Cohen 5.2 Flashcards
Nommez ce concept:
Vise à remplacer ou complémenter un allèle mutant défectueux par un allèle fonctionnel ou à surexprimer ou inhiber une protéine dont l’activité aurait un impact thérapeutique
Thérapie génique
La Thérapie génique consiste à…
Faire pénétrer des gènes dans les cellules ou les tissus d’un individu pour traiter une maladie.
Nommez les caractéristiques d’un vecteur idéal. (7)
- Produire le vecteur à des concentrations élevés afin de transduire le plus de cellules possibles.
- Peut reproduire et facilité la production sans risque de recombinaison.
- Permet d’insérer des transgènes de grande taille.
- Peut transduire des cellules souches, différenciées ou en division
- Peut cibler un type cellulaire spécifique
- Peut s’intégrer à des sites spécifiques dans le génome ou peut être maintenue stable comme épisome
- Ne contient pas des composantes qui induisent une réponse immunitaire délétère
Décrivez les étapes du vecteur viraux (Adénovirus) de 1ère génération.
- Déléter les gènes E1A/B et le E3 du génome sauvage de l’Adénovirus
- Transduire le vecteur dans une cellule de la lignée d’encapsulation qui possède les gènes délétés
- Les virus vont se répliquer dans la cellule puis être relâchés
- Les virus relâchés vont infectés la cellule cible mais ils ne pourront pas se répliquer
Nommez les avantages des vecteurs viraux d’Adénovirus. (4)
- Peut accommoder l’insertion de séquence ADN de près de 37 kb
- Peut être produit avec des titres élevés
- Peut transduire un grand nombre de cellules de façon efficace
- Peut transduire des cellules qui ne se divisent pas
Quels sont les désavantages des vecteurs viraux d’Adénovirus? (3)
- Les délétions induisent des réactions inflammatoires importantes
- vecteur est sous forme épisomale
- Si on veut administrer de façon répété, il faut pas qu’il y ait de réponse immunitaire.
Comment fonctionne le vecteur Adénovirus de 3e génération?
- Il y a 2 vecteur: 1 helper et 1 gutless.
- Le vecteur helper contient les séquences: psy, 2 LoxP et 2 LTR. Il n’y a pas de E1.
- Le vecteur Gutless contient les séquences: psy, 2 LTR et le transgène d’intérêt. Il y a délétion de E1. - Cotransfection des 2 vecteurs dans la lignée d’encapsulation. La lignée d’encapsidation contient E1 et la recombinase CRE.
- CRE join les 2 séquences LoxP ensemble ce qui délètent la séquence psy qui est entre les LoxP sur le vecteur helper.
- La transcription des vecteurs helpers va transcrire les protéines de la capsule du nouveau virion.
- Le virion va ensuite pouvoir infecter la cellule cible avec notre transgène
Est-ce que le vecteur Adénovirus de 3e génération, qui dépend d’un helper, contient des séquences virales?
Non!
Mais il a une faible immunogénicité, une expression prolongée et un taux de production plus limitée.
Le virus AAV requière-t-il un virus auxiliaire pour se répliquer?
Oui!
Que contient le virus AAV comme protéine?
Cap (protéine de la capside), Rep (enzyme pour la réplication et l’intégration) et un motif d’encapsidation
Le virus AAV infecte quelles sorte de cellules et s’intègre à quelle site?
Infecte plusieurs types cellulaires et l’ADN viral s’intègre préférentiellement à un site spécifique au niveau du chromosome 19.
Nommez les 5 avantages au vecteur AAV.
- Aucun gènes viraux
- Potentiel de mutation par insertion = faible
- Expression persistante et stable
- Transduction de cellules en arrêt de division
- Non pathogène
Nommez les désavantages du vecteur AAV.
- il y a une limite de taille du transgène
- production complexe et titre viraux faible
Nommez le nom de cette maladie:
-Conditions non-traitables qui mènent à une perte totale de la vue.
-Mutations au niveau des photorécepteurs et de protéines de l’épithélium
pigmentaire de la rétine.
-Correction du défaut génétique dans des modèles animaux via des vecteurs
AAV très prometteur.
Rétinopathie Héréditaire
Les avantages des vecteurs viraux des Rétrovirus simples sont… (5)
-Transduction élevé
-Peut s’intégrer dans le génome de la cellule cible (expression persistante du transgène)
-Gènes viraux = absents
-Peut insérer jusqu’à 9 kb de matériel génétique
-Tropisme cellulaire manipulable par pseudotypage avec des
glycoprotéines d’Env ayant des spécificités cellulaires distinctes
