se fait la détermination du poids sec (quantification de la masse cellulaire ) ?
Filtration + séchage 100-150°C
La méthode de détermination du poids sec est utile pour quelles bactéries ?
Bactéries agrégées ou formant des hyphes.
Quelles sont les méthode de mesure de croissance les plus fréquentes ?
Unités viables et turbidimétrique (moléculaire : en croissance)
Que fait-on si la densité de population est trop levée pour une chambre de Petroff-Hausser ?
Il faut faire une dilution car ce sera difficile de faire l’énumération.
Pourquoi est-il important de bien faire le séchage après la filtration ?
Il est important qu’il ne reste aucune eau résiduelle puisque 1 microL d’eau = 1mg et 1mg correspond à 10^9 cellules…. cela viendrait fausser énormément les résultats.
