Vectores de Clonación Flashcards
¿Qué es un plásmido?
ADN extracromosomal circular, de doble cadena y super enrollado. Pueden replcar genes de resistencia, genes de enzimas de restricción, etc.
¿Qué es número de copias?
Se refiere al número de moléculas de un plásmido. Existen vectores de bajo y alto número de copias
Diferencia en tre plásmidos conjugativos y no conjugativos
Promueven la conjugación sexual entre células. Controlado por genes tra
Propagación del vector E.Coli
Fácil de cultivar, rápido, genoma completo, mutaciones que evitan que info se propague ex vitro
Plásmidos F
Fertilidad. Genes tra
Plásmidos R
Resistencia. Genes que confieren resistencia hacia cloranfenicol, ampicilina y mercurio
Plásmidos Col
Colicinas, matan a otras bacterias
Plásmidos degradativos
Metabolizan moléculas como tolueno y ácido salicílico
Plásmidos de virulencia
Confieren patogenicidad
Vectores de clonación
Caballitos de batalla. Para ser un vector debe de replicarse dentro de la célula huésped, transmitirse a células hijas, ser pequeños y tener un marcador de selección
Partes de un vector
Ori, MCS, marker, inactivación por inserción
Vectores pUC
Alfa complementación. Tiene alfa–péptido
Vectores basados en fagos
Permiten clonar insertos de mayor tamaño
Cósmidos
Vector basado en fago lambda. Enzimas que requieren cos para funcionar.
¿Qué es una biblioteca genómica?
Grupo de clonas recombinantes que contiene toda la info del ADN de un organismo
Vectores basados en fago M13
Formado por genes de empaquetamiento, se puede insertar ADN exógeno. Secuenciación de ADN, mutagénesis in vitro, phage display
Vectores para transcripción de ARN in vitro
Cluster de sitios de restricción, reconocen RNApol de fagos T7 y SP6. Síntesis de sondas de hibridación, estudios de splicing
YEp
Alto número de copias, resistencia a ampicilina, Ori E.
YRp
Ori de levadura, multiplica de manera independiente
YIp
Integración por recombinación homóloga, frecuencia de transformación baja, no se puede recuperar vector
YAC
Fragmentos de ADN muy largos. Estudiar cromosomas, clonación de genes de mamíferos, secuenciación. Inserto puede ser inestable
BAC
Se basa en plásmido F, sin inestabilidad. Secuenciación de genomas
¿Qué debe tener un vector para clonar células de mamíferos
Ori SV40, promotor del citomegalovirus, integración al cromosoma, señal de poliadenilación