BASE MOL DU DEV EMBRYONNAIRE PART 2

Question 1

Action moléculaire de Wnt

Answer 1

Wnt possède 2 récepteurs (Frizzled et LRP). En fonction de son adhésion à ces derniers, β-cat pourra migrer dans le noyau…

Question 2

Sans Wnt β-cat

part 1

Answer 2

β-cat phosphorylée -> séquestration dans le cytoplasme
elle est immobilisée avec une vingtaine de protéines, dont APC, Axin, GSK3β. Cela induit un signal d’ubiquitination qui induit la dégradation de la ß-caténine.

Question 3

Sans Wnt ß-cat

part 2

Answer 3

De plus, on a des protéines, dont Groucho, qui occupent la séquence d’ADN à laquelle la β-cat se lie, elles répriment ainsi l’expression du gène cible de la β-caténine

Question 4

Avec Wnt ß-Cat

Answer 4

Wnt s’associe à Frizzled et LRP. La
liaison induit une dissociation de CKIα, GSK, Axin => libération de la β-caténine déphosphorylée
Une protéine Dsh (Dishevelled) va être capable de favoriser la libération de la β-caténine.
La migration de β-cat dans le noyau induit la transcription de nombreuses
protéines dont Chordin

Question 5

Action Lithium

Answer 5

-> les sels de lithium, est un oligoélément pouvant induire une hyperdorsalisation.
-> inhibe GSK3 qui, en l’absence de ligand, séquestre β-cat dans le cytoplasme en la maintenant phosphorylée
=> libère ainsi une grande quantité de β-
cat qui rejoint le noyau
=> induit donc la neurulation.

Question 6

Lithium autre propriété

Answer 6

L’excès d’UV détruit les cellules et empêche la dorsalisation des embryons.
xposés aux UV puis traités au lithium => restauration dorsalisation

Question 7

Action BMP4

Answer 7

BMP4, est une protéine impliquée dans la morphogenèse des os. Elle se lie à son récepteur (protéine à activité sérine thréonine kinase), induisant une phosphorylation de R-Smad, qui peut à son tour interagir avec Co-Smad pour in fine
inhiber les gènes de différenciation nerveuse, et activer la différenciation en épiderme à
la place.

Question 8

tissus epidermique et nerveux

Answer 8

Le tissu épidermique et le tissu nerveux dérive du même feuillet embryologique primaire : l’ectoderme. C’est donc la modification de l’expression des molécules qui va conditionner la différenciation.

Question 9

Chordin et BMP4

Answer 9

Chordin va séquestrer BMP4 par une interaction protéine-protéine sur des résidus cystéines (responsable de pont-disulfure) de BMP4. Le complexe BMP4-
Chordin ne peut plus aller sur le récepteur à BMP4 : il y a donc inhibition de son action
Chordin induit donc une dorsalisation.

Question 10

BMP autre fonction dans dev

Answer 10

BMP4 (associé à d’autres signaux) permet d’induire la différenciation en cellules du cartilage (chondrocytes). Le KO des récepteurs BMP (ou Hoxa10) conduit à des développements anormaux du squelette

Question 11

Hippocampe =

Answer 11

L’hippocampe est une région du cerveau impliquée dans la mémoire et
l’apprentissage.

Question 12

BMP autre utilise chez l’adulte

exp

Answer 12

On fait courir des souris chaque jour, et on les euthanasie. On quantifie (par
Western Blot) BMP4 et Noggin dans leur hippocampe

Question 13

BMP autre utilise chez l’adulte
exp
observation

Answer 13

On constate que les souris qui ont couru le plus de jours ont une apparition de PCNA, une augmentation de Noggin et une diminution de BMP4 dans l’hippocampe.

Question 14

BMP autre utilise chez l’adulte
exp
conclu

Answer 14

On peut donc supposer qu’il y a plus de neurones qui apparaissent chez ces
animaux entraînés
BMP4 s’exprime dans l’hippocampe dans la mesure où c’est un frein au
développement neuronal. Lorsque les souris courent, Noggin augmente pour empêcher BMP4 d’agir, et ainsi créer des neurones (à partir de cellules souches neuronales). Il y a donc une neurogenèse adulte induite par Noggin

Question 15

dev muscle squelettique

Answer 15

Dérivent d’un feuillet embryonnaire appelé le mésoderme.
On observe :
-> une phase de prolifération qui permet la production de myocytes primaires.
-> une phase de différenciation qui permet la différenciation en myocytes secondaire qui donnera in fine des fibres musculaire.

Question 16

Muscle marqueur

Answer 16

Il existe beaucoup de marqueurs de différenciation dans ce tissu, ce
qui rend son étude plus facile. Ces molécules sont caractéristiques des cellules musculaires et sont des outils très utiles, car quand une cellule exprime un marqueur de différenciation c’est qu’elle se différencie
Ces cellules ne s’expriment pas au même moment du développement, il y des marqueurs précoces ou tardifs, et certains sont transitoire

Question 17

Signaux proliférateurs

Answer 17

Les signaux proliférateurs correspondent à des molécules qui permettent aux cellules
de proliférer en leur présence.

Question 18

FGF6 exp

Answer 18

On permet l’expression de FGF6 dans la lignée de C2C12 en injectant dans les cellules l’ARNm qui code pour FGF6

Question 19

FGF6 observation

Answer 19

On voit que plus on cultive les cellules
longtemps, plus on a de FGF6
Les cellules qui expriment en permanence FGF6, vont rester à l’état indifférencié et prolifére

Question 20

FGF6 conclu

Answer 20

FGF6 envoie des signaux proliférateurs

Question 21

FGF6 + ARNm

Answer 21

Les ARNm (MyoD, Myf5, myog) 
On  mesure  les  ARNm  par  PCR quantitative en temps réel pour voir l'expression  des  marqueurs. 
On  constate  alors  que  lorsque  les cellules  expriment  FGF6,  il  y  a significativement  moins  de  facteurs de différenciation musculaire

Question 22

FGF6 + prot

Answer 22

Les protéines (MyoD, Myf5, myog) 
On observe par western blot que les 
cellules  qui  expriment  F6  ont  une 
diminution de la quantité de protéines 
impliquées  dans  la  différenciation 
musculaire  (MyoD  et  myog  ont 
presque disparu, et Myf5 a beaucoup 
diminué)

Question 23

Prot + inhibiteur FGF6

Answer 23

De  plus,  en  présence  de  SU5402 
(inhibiteur de FGF6), on constate une 
inhibition  de  FGF6.  Les  cellules  se 
différencient  donc  en  cellules 
musculaires.

Question 24

Mdr1

Answer 24

Mdr1, une protéine de 1280 AA qui hydrolyse l’ATP et régule l’entrée de molécule dans la cellule (transporteur de la famille des ABC, ATP-Binding Cassette).

Question 25

Mdr1 + FGF6

Answer 25

Il semblerai que FGF6 ai des effets sur la synthèse de Mdr1
On fait donc une qRT-PCR pour étudier cette relation.
On voit donc que FGF6 stimule la
synthèse de Mdr1

Question 26

Conclu FGF6

Answer 26

Le rôle physiologique de Mdr1 n’est pas encore clairement identifié : il pourrait protéger les cellules de l’apoptose (mort cellulaire programmée) et ainsi assurer le maintien de la prolifération. Donc FGF6 pourrait passer par cette molécule pour exprimer son effet durant la prolifération