Analise De Enterobacteriaceae, Coliformes Totais E Termotolerantes Flashcards
Qual é o princípio desse método( Análise de enterobacteriacea)
Plaqueamento em profundidade com sobrecamada de modo a realizar a contagem Pedrão em placas com meio VRBG.
Quais são as características do meio VRBG(Ágar vermelho; Violeta; Bile, Glicose)??
-Agar líquido
-Seletivos: Cristal de violeta e sais biliares
-Diferenciais: Glicose+ Vermelho neutro e sais biliares.
Onde se aplica esse método?
Aplica-se em amostras de matérias-primas e de alimentos em geral, inclusive em águas
Desmistifique a família das enterobacteriacea?
1-Enterobacteriacea
1.1- Coliformes totais
1.1.1-Coliformes termotolerantes
1.1.1.1- Ecoli
Descreva a análise das enterobacteriacea e quais as características da colônia?
1-Inocularar 1ml das diluições nas placas esterilizada vazia
2- Adicionar Agar VRBG, homegeinizar e deixar endurecer
3- Adicionar uma subcamada e encubar invertido a 35°C/48h
4- Observar o surgimento de colônias vermelhas púrpuras e com Halo de precipitação de sais bilhares
Em que método se baseia a análise coliformes[Totais, termotolerantes Ecoli]?
Baseia-se no método do número mais provável
Descreva como é feito o teste presuntivo de coliformes?
1- Retira-se apartir de cada diluição 3 alicotas (9 no total) de 1ml e verte-se em tubos contendo Caldo Lauril Sulfato Triptose
2-Incuba-se por (24-48)h a 35°C
3-Observar o crescimento(turvação) e produção de gás devido a fermentação da lactose, mostrando suspeita de coliformes.
Qual é a confirmação que se deve fazer a seguir após a suspeita de coliforme?
Deve-se prosseguir com o Teste confirmativo para coliformes totais e termotolerantes
Descreva o procedimento ( totais e termotolerantes)?
Totais:
1-As amostras dos tubos suspeitos(LST+) são transferidos para caldo Verde brilhante, 1 alçada.
2-incuba-se por (24-48)h por 35°C
3- O crescimento e produção de gás indicará a presença de C.totais.
Descreva o procedimento ( Coliformes termotolerantes)?
1-As amostras dos tubos suspeitos(LST+) são transferidos para Caldo Ecoli, 1 alçada.
2-Incubar por (24-48)h a 45,5°C
3- Observação de crescimento e produção de gás confirmará a presença de coliformes Termotolerantes.
O que diferencia a análise da E. Coli dos outros(Termotolerantes)?
-Características de crescimento no Agar EAM (Eosina azul de metilo)
- Pelos testes:
*Indol
*Vermelho de metila
*Voges Proskauer
*Citrato( IMViC).
Como se faz o teste presuntivos de E. Coli?
1-Após a confirmação de suspeita de termotolerantes em caldo EC deve-se fazer o esgotamento da alça da amostra em Agar EAM.
2-Verificar-se-á para colônias típicas :
*Borda irregulares
*Brilho verde metálico ou sem
*Centro preto.
Qual é a via fermentativa típica da E.coli em meio VMVP?
Via ácida
Qual carboidrato é fermentado no Agar VRBG?
Glicose
Qual composto precipita o redor das colônias típicas em meio VRBG?
Sais bilhares
Descreve a prova bioquímica com:”Citrato “?
1-Transferir inoculo da cultura para a rampa dos tubos inclinados de citrato de Simmons;
2-Incubar a 35°C por 48h;
3- Caso haja mudança de cor de verde para azul é positivo e caso não haver é negativo( confirma a presença de E.Coli).
Obs: A enzima citraza não reage
“INDOL”
1-Transferir inoculo da cultura e encubar a 35°C por 24h
2- Em seguida adicionar 5 gotas de reagente de kovacs a cada 4,0ml de cultura.
3 -Observar o desenvolvimento de um anel vermelho- violeta na superfície do meio de cultura ( Teste positivo) confirmando Cepas típicas de E.coli
*Anel permanece na cor amarela do reagente ( Teste negativo) confirmando cepas atípicas de E.coli.
Qual é o nome do teste que investiga a presença da enzima triptofanase?
Indol
“VM VP”
1-Transferir o inoculo e incubar a 35-37°C por 48h
2-Transferir 1 ml da cultura para um tubo de ensaio e adicionar: 0,6ml de alfa naftol 5% e agitar. Adicionar em seguida 0,2ml de KHO 40% e agitar.
3- Observar por até 1h o desenvolvimento de uma cor vermelha ou rósea no meio de cultura ( teste positivo)
Permanência da cor(amarela) é negativo e confirma a presença de E. Coli
3-VM-VP
3- Observar por até 1h o desenvolvimento de uma cor vermelha ou rósea no meio de cultura ( teste positivo)
Permanência da cor(amarela) é negativo e confirma a presença de E. Coli
4- VM-VP
-Reincubar a cultura remanescente no caldo VM-VP por mais 24h adicionais e realizar o Teste VM adicionando +- 5 gotas da solução de vermelho de metila.
-Se o meio adquirir uma coloração vermelha (+) {confirmando a presença de Cepas E.coli} ou amarela (-)
