W3 Flashcards
Labo principes de la reprogrammation cellulaire exemple de modalité
cells somatiques adulte a qui on va forcer l’expression de gènes, ces ft normalement sont présents que durant les premières semaines de vie du fœtus, ces facteur de reprogrammation sont okms
on utilise des arn dans des vésicules lipidiques qui vont pénètrer al membrane plasmique être traduit puis les FT vont être renvoyés dans le noyau pouvant transcrire des oct4 par exemple c’est la transfection, on parle de pluripotence induite
transcriptome
répertoire des gènes exprimés à un instant donné, il y a 22K gènes mais seulement 14K sont utilisés par chaque cellule, elle exprime un panel de gênes grâce aux FT, il y a effet combinatoire, une cellule est définie par l’ensemble des gênes exprimés à un instant donné
pratique de la transfection
milieu culture lipide et milieu culture arn
mise en contact pendant 20 min ajout d’un marqueur fluorescent GFP
Transfection *1/jours PDT 11jours vérification au microscope de la survie des cellule et de la vue de la fluorescence
obtention des ipsc sous forme de colonie
elles sont jointives et dense
elles ne peuvent pas être individualisés et donc nécessite une récupération par morceau
puis mise en culture
j
labo technique Western blot
étape 1 séparation des protéines
-extraction des protéines
-mesure de la concentration protéique
-dénaturation des protéines par agent réducteur, déplie les protéines
- dépôt des protéines en gel
-migration , plus petites plus elles migrent vers le +
-transfert des protéines sur une membrane de cellulose
étape 2 mise en évidence des protéines
- anticorps primaires
-anticorps secondaires associés à une enzyme émettant de la lumière
révélant la présence de l’anticorps primaires et ddonc de la protéine d’interet
la méthode western blot permet de recevoir des information sur
le poids: marqueur de poids moléculaire
le nombre: bandes présentes sur lz membrane
l’intensité: taille de la bande
mais méthode indirecte
paradoxe de l’oeuf et de la poule
facteur de transcription, produit par la cellule mais FT choisit ce que la cellule fait
reponse au paradoxe par la fécondation
pendant les premières semaines les arn de la mère vont être traduit et former des Ft pour exprimer des protéines
a partir du stade 8 cells le zygote produit ses propres FT
après le stade 8 cellules c’est l’environnement qui va dicter les expression de gênes en fonction de la position ou activation de certaines voies de signalisation , ce sont les boucles de contrôle
sous quelle forme se fait la compartimentation
complexe macromoléculaires, les ribosomes
Complexe endomembranaires système endomembranaires
expérience de palade
acides aminés radioactifs, traduction, re, appareil de golgi puis partent sous forme vésicule, but prouver le trajet
trafic membranaire
vésicules, de façon antérograde et rétrograde pour satisfaire l’apport en bicouche lipidique qui part par exemple du rer
arn messager contenu
aucg
un codon c’est
trois oligonucléotide spécifique d’un acide aminé
combien d’acides aminés
20
codon start? qui code pour?
AUG méthionine
ribosome permettent
la fixation des ARNt et de leur acide minés