4.1- applications moléculaires

Question 1

transfection transitoire

Answer 1

expression du gène d’intérêt suite à la pénétration du plasmide dans la cellule eucaryote
les plasmides ne sont pas ségrégés de façon équitable chez les cellules filles lors de la division cellulaire, donc une grande partie des cellules de la culture ne contiendra pas de plasmide

Question 2

transfection stable

Answer 2

vecteur introduit s’intègre dans le génome de la cellule hôte, génome est modifié de façon définitive
vecteurs plasmidiques doivent contenir un marqueur sélectionnable afin d’identifier la fraction des cellules qui ont intégré l’ADN plasmidique dans leur chromosomes, puisque c’est un événement rare.
doit effectuer criblage des clones stablement transfectés

Question 3

quelles sont les deux voies de livraison eucaryotiques

Answer 3

infection
transfection

Question 4

quelles sont les deux voies de livraisons par infection

Answer 4

virale: virus à ADN ou virus à ARN

Question 5

virus à ADN vs virus à ARN

Answer 5

ADN: cible cellules quiescentes (moins développé pour la thérapie génique)
ARN: utilise cellules d’empaquetage (méthode de choix pour transfert de gènes dans les cellules somatiques en croissance)

Question 6

cellule d’empaquetage

Question 7

quelles sont les voies de livraison par transfection

Answer 7

-non virale: chimique ou physique
chimique: -phosphate de calcium
-cationique
-liposome
physique:-microinjection
-balistique
-électroporation

Question 8

liposomes

Question 9

liposomes stealth

Answer 9

-bicouche avec ADN à l’intérieu
-proteines ancrées à la membrane= ligands cibles
1)ligand lie récepteur
2)liposome entre dans cellule par endocytose
3) dégradation de l’endosome, complexe se dissocie
4)translocation de l’ADN au noyau

Question 10

microinjection

Answer 10

injection de l’ADN directement dans le noyau

Question 11

balistique

Answer 11

projection de l’ADN à l’aide du gene gun

Question 12

électroporation

Answer 12

courant électrique change charge de la membrane plasmique, fait des pores dans la membrane et permet l’ADN

Question 13

essais de gains de fonctions

Answer 13

-systèmes constitutifs (on/off) et inductible (modulation de l’expression)
-dépendant du système à développer, différents outils de régulation transcriptionnelle:
promoteur viral constitutif
promoteurs eucaryotes
promoteur inductible

Question 14

induction à la tétracycline

Question 15

CRISPR

Answer 15

clustered regularly interspaced short palindromic repeats

Question 16

systèmes de supression de gènes

Answer 16

-antisens (ADNsb)
-Decoy (ADNdb)
-triple hélice
-RNAi
-ribozyme

Question 17

oligonucléotides anti-sens (ASO)

Answer 17

bad
-digestion des brins linéaires par exonucléases
-faible taux de livraison
-doit s’apparier avec régions accessibles
good
-peut traiter avec mélanges d’oligos ciblant régions diff.

Question 18

thérapie decoy (dbADN)

Answer 18

bad:
-digestion des brins linéaires par exonucléases
-cible seulement les FT
-doit s’apparier avec régions accessibles
good:
-peut traiter avec mélanges d’oligos ciblant différents FT

Question 19

triple hélice

Answer 19

bad:
digestion brins linéaires par exonucléases
-doit s’apparier avec régions spécifiques

Question 20

Interférence à ARN (RNAi)

Answer 20

-inclut petits ARN inhibiteurs (siRNA)
-ARN à épingle à cheveux (shRNA)

Question 21

interférence à épingle à cheveu

Question 22

ribozyme delta (dRz)

Question 23

SOFA

Question 24

Transfer de type Southern

Question 25

Transfert de type Northern

Question 26

Transfert de type Western

Question 27

Micropuce d’ADN

Question 28

Séqueçage de nouvelle génération

Question 29

gel à retardement

Question 30

gène rapporteur

Question 31

souris chimères

Question 32

recombinaison génétique

Question 33

cellules souches embryonnaires

Question 34

quand est-ce que l’opéron lac est utilisé et comment sa transcription peut être augmenté

Question 35

transfection

Answer 35

insertion de nouveau matériel génétique dans une cellule eucaryote

Question 36

quelles sont les étapes pour produire de très grandes quantités d’une protéine

Answer 36

1-obtenir un clone d’ADNc codant la protéine entière (ex. RT-PCR, clonage par vecteur TA, etc)
2-fabrication par gémie génétique de vecteurs plasmidiques qui exprimeront de grandes quantités de la protéine codée lorsque les constructions seront insérées dans des cellules
3-insérer un nouveau plasmide dans la cellule bactérienne