Alteración del DNA. Flashcards
¿Corte para clonación?
Las enzimas deben cortar solo una vez y no deben cortar el gen de interés
¿En qué consistió el experimento de Griffith?
Fue el primer indicio de que las bacterias se pueden adquirir ADN exógeno. Streptococcus pneumoniae
Tipos de transformación bacteriana
Química, electroporación, gene gun, conjugación, transducción
¿En qué consiste la transducción?
Transferencia de ADN exógeno a un bacteria a partir de un fago. Principal aplicación son genotecas
Algunos beneficios de las plantas transgénicas
Mejoran productividad de cultivos, permiten crecimientos en areas inadecuadas, mejoran valor nutricional, extienden vida media de frutas y vegetales
Métodos de transformación en plantas
Biobalística, Agrobacterium tumefaciens, vectores virales
En qué consiste la transformación de cloroplastos
Trozos de hoja se bombardean con DNA que tiene resistencia a espectomicina, se forma callo, se selecciona y descarta plantas resistentes de manera espontanea, las plantas estables se obtienen despues de varios pases.
Desventajas de la transformación de cloroplastos
En las primeras etapas es inestable ademas del elevado consumo del tiempo
¿Qué es agrobacterium tumefaciens?
Es una bacteria del suelo que ocasiona tumores en plantas. Es un vector de tumor-induction
Características de plásmidos Ti
Grandes, ori. inserta en el cromosoma; recombinación no homóloga. funciones de virulencia, síntesis y utilización de opinas
¿Qué es un vector viral?
ADNovirus es utilizado para introducción de DNA foráneo
¿Cómo se realiza transfección de células animales=
Toma del DNa foráneo, se mantiene dentro del núcleo pero no se integra
¿Qué es una transfección transiente?
DNA transferido no se integra en genoma, despues se degrada en división celular. Forma rápida para comprobar como se comportará producto de genes introducidos a células.
¿Qué es una transfección estable?
DNA foráneo se integra de manera aleatoria al genoma. Líneas celulares estables son requeridas si se quiere producir proteína a gran escala
¿En qué consiste la transfección química?
Lavado con buffer de fosfatos
Añadir ADN y CaCl2
DNa precipita y entra por endocitosis
Llegada al núcleo y integración al genoma. Eficiencia baja
¿En qué consiste la inyección directa de ADN?
ADN inyectado directamente al núcleo. Terapia génica
¿En qué consiste la transfección por liposomas?
Esferas de lipidos que entran directamente al interior de celulas. Muy eficiente, sencilla.
¿En qué consiste la transfección por péptidos?
Varias secuencias peptídicas se pueden unir y condensar al DNA entonces se diseñan péptidos. Entran a células por endocitosis
¿En qué consiste la transfección por virus como vectores?
Son alternativa y se integran al genoma. SV40, AAV, Retrovirus.
¿Qué es la inyección pronuclear?
ADN se inyecta en el pronúcleo, existen diferentes niveles de expresión.
¿Qué es un animal knock-out?
Son animales con genes deletados
¿Qué tipos de knock-out existen?
Letal: Deleción de chaperona hsp47, no viables.
Fenotipo observable: Animales presentan tumores espontáneos
Fenotipo no observable: Animales sin un cambio aparente
