Konstruksi Vektor Ekspresi 1 (Elusi dan Ligasi)

Question 1

Pada elusi gel agarose dari hasil restriksi diporong sesuai target kemudian dicacah lalu dimasukkan ke dalam corong dengan menggunakan

Answer 1

membran Hybond N yang telah dibasahi 50 mikroL buffer elusi

Question 2

Pada elusi agar supernatan dapat digunakan apa yang perlu dilakukan

Answer 2

Penambahan 150 mikroL bff elusi kemudia 10.000 rpm 5 menit dan diulang sebanyak 2 kali kemudian ditambahkan 150 mikroL bff elusi kemudia 10.000 rpm 10 menit

Question 3

Prinsip elusi

Answer 3

Pemisahan fragmen DNA pada gel agarosa.

Question 4

Fungsi
1. EtOH 100%
2. EtOH 70%

Answer 4

1. Mengendapkan DNA
2. Pencucian DNA

Question 5

Prinsip Ligasi

Answer 5

penggabungan dua fragmen DNA menjadi satu molekul DNA melalui ikatan fosfodiester

Question 6

Enzim yang digunakan dalam ligasi dan fungsi nya

Answer 6

T4 ligase, menggabungkan fragmen DNA

Question 7

Isi dari mix ligasi

Answer 7

Vektor (plasmid) 1mikroL
Insert (gen) 2mikroL
T4 ligase 0,4mikroL
Buffer 10x 1mikroL
ddH2O 10mikroL

Question 8

Rumus ng insert

Answer 8

(I/V) x (kb I/kb V) x ng V

Question 9

Fungsi NaOAc

Answer 9

Mengendapkan DNA target

Question 10

Pelet dikeringkan dalam suhu

Answer 10

60C selama 10 menit kemudian ditambahkan 10-15 mikroL dH2O kemudian di elfor