Anticorps Et Derivés 1 Et 2 Flashcards
Différentes classes d’anticorps monoclonaux
Omab: murine
Ximab: chimeric
Zumab: Humanized
Umab: human
Production d’anticorps monoclonaux «omab»
1) immunisation animale
2) isolement Lb de la rate
3) fusion Lb avec cellule myélome
4) mise en culture de l’hybridome
5) récupération des anticorps
Ac murins: risque d’allergie
Production d’Ac Ximab
1) immunisation animal
2) isolement Lb rate
3) construction génétique homme/souris
4) transfection E. Coli
5) récupération des Ac
➡️ chimériques
Prod d’Ac monoclonaux zumab
1) obtention d’Ac murins par hybridomes
2) greffage des CDR murins dans un anticorps humain via construction génétique dans un vecteur d’expression type CHO
➡️ humanisé
Prod d’Ac umab
Patient infecté -> Lb mémoires isolés -> immortalisation -> sélection
CDR sur anticorps
Complementary Determining Region
Isotypes d’Ac
IgM: 1ers a circuler, pentamerique IgG: (1 a 4): le + abondant IgA: muqueuses, dimerique IgD: surface Lb, formation Lb mémoire IgE: allergies, sécrétions histamine
Généralités Ac et Imagerie
Peu d’Ac disponible en cliniques (SPECT)
Arrêt de commercialisation pour certains
Souvent d’origine murine
Problème: clairance (car petits) ➡️ temps long pour images correctes ➡️ fragmentation
Oncologie +++
Imagerie: ciblage et info dosimetrique (thérapie)
+ theranostique: Ac radioactif: PET/SPECT: expression de la cible, activité radioactif + immunothérapie avec radiations
3 éléments anticorps imagerie
- Modalités d’imagerie: résolution, sensibilité, multiplexing, compatibilité avec d’autres modalités d’imagerie
- Hôte:
- cible antigènique: spécifique, niveau d’expression, localisation, turnover protéique
- organe avec tumeur: vascularisation, localisation, fonctions physiologiques, microenvironnements tumeur
• Agent:
- Ac: taille, stabilité, affinité, spécificité, clairance, pénétration tumeur
- conjugué: toxicité, 1/2 vie, méthode de conjugaison
Anticorps tailles ordre croissant
Fv - 12 kDa scFv - 25 kDa Diabody - 50 kDa Minibody - 80 kDa scFv-Fc - 105 kDa Ac intacte - 150 kDa
Fab - 50 kDa
F(ab’)2 - 100 kDa
KYN - inversement proportionnelle à taille
Clairance - inversement proportionnelle à la taille
scFv - Monovalent Single-Chain Fv fragment
25 kDa = Domaine variable léger + domaine variable lourd
Lié par peptide (linker)
Clairance rapide mais bonne fixation cible
Qualité moyenne des images - fixation rénale, affinité, 1/2 vie
Production facile, modulation de la pKYN par pegylation
Fab
50 kDa
Fixation tumorale rapide, améliorée Clairance sanguine rapide Bruit de fond faible Moins immunogène qu’Ac entier Toxicité rénale, faible affinité
Di- et multivalent Single-Chain Fv fragment
Prod de sc(Fv)2 et tendance à se dimériser en (sc(Fv)2)2 tétravalent, cinétique plus favorable
Diabody (sc(Fv) dimer)
Diminution de taille du linker
Dimérisation avec un autre sc(Fv) (non-covalent)
Meilleure cinétique tumorale que body seul, clairance rénale
Minibody (scFv-CH3 dimer)
80 kDa-
Contourner accumulation rénale (car seuil de clairance rénale < 60 kDa)
Dimère scFv + CH3
Acc. tumorale variable
F(ab)2
Fixation tumorale rapide, améliorée Clairance sanguine rapide Bruit de fond faible Moins immunogène qu’Ac entier Toxicité rénale, bonne affinité
Single-Chain Fv-Fc - scFv-Fc
105 kDa
Fragment avec partie Fc modifiée, évite trop ↗️ 1/2
1/2 vie: qques jours
Plutôt pour thérapie
Single domain antibodies - SdAbs
Domaine variable chaîne légère ou lourde
Dans la nature:
- camélidés, poissons cartilagineux
Nanobodies (camélidés):
- Bonne pénétration tumorale 15 kDa
- humanisation (immunogénicité)
Affibodies
Protéines issues de l’ingénierie Triple hélice 58 AA, 6 kDa Structure simple, soluble Bactéries/ synthèse peptidique HER2 le plus étudié
DARPins - Designed Ankyrin Repeat Proteins
Ankyrines = protéines de liaison intracellulaire (GR)
Darpin: motif de 33 AA
14,5 kDa (Monovalent): bonne acc., élimination rapide
30 kDa (bivalentes)
300 kDa (PEGylation): bonne acc. tumorale, élimination lente
Ac et SPECT
Peu $ comparé aux traceurs PET
P détections en même temps
1/2 vie plus longue
Inconvénient majeur: atténuation photons
Conjugaison Ac:
111 In; 99m Tc; 125 I; 123 I; 131 I; 67 Ga
Ac et PET
Grande variété de radiotraceurs avec 1/2 vie variables
Technologies de marquages avancent
Haute résolution de petites tumeurs à stades très précoces
Haut contraste
Haute sensibilité et spécificité
Always ON
68 Ga; 124 I; 64 Cu; 89 Zr
Ac et images optiques
Minimum invasif et sans radiations ionisantes
Sensible à des pmol, pas cher, spécifique aux cibles
Multicolore possible
Sondes qui s’activent une fois sur le site
Pénétration profonde, fort sensible IR sondes
Vert indocyanine, Cy5.5, Cy 7, quantum dots
Ac et IRM
Faible sensibilité, temps d’acquisition long, et grandes qtté d’agent à injecter
Haute résolution, magnifique contraste sur soft tissu (morphologie et anatomie)
Meilleur contraste et accumulation tumorale
Efficacité limité des Ac intactes d’aller dans tissus profonds
Non-spécifique assimilation par macrophages
Gadolinium, MION, SPIO, USPIO
Ac et échographie
Transportable, peu cher, imagerie en temps réel
Peut être fait dans lit
Pas de radiations
Bien pour suivre thérapie
Approprier pour image angiogenese et inflammation
