BM9 4) Mécanisme de recombinaison homologue du phage lambda

Question 1

Que dirige l’intégrase du phage lambda?

Answer 1

L’intégration puis l’excision de l’ADN viral dans un chromosome bactérien hôte

Question 2

Quel est le nom de l’intégrase du phage lambda?

Answer 2

lambda-Int

Question 3

Que catalyse l’intégrase du phage lambda?

Answer 3

La recombinaison entre 2 sites spécifiques: attP (attachement phage) et attB (attachement Bactérie)

Question 4

Pourquoi le complexe Protéine-ADN formé par l’intégrase nécessite des protéines accessoires dites architecturales?

Answer 4

1) Initier la formation du complexe protéine-ADN
2) Intégrer le génome du phage au génome bactérien
3) Exciser l’ADN

Question 5

De quoi est composé le coeur des sites attP et attB?

Answer 5

• Une région centrale de croisement pour l’échange des brins (30 pb)
• Cette dernière est entourée de 2 sites de liaison à lambda-Int

Question 6

En quoi diffère attP d’attB?

Answer 6

Par la présence d’autres sites de liaison à des protéines sur 240 pb supplémentaires

Question 7

Comment sont organisés les sites de liaisons supplémentaires d’attP?

Answer 7

De manière très asymétrique

Question 8

Comment appelle-t-on les sites de liaison supplémentaires d’attP?

Answer 8

Les bras P et P’ d’attP

Question 9

Quel rôle joue l’asymétrie des bras d’attP?

Answer 9

Rôle important dans la régulation de l’intégration de l’ADN du phage lambda

Question 10

De quoi est composé l’enzyme intégrase lambda?

Answer 10

2 domaines de liaison (1 avec le coeur, 1 avec le bras)

Question 11

Avec quoi se lie le domaine de liaison avec le bras?

Answer 11

aux sites P1, P2 et P’ répartis sur les 2 bras

Question 12

À quoi servent les sites de liaisons à des protéines architecturales des bras?

Answer 12

à déterminer le sens et l’efficacité de la recombinaison

Question 13

Que nécessite essentiellement l’intégration du génome du phage dans le génome bactérien?

Answer 13

attB
attP
lambda-Int
Protéine architecturale
FIH

Question 14

Que signifie FIH?

Answer 14

Facteur d’intégration d’hôte

Question 15

Que sont les FIH?

Answer 15

des protéines de liaison à l’ADN qui courbent la double hélice à 160 degrés

Question 16

Quels sont les sites de liaison de FIH sur les bras d’attP?

Answer 16

H1
H2
H’

Question 17

Qu’arrive-t-il lors que FIH est lié à H’?

Answer 17

Elle va se lier à un des 2 sites de liaison des bras de attP (P1 ou P’1) à lamda-int
et avec 1 des 2 sites présents dans la région centrale (C ou C’)

Question 18

Quel type de liaison est la liason à un des 2 sites de liaison des bras de attP (P1 ou P’1) à lamda-int?

Answer 18

Forte

Question 19

Quel type de liaison est la liaison avec 1 des 2 sites présents dans la région centrale (C ou C’)?

Answer 19

faible

Question 20

Que permet FIH?

Answer 20

Permet à lamda-int d’accéder au site de clivage

Question 21

Qu’a-t-on une fois que l’ADN du phage a intégré le chromosome de l’hôte?

Answer 21

a) 2 sites hybrides sont créées aux jonctions entre les 2 molécules d’ADN attL et attR. Les bras sont désormais séparés.
b) Aucune des 2 régions du coeurs sont à même d’assembler et d’activer un complexe de recombinase lambda-Int. Le site de clivage est démentelé.

Question 22

Que médie la protéine architecturale Xis?

Answer 22

L’excision de l’ADN du phage

Question 23

Quel est le mécanisme de Xis?

Answer 23

• Xis se lie à l’ADN aux sites X1 et X2 du bras P de attP pour le courber à 140 degrés.
• Xis, lambda-int et FIH stimulent ensemble la formation d’un complexe Protéine-ADN sur attR
• Le complexe protéine-ADN sur attR intéragit avec attL pour initier la recombinaison entre attR et attL.
• En même temps, Xis inhibe une nouvelle intégration d’ADN de phage, ce qui empêche la recombinaison entre attP et attB