W3 Flashcards
Labo principes de la reprogrammation cellulaire exemple de modalité
cells somatiques adulte a qui on va forcer l’expression de gènes, ces ft normalement sont présents que durant les premières semaines de vie du fœtus, ces facteur de reprogrammation sont okms
on utilise des arn dans des vésicules lipidiques qui vont pénètrer al membrane plasmique être traduit puis les FT vont être renvoyés dans le noyau pouvant transcrire des oct4 par exemple c’est la transfection, on parle de pluripotence induite
transcriptome
répertoire des gènes exprimés à un instant donné, il y a 22K gènes mais seulement 14K sont utilisés par chaque cellule, elle exprime un panel de gênes grâce aux FT, il y a effet combinatoire, une cellule est définie par l’ensemble des gênes exprimés à un instant donné
pratique de la transfection
milieu culture lipide et milieu culture arn
mise en contact pendant 20 min ajout d’un marqueur fluorescent GFP
Transfection *1/jours PDT 11jours vérification au microscope de la survie des cellule et de la vue de la fluorescence
obtention des ipsc sous forme de colonie
elles sont jointives et dense
elles ne peuvent pas être individualisés et donc nécessite une récupération par morceau
puis mise en culture
j
labo technique Western blot
étape 1 séparation des protéines
-extraction des protéines
-mesure de la concentration protéique
-dénaturation des protéines par agent réducteur, déplie les protéines
- dépôt des protéines en gel
-migration , plus petites plus elles migrent vers le +
-transfert des protéines sur une membrane de cellulose
étape 2 mise en évidence des protéines
- anticorps primaires
-anticorps secondaires associés à une enzyme émettant de la lumière
révélant la présence de l’anticorps primaires et ddonc de la protéine d’interet
la méthode western blot permet de recevoir des information sur
le poids: marqueur de poids moléculaire
le nombre: bandes présentes sur lz membrane
l’intensité: taille de la bande
mais méthode indirecte
paradoxe de l’oeuf et de la poule
facteur de transcription, produit par la cellule mais FT choisit ce que la cellule fait
reponse au paradoxe par la fécondation
pendant les premières semaines les arn de la mère vont être traduit et former des Ft pour exprimer des protéines
a partir du stade 8 cells le zygote produit ses propres FT
après le stade 8 cellules c’est l’environnement qui va dicter les expression de gênes en fonction de la position ou activation de certaines voies de signalisation , ce sont les boucles de contrôle
sous quelle forme se fait la compartimentation
complexe macromoléculaires, les ribosomes
Complexe endomembranaires système endomembranaires
expérience de palade
acides aminés radioactifs, traduction, re, appareil de golgi puis partent sous forme vésicule, but prouver le trajet
trafic membranaire
vésicules, de façon antérograde et rétrograde pour satisfaire l’apport en bicouche lipidique qui part par exemple du rer
arn messager contenu
aucg
un codon c’est
trois oligonucléotide spécifique d’un acide aminé
combien d’acides aminés
20
codon start? qui code pour?
AUG méthionine
ribosome permettent
la fixation des ARNt et de leur acide minés
un ARNt est spécifique de
un codon
étapes de la formation d’une protéine
codon start
méthionine
fixation de l’arnt
coupure
libération arnt
puis continue jusqu’au codon stop a qui ne correspond aucun acide aminé, c’est juste la fin
après être sorti du ribosome la protéine acquière sa
formation tridimensionnelle avec repliements
amplification de la traduction
un ribosome s’occupe d’un arn messager, les protéines sont identiques entre elles ainsi un ARNm peut donner 30 protéines
destination des protéines
-entièrement dans le cytoplasme, rester dans le cytoplasme ou dans les compartiment membranaires mitochondries et vésicules
-se poursuit ensuite dans le re: membrane plasmique, partir à l’extérieur
les protéines du noyau sont synthétisées dans le cytoplasme et reviennent dans le noyau
reticulum endoplasmique composition
canicules et vésicules
synthese des protéines dans le rer
0-début dans le cytosol puis RE
1-séquence acide aminés hydrophobe , reconnu à la sortie du ribosome par une protéine
2- cette protéine se colle au re et permet à la partie hydrophobe de s’insérer dans sa membrane, forme ainsi un canal
3- continue dans la lumière du rer
4- libérée
modification dans le rer
assemblage lipides, addition de sucres, contrôle qualité
rel rôle
assemblage des lipides, reserve de ions calciques
modifie l’activité chimique de composants chimique comme les médocs
physiopathologie de la mucovisidose
canal cftr 1 naissance sur 2500, situation normal 70% de inutile malade 90% de inutile
appareil de golgi
ensemble de vésicules aplaties proche les unes des autres et assez proche du réticulum endoplasmique
modification appareil de golgi
repliements supplémentaires, modification des sucres, ajout d’autres groupements glucidique , dernière étape
départ de l’appareil de golgi
option 1: vers la membrane plasmique
option 2: lysosome endosome
option 3: échange rétrograde
bilan de la synthèse protéique
fin dans le cytoplasme: cytoplasmique nucléaire mitochondriales
fin dans le rer: proteines du re
fin dans l’apparil de golgi: membranaires sécretées du golgi lysosome endosome et du re
maladie liée au défaut de trafic des protéines
alpha 1 anti trypsine
condition normale: cytoplasme au RE, au golgi et à la circulation sanguine
en déficit mauvais repliemen, accumulation moins de cette prot emphysème
trop de cette prot cirrhose
les lysosomes viennent
de golgi
lysosome caractéristique
sphérique hétérogène, variable , enzymes fonctionneront a ph acide
l’aicidité est dû à l’activité de
ATP-ase protéine
les lysosomes vont dégrader tous les …….mais ne peut dégrader….ce qui est…. pour la cellule
composés cellulaires les fibres minérales toxique
