Трансформирани коренови култури. Култури от прорастъци

Question 1

По какъв начин се добиват култури от прорастъци?

Answer 1

Поставяне на ембиогенен калус или подходящ стерилен експлант на среда с високо съдържание на цитокини. Прорастъците след това могат да се култивират в петри, Ventro Vint контейнер, колби или биореактор.

Question 2

Коя е основната цел при използването на прорастъци за получаване на БАВ?

Answer 2

Селекцията на високопродуктивни линии - повтаря се докато се стабилизира добива на целевия метаболит. След като се получи стабилна линия, тя трябва да се адаптира към условия на дълбочинно култивиране.

Question 3

Кои са основните проблеми при дълбочинното култивиране на прорастъци?

Answer 3

1. Чувствителност към нарязване;
2. Трудности около инокулацията;
3. Осветяване, необходимо за продуцирането на БАВ - затруднява мащабирането.

Question 4

Какво представляват трансформираните коренови култури?

Answer 4

Заразени с Agrobacterium rhizоgenus растителни корени. Инфекцията става на мястото на наранената коренова тъкан и стимулира синтеза и секрецията на “опини” от корените, с които бактерията се храни.

Question 5

Какво представляват “опините”?

Answer 5

Фитохормоноподобни вещества, секретирани от корените на растения, заразени с Agrobacterium rhizоgenus. Образуват се при кондензация на АК с кетокиселини или захари. Различните щамове Agrobacterium предизвикват секрецията за различни видове опини.

Question 6

Класификация на Agrobacterium в зависимост от типа опини, чийто синтез предизвикват

Answer 6

1. Агропин
2. Манопин
3. Кукумупин

Question 7

Молекулярна основа на hairy root синдрома и синтеза на опини

Answer 7

Трансфер на t-DNA (Ri плазмид) от Agrobacterium в растението

Question 8

Структура на Ri плазмид от t-DNA агропинов тип Agrobacterium rhizogenes

Answer 8

2 региона:
- TL - rol гени (A, B, C, D) - отличаващи А. rhizogenes от A. tumefaciens; отговорни за фенотипа;
- TR - гени за биосинтеза на агропин.

Question 9

Предимства на трансформираните коренови култури като технологични матрици за получаване на БАВ

Answer 9

1. Лесно се получават;
2. Генетично стабилни;
3. Развиват се бързо (време за удвояване сходно с това на кл. суспензии);
4. Развиват се в хранителни среди, свободни от растежни регулатори (някои РР са канцерогенни; особено важно при хранителни и козметични добавки).

Question 10

Метод за лабораторно получаване на трансформирани коренови култури

Answer 10

Съвместно култивиране на стерилен растителен експлант (най-добре лист) и А. rhizogenes, култивиран дълбочинно (16 h, 220 rpm).

Question 11

Получаване на трансформирани коренови култури – метод на директното инфектиране

Answer 11

1.1. Стерилизация на растителен експлант
1.2. Дълбочинно култивиране на А. rhizogenes
2. Инфектиране на стерилните експланти с бактериалната суспензия
3. Съвместно култивиране
4. Деконтаминиране
5. Отделяне -> hairy roots

Question 12

Получаване на трансформирани коренови култури – метод на съвместното култивиране

Answer 12

1.1. Стерилизация на растителен експлант
1.2. Дълбочинно култивиране на А. rhizogenes
2. Инфектиране на стерилните експланти с бактериалната суспензия
3. Съвместно култивиране 1
4. Съвместно култивиране 2
5. Деконтаминиране
6. Отделяне -> hairy roots