BM9 4) Mécanisme de recombinaison homologue du phage lambda Flashcards
Que dirige l’intégrase du phage lambda?
L’intégration puis l’excision de l’ADN viral dans un chromosome bactérien hôte
Quel est le nom de l’intégrase du phage lambda?
lambda-Int
Que catalyse l’intégrase du phage lambda?
La recombinaison entre 2 sites spécifiques: attP (attachement phage) et attB (attachement Bactérie)
Pourquoi le complexe Protéine-ADN formé par l’intégrase nécessite des protéines accessoires dites architecturales?
1) Initier la formation du complexe protéine-ADN
2) Intégrer le génome du phage au génome bactérien
3) Exciser l’ADN
De quoi est composé le coeur des sites attP et attB?
- Une région centrale de croisement pour l’échange des brins (30 pb)
- Cette dernière est entourée de 2 sites de liaison à lambda-Int
En quoi diffère attP d’attB?
Par la présence d’autres sites de liaison à des protéines sur 240 pb supplémentaires
Comment sont organisés les sites de liaisons supplémentaires d’attP?
De manière très asymétrique
Comment appelle-t-on les sites de liaison supplémentaires d’attP?
Les bras P et P’ d’attP
Quel rôle joue l’asymétrie des bras d’attP?
Rôle important dans la régulation de l’intégration de l’ADN du phage lambda
De quoi est composé l’enzyme intégrase lambda?
2 domaines de liaison (1 avec le coeur, 1 avec le bras)
Avec quoi se lie le domaine de liaison avec le bras?
aux sites P1, P2 et P’ répartis sur les 2 bras
À quoi servent les sites de liaisons à des protéines architecturales des bras?
à déterminer le sens et l’efficacité de la recombinaison
Que nécessite essentiellement l’intégration du génome du phage dans le génome bactérien?
attB attP lambda-Int Protéine architecturale FIH
Que signifie FIH?
Facteur d’intégration d’hôte
Que sont les FIH?
des protéines de liaison à l’ADN qui courbent la double hélice à 160 degrés
Quels sont les sites de liaison de FIH sur les bras d’attP?
H1
H2
H’
Qu’arrive-t-il lors que FIH est lié à H’?
Elle va se lier à un des 2 sites de liaison des bras de attP (P1 ou P’1) à lamda-int
et avec 1 des 2 sites présents dans la région centrale (C ou C’)
Quel type de liaison est la liason à un des 2 sites de liaison des bras de attP (P1 ou P’1) à lamda-int?
Forte
Quel type de liaison est la liaison avec 1 des 2 sites présents dans la région centrale (C ou C’)?
faible
Que permet FIH?
Permet à lamda-int d’accéder au site de clivage
Qu’a-t-on une fois que l’ADN du phage a intégré le chromosome de l’hôte?
a) 2 sites hybrides sont créées aux jonctions entre les 2 molécules d’ADN attL et attR. Les bras sont désormais séparés.
b) Aucune des 2 régions du coeurs sont à même d’assembler et d’activer un complexe de recombinase lambda-Int. Le site de clivage est démentelé.
Que médie la protéine architecturale Xis?
L’excision de l’ADN du phage
Quel est le mécanisme de Xis?
- Xis se lie à l’ADN aux sites X1 et X2 du bras P de attP pour le courber à 140 degrés.
- Xis, lambda-int et FIH stimulent ensemble la formation d’un complexe Protéine-ADN sur attR
- Le complexe protéine-ADN sur attR intéragit avec attL pour initier la recombinaison entre attR et attL.
- En même temps, Xis inhibe une nouvelle intégration d’ADN de phage, ce qui empêche la recombinaison entre attP et attB
