Virologisk diagnostik Flashcards
Vad menas med indirekta diagnostiska metoder?
• Serologi
Vad menas med direkta diagnostiska metoder?
- Påvisande av viruset självt genom
- Antigendetektion
- Elektronmikroskopi
- NAAT/PCR
- Virusisolering
Vilka är principerna för antigendetektion?
- Kan användas för snabbtester
- Snabbt - billigt
- Utförs ex med metoderna immunflourescens eller ELISA
- Har lägre sensitivitet jämfört med PCR
- Sensitivitet och specificitet kan påverkas av provmaterialets kvalitet och ex mikroskopistens skicklighet (vid IF)
Vilka är fördelarna med virusodling?
- Enda sättet att påvisa levande virus!
* Relativt hög diagnostisk sensitivitet
Vilka är nackdelarna med virusodling?
- Många virus går inte alls att odla! = begränsad sensitivitet
- Långsam metod
- Dyrt
- Variationer i kvalitet
- Ålderdomligt
Vad är NAAT?
- NAAT = Nucleic acid amplification techniques
* Exempel Realtids-PCR
Principer för NAAT/PCR?
- Kvantifiering korrelerar ofta till allvarlighetsgrad - mängd virus i provet/mängd utsöndrat virus
- Hög sensitivitet och specificitet
- Högt negativt prediktivt värde
- Snabb analysmetod
- Låg kostnad
- Resultat är enkla att tolka
Viktig nackdel med PCR diagnostik/molekylärbiologisk diagnostik?
• Mutationer hos viruset kan störa/sänka sensitiviteten!
Vad är konvalecentserum?
- Serumprov för antikroppsanalys taget 3-4 veckor efter insjuknande
- Kvantitativ skillnad i antikroppsnivåer av IgM och IgG klass mellan akutprov och konvalscentserum ger diagnosen!
Varför tar man både ett akutprov och konvalescentserum?
- För att man inte kan dra några slutsatser om infektionsförloppet med ett enskilt värde för IgG i ett enstaka prov - kan bara konstatera att ”personen har varit i kontakt med viruset någon gång i sitt liv”
- Det är skillnaderna mellan akutprovet och konvalescentserumet som gör att vi kan säga om det är primärinfektion eller reaktivering
Serologiskt mönster vid primärinfektion?
- Låg eller ingen förkomst av IgG i akutprov
- Mer än 3 gångers ökning av IgG i konvalescentprov
- Förekomst och nivå av IgM i akutprov eller konvalescentprov vid primärinfektion beror helt på när i förloppet det är taget! (normalt ska IgM vara högt)
Hur mycket ska IgG öka mellan akutprov och konvalescentprov för att man ska säga att personen har infekterats?
- Tre gånger ökning av IgG mellan akutprov och konvalescentprov
- Gäller för både primärinfektion och reaktivering
Hur kan man påvisa att en primärinfektion har skett?
- Förekomst av höga IgM titrar OCH/ELLER
- Serokonversion
- Närvaro av viralt antigen
- Låg eller ingen förkomst av IgG i akutprov + Mer än 3 gångers ökning av IgG i konvalescentprov
Hur lång tid tar det innan IgM blir postivt?
- Efter ca 5-10 dagars infektion
* Varierar stort beroende på virus! CMV kan dröja 3 veckor! (?)
Hur länge kan IgM vara positiv?
- Kan vara posititv mellan 6-12 månader efter det akuta insjuknandet
- Varierar stort beroende på virus!
Hur lång tid tar det innan IgG blir positivt?
- Kan påvisas ca 1-6 veckor efter insjuknande
* Varierar stort beroende på virus!
Vad är serokonversion?
- Uppkomsten av antikroppar mot orsakande mikroorganism i blodet hos en person under pågående infektion eller immunisering
- Först finns det inga - sedan finns det = utveckling av antikroppar har skett!
- Används oftast för jämförelsen i antikroppstitrar/förekomst av antikroppar mellan ett akutprov och konvalecentprov
Hur kan man påvisa förekomst av antikroppar?
- ELISA, kemiluniniscens - provet inkuberas med antigen och reaktionen mellan antikropp och antigen påvisas genom färgomslag
- Immunflourescens - prov inkuberas med celler som är infekterade med virus, om antikropp är närvarande kommer de att binda till cellerna, kan avläsas i mikroskop och antikroppsreaktionens specificitet kan bedömas
Vad letar man efter vid direktpåvisning av virusantigen?
• Närvaro av proteiner tillhörande virus/delar av virus påvisas
Vad innebär realtids-PCR?
- PCR-produkten detekteras samtidigt som analysen körs!
- Detektion sker genom avläsning av flourescens
- Genom att registrera vid vilken amplifieringscykel som flourescensen når ett tröskelvärde (jämfört med en känd kontroll) vet man hur stor viruskoncentrationen i provet är!
Vilka är fördelarna med serologi?
- Golden standard för att definiera infektionsstatus med virussjukdom!
- Differentierar mellan immunitet/tidigare infektion, aktuell infektion eller frånvaro av dessa
- Snabbt
- Billigt
- Enkelt att ta fram provmaterial/provta serum/CSV
Vilka är nackdelarna med serologi?
- Antikroppssvaret kräver tid för att utvecklas
- Beroende av individens immunförsvar - förmåga att bilda antikroppar
- Korsreaktioner mellan snarlika virusantigen kan ge falskt positiva svar - ex HSV/VZV och Japansk encefalit/Dengue
- Ospecifika korsreaktioner som ger falskt positiva svar vid sjukdom hos patienten ex mononukleos, SLE
Vad undersöker Monospot? Hur fungerar det?
- Analys för heterofila antikroppar mot EBV = antikroppar mot icke virusspecifikt antigen
- God träffsäkerhet vid riktad misstanke ffa hos individer >12 år
- Fungerar genom att heterofila antikroppar aggluttinerar röda blodkroppar från andra djurarter
- Serologi för EBV har högst specificitet och ska användas i oklara fall!
Vad är heterofila antikroppar?
- ”antikroppar som bildats av en annan art än vad antigenet kommer ifrån”
- Antikroppar riktade mot ett stort antal antigen
- Förekommer ofta vid mononukleos
- Är inte riktade mot Epstein Barr virus men är typiska för mononukleos
Vilka antikroppar får man mot EBV?
- Anti-EBV-VCA = capsid antigen/viruskapsidantigen
* Anti-EBNA = nuclear antigen/kärnantigen
Hur ser serologin ut vid akut EBV-infektion?
- Postitv EBV-VCA IgM
- Anti EBV-VCA bildas tidigt i förloppet - strax efter heterofila antikroppar
- Positiv Anti EBV-VCA är diagnostiska för akut EBV infektion
- Positivt VCA-IgM och VCA-IgG i avsaknad av EBNA IgG är förenligt med en aktuell EBV-primärinfektion
- Sjunker sedan inom ett par månader
- Ospecifika korsreaktioner för IgM från herpesvirusgruppen förekommer!
Vad betyder det att EBV-VCA IgG kunnat påvisas?
- Att personen någon gång i sitt liv varit infekterad med EBV
- EBV-VCA IgG kvarstår livslångt
Vad betyder det att EBNA är postitiv?
- Positiv EBNA betyder genomgången EBV infektion
- Påvisande av IgG mot kärnantigen EBNA talar emot aktuell infektion
- EBNA IgM och IgG bildas flera månader efter insjuknandet
- EBNA IgG kvarstår livslångt
