BM8 2) Complexes protéiques Flashcards
Quelles sont les 4 protéines de recombinaison homologue chez E. coli?
- RecBCD
- RecA
- RuvAB
- RuvC
RecBCD est formé de 3 sous-unités : RecB, RecC et RecD. Quelles sont les 2 fonctions de ce complexe protéique?
Nucléase
Hélicase
RecBCD est formé de 3 sous-unités : RecB, RecC et RecD. Quelles sont les 2 rôle successifs de ce complexe protéique?
1) Génère des extrémités simple brin
2) Recrute la protéine d’échange de brins RecA sur le simple brin.
Que fait RecBCD pour progresser le long de l’ADN?
Il hydrolyse de l’ATP (Fonction hélicase)
Elle va séparer les deux brins.
Par quoi sont contrôlés les actions de RecBCD dans l’ADN?
Les sites CHI (Crossover Hot spot Instigator)
Quel est le rôle spécifique de RecB?
- Hélicase 3’ vers 5’
- Nucléase multifonctionnelle
Quel est le rôle spécifique de RecC?
Reconnaitre les séquences CHI
Quel est le rôle spécifique de RecD?
Hélicase 5’ vers 3’.
Est ce que les actions nucléases et hélicases de RecBCD se succèdent ou sont simultanées?
Simultanées
Que ce passe-t-il lors que RecBCD reconnait le site CHI?
L’action nucléase est inhibée sur un des deux brins.
Quand RecBCD rencontre la séquece CHI, comment fait-on pour déterminer sur quel brin est ce que l’action nucléase est inhibée?
Ça dépend de l’orientation de CHI.
RecC se lie fortement au site CHI = ça favorise la digestion de l’autre brin.
Si CHI est dans le sens 3’ vers 5’, quel brin a une nucléase inhibée?
Le brin parcouru dans le sens 3’ vers 5’ n’est pas dégradée!
Si CHI est dans le sens 3’ vers 5’, quel brin a une nucléase encore active?
Le brin 5’ vers 3’ continue d’être dégradé.
Que ce passe-t-il à la fonction hélicase lorsque RecC reconnait CHI et que l’autre brin continue d’être dégradé?
RecD est inactivée (Hélicase);
La fonction hélicase de RecB reste active.
Alors, avant le passage du site CHI, que ce passe-t-il?
Les hélicases RecB et RecD présentent les 2 brins au site nucléase de RecB.
Alors, après le passage du site CHI, que ce passe-t-il?
CHI reconnu par RecC protège CHI de la nucléase de RecB :
- Ça induit un changement de conformation de RecBCD.
Que ce passe-t-il lorsque RecBCD change de conformation?
RecBCD va recruter les protomères de RecA sur le brin portant 5’-CHI-3’ et il y a formation du filament de RecA.
Comment est ce que les séquences CHI font-elles contrôler l’activité de RecBCD?
1) Elles augmentent 10x la fréquence de recombinaison!
2) Leur influence reste importante sur une région environnante de 20 kb.
Décrire la fréquence à laquelle la séquence CHI est présente dans le génome de E. coli.
Elle est sureprésenté dans le génome.
1000 sites.
Que ce passe-t-il à l’ADN étranger qui entre dans E. coli?
Il sera pris en charge par RecBCD et sera dégrader entièrement car il n’y a pas de séquence CHI spécifique comme chez E. coli.
Que ce passe-t-il si de l’ADN provenant d’autres E. coli entre dans E. coli?
Ces molécules d’ADN seront utilisées pour faire de la recombinaison, car elles ont les mêmes séquences CHI d’E. coli en très grand nombre.
RecA fait partie de quelle famille de protéines?
Les «Échangeuses de brins».
Que font les protéines de la famille des échangeuses de brins?
Elles dirigent l’appariement de molécules D’ADN homologues
- Reconnaissance des régions homologues
- Appariement des molécules.
En un seul mot, décrire comment RecA fonctionne?
En agglomérats!
100 s.u. pour 300b
À quoi sert le filament des RecA?
La recherche du brin homologue se fait à l’intérieur du filament des RecA.
Sur quel brin est ce que RecA va se lier?
Il est recruté par RecBCD et se lie à l’ADN simple brin (filament s’alonge de 5’ vers 3’).
Donc, les extrémités 3’-OH des brins cassés sont favorisées.
Quelles sont les étapes de la recherche du brin homologue par RecA?
1) RecA se lie à une molécule simple brin
2) Complexe RecA-ADNsb recherche activement la région complémentaire sur un ADN db.
Quel est le critère de recherche pour le brin homologue de RecA?
La complémentarité des bases.
