2.2- ADN recombinant et ADN vectoriel Flashcards
ADN recombinant
Combinaison entre deux fragments d’ADN qui faisaient originellement partie de régions différentes d’un génome
clonage
introduction d’un fragment d’ADN dans une molécule d’ADN vectorielle permet l’Amplification d’un fragment d’ADN à l’étude dans une cellule hôte
plasmides
ADNdb circulaire utilisé comme vecteur de clonage
ADN ligases
catalyse la réunion bout à bout des fragments d’ADN
bactériophage T4
peut ligaturer n’importe quelle paire d’extrémités franches d’ADN
clonage directionnel
utilisation d’Enzymes de restriction pour couper le fragment d’ADN inséré et le plasmide d’ADN
carte de restrictions
représentation de la position relative des sites de restrictions dans un ADN
Recombinaison
formation de l’ADN recombinante
plasmides
molécules circulaires d’ADNdb qui sont distinctes de l’ADN chromosomique de la cellule
origine de réplication
séquence spécifique d’ADN de 50 à 100pb
réplication d’ADN commence au niveau d’ORI, elle se poursuit autour du plasmide circulaire sans tenir compte de la séquence nucléotidique, donc n’importe quelle séquence d’ADN inséré dans le plasmide est répliqué en même temps que le reste de l’ADN plasmidique
Marqueur de sélection
gène sélectionnable (ex. ampr, kanr, zeor) confère la résistance de la cellule transgénique au milieu de sélection afin de sélectionner positivement les cellules exprimant le plasmide
site de clonage multiple
incorporation d’un polylinker synthétique contenant les séquences de reconnaissance de plusieurs enzymes de restrictions différentes augmente l’adaptabilité d’un vecteur plasmidique
Conçu pour que chaque site de polylinker est unique sur le plasmide
cellules compétentes
bactéries n’ont pas la capacité d’accepter du nouveau matériel génétique de manière passive, donc chimiquement traités pour être permissive à l’ADN
permissive
transformation
mélange cellules compétentes avec d’ADN vectoriel