Sistemas de expresión I

Question 1

Transcripción

Answer 1

1. Sigma busca a promotor
2. Nucleo de enzima a sigma
3. Formación de complejo DNA-RNA
4. RNAP desenrolla DNA
5. RNAP inicia crecimiento de cadena
6. Se elonga cadena

Question 2

Partes de un vector de expresión

Answer 2

Promotor, sitio de unión al ribosoma, MCS, terminador, ori, marcador

Question 3

¿Qué es el promotor?

Answer 3

Secuencia que recluta elementos necesarios para hacer transcripción

Question 4

Un promotor puede ser…

Answer 4

Debil o fuerte. Constitutivo o inducible

Question 5

Sistema de expresión basado en promotor T7

Answer 5

Fuerte, nivel de expresión alta. Utiliza cepas como BL21. MAT

Question 6

Sistema de expresión basado en pTrc

Answer 6

Fuerte, inducido por IPTG y reprimido por lacI

Question 7

Vector de expresión basado en pBAD

Answer 7

Sistema muy regulado. Controla cantidad de proteína producida. Util si se expresen proteinas toxicas para hospedero

Question 8

Ventajas de sistemas de expresion bacterianos E.Coli

Answer 8

Expresión rápida, alto rendimiento, facil de cultivar, barato, produccion rapida y costo-efectiva

Question 9

Desventajas de sistemas de expresion bactieranos E.Coli

Answer 9

Proteinas con puentes disulfuro son dificiles de expresar. Produce proteínas no glicosiladas. Formación de acetato (tóxico para celula). Cuerpos de inclusión. Requiere replegamiento

Question 10

¿Como mejorar produccion de proteinas en E. Coli?

Answer 10

Cambiar medio de cultivo, utilizar diferentes primers, coexpresar chaperonas, disminuir temperatura, renaturalizar proteina, reducir velocidad de sintesis

Question 11

Alta cantidad de proteina es producida en….

Answer 11

Citoplasma

Question 12

Proteínas citoplasmaticas pueden ser exportadas a….

Answer 12

Al periplasma por medio de un peptido lider en N-terminal

Question 13

¿Por qué es mejor el periplasma que citoplasma?

Answer 13

Pues se simplifica purificación y facilita el plegamiento correcto

Question 14

Como incrementar producción de proteína

Answer 14

Utilizando sistema de promotor muy regulado

Question 15

Ventajas de secretar proteinas en periplasma

Answer 15

Facilita recuperacion. Plegamiento y estabilización in vivo. Se producen proteinas solubles y se disminuyen costos

Question 16

Sistemas de expresion Bacillus

Answer 16

Gram +, para expresar proteasas y amilasas, cepas de uso industrial.

Question 17

Ventajas de Sistemas de expresion Bacillus

Answer 17

Altos niveles de secrecion. no cuerpos de inclusión. facil manipulación. bajos costos. GRAS. Tecnología desarrollada

Question 18

Principal produccion con Bacillus

Answer 18

Subtisilina, Proteasa neutra, ISP I, ISP II

Question 19

Cepas de B. licheniformis

Answer 19

GMO, forma esporas, expresion alta, poca perdida, mayor rendimiento si se remueve gen de alfa-amilasa

Question 20

Cepas de B. brevis

Answer 20

Baja actividad, produce inhibidor de proteasas.

Question 21

Proteinas homologas producidas por bacillus

Answer 21

Xilanas, Naproxen, Amilasas, Proteasas

Question 22

Proteinas heterologas producidas por bacillus

Answer 22

Interleucina, esterasa de Pseudomonas

Question 23

Sistemas de expresion Lactoccocus lactis

Answer 23

Gram +, GRAS, aplicacion alimentaria y terapeutica, forma cuerpos de inclusion a mejores niveles

Question 24

Sistemas de expresion Pseudomonas fluorescens

Answer 24

No requiere aeracion alta, no se acumula acetato. Problema al formar puentes disulfuro y plegando

Question 25

Sistemas de expresion Streptomyces lividans

Answer 25

Secretan mucho, carece sistema de restriccion. Bajo nivel de proteasas. Bajo nivel de produccion