BM9 3) Les recombinases spécifiques de site Flashcards
Quelles sont les 2 familles de recombinases spécifiques de site?
Recombinases à sérine
Recombinases à tyrosine
Qu’engendre la coupre de l’ADN par les recombinases spécifiques de site?
La formation d’un complexe protéine-ADN intermédiaire
Comment est la réaction de formation d’un complexe protéine-ADN intermédiaire?
Conservatrice
Pour quelle liaison le complexe protéine-ADN intermédiaire conserve-t-elle l’énergie de la liaison phosphodiester?
Pour la liaison Protéine-ADN
La réaction conservatrice du complexe protéine-ADN est-elle réversible?
oui
Quelles sont les 2 étapes du mécanisme conservatif chez la recombinase à sérine
1) Le résidu sérine (-OH) fait une attaque nucléophile sur le pont phosphodiester
2) Le groupe hydroxyle du brin clivé peut attaquer à son tour la liaison covalente protéine-ADN de la recombinase, ce qui scell l’ADN et libère l’enzyme
Que comprend la recombinase à sérine?
- 1 recombinase tétramèrique dont les 4 sous unités sont physiquement liées
- 2 molécules double brin clivées
- Région centrale plane et hydrophobe instable
- Régions hydrophyles + et -
Chaque sous unités (R1, R2, R3 et R4) de la recombinase à sérine catalysent le clivage de combien de brins?
un seul
Combien de coupures simple brin sont nécessaires avant l’échange des brins avec la recombinase à sérine?
4
Avec la recombinase à sérine, quelles régions sont clivées?
R1 avec R2
R3 avec R4
Avec la recombinase à sérine, quelles régions sont recombinées?
R2 avec R3
R1 avec R4
Qu’arrive-t-il après l’échange de brins avec la recombinase à sérine?
les 3’ OH libres de chacun des brins clivés attaquent les liaisons covalentes Recombinase-ADN de leurs nouveaux partenaires.
Avec la recombinase à sérine, qu’arrive-t-il après que les 3’ OH libres de chacun des brins clivés attaquent les liaisons covalentes Recombinase-ADN de leurs nouveaux partenaires?
Cela libère l’énergie conservée par les 4 complexes covalents Protéine-ADN
Pour quoi est utilisé l’énergie libérée avec la recombinase à sérine?
Pour sceller les brins recombinés
Que permet la région centrale plane et hydrophobe instable de la recombinase à sérine?
Elle permet de faire une rotation de 180 degrés pour échanger les brins entre l’ADN #1 et l’ADN #2
À quoi servent les régions hydrophiles + et - ?
À stabilser la structure de l’enzyme dans sa position initiale et après sa rotation à 180 degrés
Quel est le synonyme de Complexe protéine-ADN intermédiaire?
Complexe synaptique à liaison covalente
Que fait la recombinase à tyrosine?
Elle coupe et scelle 1 paire de brins à la fois donc échange 1 brin à la fois
Où est le site de coupure de la recombinase à tyrosine?
1er nucléotide de la région de croisement
Quelles sont les étapes de la recombinaison par la recombinase à tyrosine?
1a) R1 et R3 coupent l’ADN en 3’OH avec leur résidu tyrosine
1b) formation d’un complexe Tyrosine-P-3’-ADN.
1c) Échange des 2 premiers brins lorsque les extrémités 5’-OH attaquent les ponts Tyrosine-P-3’-ADN
2) R2 et R4 agissent de la même manière.
Quelle est la structure de la recombinase à tyrosine?
Tétramère où chaque sous unité se lie à un site lox, mais où seulement une paire de sites à la fois a une activité catalytique.
Qu’est-ce qui assure la coupure séquencielle d’un seul brin à la fois?
1 changement de conformation des deux paires de dimères qui permet de couper l’autre brin
