BM9 3) Les recombinases spécifiques de site

Question 1

Quelles sont les 2 familles de recombinases spécifiques de site?

Answer 1

Recombinases à sérine

Recombinases à tyrosine

Question 2

Qu’engendre la coupre de l’ADN par les recombinases spécifiques de site?

Answer 2

La formation d’un complexe protéine-ADN intermédiaire

Question 3

Comment est la réaction de formation d’un complexe protéine-ADN intermédiaire?

Answer 3

Conservatrice

Question 4

Pour quelle liaison le complexe protéine-ADN intermédiaire conserve-t-elle l’énergie de la liaison phosphodiester?

Answer 4

Pour la liaison Protéine-ADN

Question 5

La réaction conservatrice du complexe protéine-ADN est-elle réversible?

Answer 5

oui

Question 6

Quelles sont les 2 étapes du mécanisme conservatif chez la recombinase à sérine

Answer 6

1) Le résidu sérine (-OH) fait une attaque nucléophile sur le pont phosphodiester
2) Le groupe hydroxyle du brin clivé peut attaquer à son tour la liaison covalente protéine-ADN de la recombinase, ce qui scell l’ADN et libère l’enzyme

Question 7

Que comprend la recombinase à sérine?

Answer 7

• 1 recombinase tétramèrique dont les 4 sous unités sont physiquement liées
• 2 molécules double brin clivées
• Région centrale plane et hydrophobe instable
• Régions hydrophyles + et -

Question 8

Chaque sous unités (R1, R2, R3 et R4) de la recombinase à sérine catalysent le clivage de combien de brins?

Answer 8

un seul

Question 9

Combien de coupures simple brin sont nécessaires avant l’échange des brins avec la recombinase à sérine?

Answer 9

4

Question 10

Avec la recombinase à sérine, quelles régions sont clivées?

Answer 10

R1 avec R2

R3 avec R4

Question 11

Avec la recombinase à sérine, quelles régions sont recombinées?

Answer 11

R2 avec R3

R1 avec R4

Question 12

Qu’arrive-t-il après l’échange de brins avec la recombinase à sérine?

Answer 12

les 3’ OH libres de chacun des brins clivés attaquent les liaisons covalentes Recombinase-ADN de leurs nouveaux partenaires.

Question 13

Avec la recombinase à sérine, qu’arrive-t-il après que les 3’ OH libres de chacun des brins clivés attaquent les liaisons covalentes Recombinase-ADN de leurs nouveaux partenaires?

Answer 13

Cela libère l’énergie conservée par les 4 complexes covalents Protéine-ADN

Question 14

Pour quoi est utilisé l’énergie libérée avec la recombinase à sérine?

Answer 14

Pour sceller les brins recombinés

Question 15

Que permet la région centrale plane et hydrophobe instable de la recombinase à sérine?

Answer 15

Elle permet de faire une rotation de 180 degrés pour échanger les brins entre l’ADN #1 et l’ADN #2

Question 16

À quoi servent les régions hydrophiles + et - ?

Answer 16

À stabilser la structure de l’enzyme dans sa position initiale et après sa rotation à 180 degrés

Question 17

Quel est le synonyme de Complexe protéine-ADN intermédiaire?

Answer 17

Complexe synaptique à liaison covalente

Question 18

Que fait la recombinase à tyrosine?

Answer 18

Elle coupe et scelle 1 paire de brins à la fois donc échange 1 brin à la fois

Question 19

Où est le site de coupure de la recombinase à tyrosine?

Answer 19

1er nucléotide de la région de croisement

Question 20

Quelles sont les étapes de la recombinaison par la recombinase à tyrosine?

Answer 20

1a) R1 et R3 coupent l’ADN en 3’OH avec leur résidu tyrosine
1b) formation d’un complexe Tyrosine-P-3’-ADN.
1c) Échange des 2 premiers brins lorsque les extrémités 5’-OH attaquent les ponts Tyrosine-P-3’-ADN
2) R2 et R4 agissent de la même manière.

Question 21

Quelle est la structure de la recombinase à tyrosine?

Answer 21

Tétramère où chaque sous unité se lie à un site lox, mais où seulement une paire de sites à la fois a une activité catalytique.

Question 22

Qu’est-ce qui assure la coupure séquencielle d’un seul brin à la fois?

Answer 22

1 changement de conformation des deux paires de dimères qui permet de couper l’autre brin