Chapitre 2 - Observations microscopiques des microorganismes (Partie 1) Flashcards
Nommer les deux types de microscopes possible
- Microscope photonique(optique)
- Microscope électronique
Quel type de microscope utilise la lumière pour fonctionner?
Microscope photonique(optique)
Quel type de microscope utilise des électrons pour fonctionner?
Microscope électronique
Si quelqu’un veut observer des bactéries, quel microscope est favorisé?
Microscope photonique(optique), car sert pour les organismes de ‘‘plus grande taille’’
Si quelqu’un veut observer des virus, quel microscope est favorisé?
Microscope électronique, car sert pour les organismes très petits
Vrai ou faux : les microscopes photoniques permettent d’avoir des longueurs d’onde beaucoup plus petites, ce qui permet d’agrandir les images de beaucoup sans perdre la résolution
Faux, microscope électronique
Si quelqu’un veut agrandir énormément une image tout en gardant une bonne qualité, quel microscope devrait-il favoriser?
microscope électronique
Nommer les trois composantes du microscope photonique
- Condensateur
- Objectif
- Oculaire
Fonction du condensateur dans un microscope photonique
Pour moduler faisceau de photons
Fonction de l’oculaire dans un miscroscope photonique
Agrandir foyer de l’image
Formule du grandissement
Objectif X Oculaire
Définir la limite de résolution
Distance minimale entre deux points qui peuvent être perçus comme étant distincts
Longueurs d’ondes visibles par l’humain
400 à 700 nm
Longueurs d’ondes ultraviolet
180 à 400 nm
Pourquoi est-il intéressant d’utiliser un verre opaque aux UV, par exemple du quartz, dans un microscope photonique?
Car cela permet de diminuer lamda donc le facteur de résolution aussi
Donner un avantage et un inconvénient d’utiliser un verre opaque aux UV comme le quartz dans un microscope photonique
Avantage : permet de diminuer le facteur de résolution
Désavantage : besoin de transformation optique pour pouvoir observer (car extérieur du visible) = perd l’avantage d’utiliser UV
Donner l’avantage d’utiliser l’huile d’immersion en microscopie photonique
Aucune lentille dans l’air ne peut avoir une ouverture numérique supérieure à 1,00 = utilisation huile d’immersion qui a le même indice de réfraction que le verre = pénétration des rayons lumineux qui ne pénétraient pas dans l’objectif à cause de la réflexion et de la réfraction = augmentation de l’ouverture numérique et de la résolution
Qui suis-je : mesure de combien une substance ralentit la vitesse de la lumière
Indice de réfraction
Vrai ou faux : Une lentille ayant une distance focale courte agrandit plus un objet qu’une lentille dont la distance focale est plus grande
Vrai
Qui suis-je : distance entre le centre de la lentille et le foyer
Distance focale
Expliquer pourquoi on cherche à avoir une limite de résolution la plus petite possible
Plus L.R. est petit, plus la résolution augmente et plus des détails fins peuvent être discernés dans un échantillon
Nommer deux façons de diminuer la limite de résolution
1) Diminuer la longueur d’onde
2) Augmenter l’ouverture numérique
Distance minimale à laquelle un microscope optique permet de distinguer deux points séparés
0,2um
Nommer une conséquence résultant de la distance minimale à laquelle un microscope optique permet de distinguer deux points séparés
Grande majorité des virus ne peut pas être observée à l’aide d’un microscope optique
Nommer une limite propre au microscope à fond clair
Contraste
Qui suis-je : capacité de distinguer une structure de son environnement
Contraste
Pourquoi est-ce que le contraste dans un microscope à fond clair est-il très bas?
Car on observe les microorganismes dans leur état
Vrai ou faux : il est plus facile d’observer des microorganismes de petites tailles avec un microscope à fond clair que des microorganismes à grande taille
Faux, grande taille + facile
Nommer une façon d’augmenter le contraste
Coloration
Nommer les trois types de microscope optique permettant d’observer des microorganismes vivants tout en ayant une image claire et détaillée
Microscope à fond noir, microscope à contraste de phase et microscope à contraste d’interférence différentielle
Nommer les désavantages de la technique de coloration
- Peu de colorants vitaux
- Exigent fixation + coloration
Désavantage de la fixation lors de la coloration
fixation implique que les microorganismes sont morts = donc obs. microorganismes morts
Qui suis-je : microscope utilisant un cône creux de lumière dirigé vers l’échantillon de sorte que les rayons non réfléchis et non réfractés n’entrent pas dans l’objectif
Microscope à fond noir
Qui suis-je : microscope utilisant un condensateur de Abbé et un éclairage oblique
Microscope à fond noir
Vrai ou faux : dans un microscope à fond noir, les cellules sont mortes
Faux, vivantes
Nommer les deux types d’ondes lumineuses qui passent à travers une préparation humide
1) ondes déviées qui interagissent avec les structures cellulaires
2) ondes non déviées passant autour et dans la cellule sans intéragir avec elle
Expliquer le principe d’un microscope à contraste de phase
1) bactéries sont mises dans une préparation humide
2) Deux types d’ondes lumineuses passent à travers une préparation humide = crée un phénomène de déphasage
3) Peut créer différentes intensités lumineuses
Dans un microscope à contraste de phase, quelle lumière est généralement non déviée?déviée?
Non déviée = environnement
Déviée = bactérie
Utilisations courantes des microscopes à fond clair
- Mobilité microbienne
- Déterminer la forme des cellules vivantes
- Détecter des constituants bactériens (ex. endopore)
- Bcp utilisé pour l’étude des cellules eucaryotes
Qui suis-je : type de microscope ayant un système de lentilles polarisantes contrôlées par informatique et donnant des images colorées grâce à une modification de la polarisation
Microscope à contraste d’interférence différentielle
Différence entre les microscopes optiques et les microscopes à fluorescence
Microscopes optiques = forment une image à partir de la lumière qui passent à travers un échantillon
Microscopes à fluorescence = image vue parce que l’objet émet de la lumière
Expliquer le fonctionnement d’un microscope à fluorescence
Voir feuille
Utilité des fluorochromes vitaux
Permettent de faire la distinction entre des cellules vivantes et mortes (colorations différentes)
Expliquer comment il est possible de différencier structurellement les cellules vivantes de celles mortes grâce aux fluorochromes vitaux
Cellules vivantes = exclusion par la membrane cytoplasmique
cellules mortes = membrane cytoplasmique perméable
Nommer une application de la microscopie à fluorescence
- Immunofluorescence (anticorps spécifiques)
Expliquer le principe d’immunofluorescence
1) Anticorps spécifiques à une protéine/organisme
2) Couplage anticorps-fluorochromes
3) S’il y a reconnaisance = fluorescence si non anticorps va être éliminé
Nommer une technique utilisée par les microbiologistes pour dénombrer dans un échantillon un genre spécifique ou un type particulier de microorganisme
FISH (hybridation fluorescente in situ)
Nommer deux limitations à la technique FISH
- Spécificité
- Diffusion de la sonde
Qui suis-je : processus par lequel les structures internes et externes des cellules et des organismes sont conservées et fixées en place
Fixation
Nommer les deux propritétés communes des colorants utilisés pour visualiser les microorganismes
- Colorent grâce à la présence de groupements chromophores possédant des liaisons conjuguées
- Peuvent se lier aux cellules par interaction ionique, covalente ou hydrophobe
Qui suis-je : coloration dont le but est de couvrir le frotti de colorant afin de déterminer la taille, la forme et l’arrangement des cellules
Coloration simple
Nommer les sortes de colorants fréquemment utilisés pour une coloration simple
- Bleu de méthylène
- Cristal violet
Expliquer le principe de coloration négative
Coloration négative = fond coloré,mais pas la cellule
Expliquer les étapes de la coloration de Gram
1) Cristal violet puis rincer à l’eau
2) iode puis rincer à l’eau
3) Alcool dénaturant puis rincer à l’eau (Gram + = violettes et Gram - = incolores)
4) Safranine (contre-colorant), rincer à l’eau puis sécher (Gram + = violettes et Gram - = rouges)
À quoi sert l’iode dans le coloration de Gram?
Sert de mordant : substance qui facilite les interactions entre les cellules et le colorant pour que les cellules soit plus fortement colorées
À quoi sert l’alcool dans la coloration de Gram?
Sert de dénaturant : permet de décoloré le frotti et engendrer l’aspect différentiel de la coloration de Gram
Type de coloration différentielle utilisée pour les mycobactéries comme la lèpre et la tuberculose
Coloration alcoolo-acido résistance
Qui suis-je : contre-colorant utilisé dans la coloration de Gram
Safranine
Nommer 3 types de coloration différentielle
- Coloration de Gram
- Coloration alcoolo-acido résistance
- Coloration des structures (endospores,capsules,flagelles et corps d’inclusion)
Qui suis-je : type de coloration différentielle utilisant la capacité des bactéries à retenir du cabrol-Fuchsine
Coloration par alcool-acido résistance
