Cours 7 (Réplication) Flashcards
La réplication de l’ADN est le processus de ___________________ du contenu en ADN d’une _______________ en ___________ afin de transmettre l’ensemble de son ___________________ aux deux ____________
doublement
cellule mère
mitose
potentiel génétique
cellules filles
La réplication de l’ADN est le préalable obligé de quoi?
De la division cellulaire
À quel phase se produit la réplication de l’ADN?
Durant la phase S de la mitose
Meselon et Sthal ont cultivé le E.coli dans un milieu contenant du 15NH4Cl. Comment ont-ils fait pour isoler et répliquer l’ADN?
La culture est transférée et cultivée sur un milieu avec isotope 14N
ADN extrait et ultracentrifugé dans un gradient de césium
Présence d’une bande de densité intermédiaire :
– Réplication semi-conservative
Qu’est-ce que le mode semi-conservatif de la réplication de l’ADN?
Chaque brin de la molécule à répliquer sert de matrice à la synthèse d’un brin complémentaire, pour obtenir deux molécules d’ADN identiques
Chaque nouvelle molécule ‘fille’ ne conserve donc que la moitié de la molécule mère
Les autre brins sont néoformés
V/F : Le mécanisme de réplication est universel
Vrai (chez les procaryotes, chez les eucaryotes, chez les archéobactéries)
V/F : Les enzymes de réplication impliquées dans la réplication de l’ADN des eucaryotes et des procaryotes sont les mêmes
Faux (différentes)
Les ADN polymérases sont des enzymes qui assurent quoi?
La synthèse d’un nouveau brin d’ADN à partir d’un brin matrice
Les ADN polymérases catalysent la formation de ___________________ entre l’extrémité ____ du nucléotide incorporé et l’extrémité ______ de la chaîne en croissance. L’ADN polymérase a donc besoin d’une _________ pour fonctionner
liaison phosphodiester
5’P
3’OH
amorce
Tous les ADN polymérases ont besoin de quoi pour commencer la synthèse?
D’une amorce pré-existante et d’une matrice
L’amorce d’ARN est utile pour la…
réplication
L’amorce d’ADN est utile pour la…
réparation et la recombinaison
Que permet l’activité endonucléase 3’ –> 5’?
De contrôler la fidélité de la réplication en éliminant les nucléotides incorporés par erreur
Voir diapo 8 parce que je suis vraiment WTF
J’AI HÂTE D’AVOIR FINI LA SESSION😭😭😭
Quels sont les types de polymérase?
Polymérase 1
Polymérase 2
Polymérase 3
Polymérase 4
Polymérase 5
Quels sont les caractéristiques de l’ADN polymérase 1?
Activité polymérase 5’ → 3’
Activité exonucléase 3’ → 5’ pour la relecture
Activité exonuclase 5’→ 3’ permet d’éliminer les amorces d’ARN des fragments d’Okazaki pendant la réplication
Son activité polymérase permet la synthèse d’ADN destiné à être immédiatement suturé par une ADN ligase
Enzyme peu processive, elle se dissocie de la matrice après l’ajout d’une vingtaine de nucléotides
Quels sont les caractéristiques de l’ADN polymérase 2?
Activité polymérase 5’ → 3’
Activité exonucléase 3’ → 5’
Impliquée dans la réparation de l’ADN endommagé
Peu processive
Quels sont les caractéristiques de l’ADN polymérase 3?
Principale polymérase intervenant dans l’élongation du brin avancé et de la synthèse des fragments d’Okazaki
Très processive
Quels sont les caractéristiques de l’ADN polymérase 4 et 5?
Polymérases de la famille Y caractérisées par leur capacité à tolérer des lésions de l’ADN lors de la réplication (polymérase de translésion)
Ne possèdent pas de fonction exonucléase 3’-5’
Leur fidélité lors de la synthèse de l’ADN est faible, même en absence d’ADN endommagé
V/F : L’ADN polymérase 2 est la principale enzyme impliquée dans la réplication du chromosome bactérien
Faux (3)
Le ________________________________ de l’ADN polymérase 3 contient ___ sous-unités
complexe dimérique asymétrique
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L’ADN polymérase 3 est un __________________ responsable de l’activité de ______________
polypeptide alpha
polymérisation
Que contient la sous-unité epsilon de l’ADN polymérase 3?
L’activité exonucléase 3’ → 5’
Que forment les sous-unité beta de l’ADN polymérase 3? Que permettent-ils?
Forme un anneau coulissant qui entoure la double hélice d’ADN et coulisse le long de la molécule
Permet de maintenir le noyau de l’enzyme proche de l’ADN et empêche la polymérase de se détacher trop rapidement
L’activité de correction d’erreur de l’ADN polymérase dépend de quoi? Où se produit cette activité?
De son activité 3’ → 5’ exonucléase
À l’endroit où l’enzyme se sépare de son site d’activité 5’ → 3’ polymérase
Qu’est-ce qu’il se produit lors de l’introduction d’un nucléotide désapparié dans le domaine de polymérisation?
La synthèse d’ADN arrête
Qu’est-ce que la technique PCR?
Polymerase chain reaction
Utilise une polymérase résistante à la température (jusqu’à 100°C) isolée de la bactérie (Taq pol)
1 cycle de la technique PCR à 3 étapes. Nomme-les
Dénaturation
Hybridation des amorces
Élongation
Combien de temps faut-il pour faire 30 cycles de la technique PCR?
2-3h
Que se produit-il lors de l’étape de la dénaturation?
94°C pendant 2 minutes
Séparation des 2 brins d’ADN
Que se produit-il lors de l’étape d’hybridation des amorces?
Les 2 amorces s’attachent à leur séquence complémentaire
Le choix du couple d’amorces définit les limites 5’ et 3’ de la séquence à amplifier (amplicon)
Température dépend de la séquence des amorces Th = Tm - 5°C; pendant 30 secondes (exemple 55-56°C)
Les amorces doivent avoir un maximum de divergence et éviter l’autocomplémentarité (éviter l’hybridation entre amorces).
Pas plus de 2°C de différence entre les Tm des amorce
Que se produit-il lors de l’étape d’élongation?
Enzyme a une excellente activité au-dessus de 70°C (température fixée à 72°C, 2 min)
En résumé, que se produit-il lors de la technique PCR?
Il y a une amplification exponentielle d’un fragment d’ADN (la quantité double à chaque cycle)
Compare le PCR classique contre le RT-PCR
PCR classique :
Recherche d’anomalie génétique
Génotypage
Empreinte génétique
Clonage
RT-PCR :
Mesurer l’expression de gène d’intérêt
Alternative au northern blot
La réplication de l’ADN débute à partir de ____________________________ et progresse dans les ________________ à partir de ce point créant ____________________________
l’origine de réplication
deux sens
2 fourches de réplication
V/F : La réplication de l’ADN est bidirectionnelle
Vrai
La réplication de l’ADN peut être divisée en 3 étapes principales. Lesquelles?
Initiation
Élongation
Terminaison
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