Transformasi Bakteri dan PCR koloni Flashcards
Apa itu sel kompeten dan contoh
Sel yang mampu mengambil DNA asing dengan proses transformasi contohnya E. coli DH5a
Media kontrol negatif pada transformasi bakteri
LA + Kana + hygro
Media kontrol positif pada transformasi bakteri
LA saja
Berapa suhu, waktu, dan kecepatan inkubasi E. coli sebelum bakteri disebar pada cawan petri
37C, 15 menit, 200 rpm
Sel kompeten yang ditumbuhkan pada media kontrol negatif akan
mati
Berapa total volume transformation buffer yang digunakan pada pembuatan sel kompeten
750 mikroL
Berapa volume sel kompeten dan plasmid yang digunakan saat transformasi
50 mikroL dan 5 mikroL
Berapa kecepatan, suhu, dan waktu yang digunakan untuk sentrifuge dalam pembuatan sel kompeten
1000 rpm, 4C, 5 menit
Metode apa saja yang bisa digunakan dalam transformasi bakteri
Coldshock, heatshock, elektroporasi, perlakuan CaCl, dan perlakuan rubidium
Media seleksi yang digunakan
LA + Kana + Hygro
Untuk mendeteksi keberhasilan transformasi bakteri secara kuantitatif
PCR koloni
Prinsip transformasi bakteri dengan heat shock
memberi kejutan suhu tinggi yang umumnya dilakukan pada suhu 42⁰ C selama beberapa detik kemudian dengan cepat didinginkan, heat shock mengubah struktur membran bakteri sehingga membantu DNA masuk ke dalam sel dengan cepat, perubahan suhu ini meningkatkan permeabilitas membran bakteri yang memungkinkan DNA plasmid masuk ke dalam sel
Bakteri yang digunakan dalam kontrol
Bakteri yang tidak mengalami transfomasi
Isi dari mix PCR
Template
Master mix ( taq polimerase, dNTP, MgCl2, dan buffer)
primer B11 F1
primer B11 R2
proses pembukaan DNA untai ganda menjadi DNA untai tunggal
Denaturasi DNA
