TEMAS 4 Y 5. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR I Y II

Question 1

En qué se centran los métodos y técnicas de biología molecular

Answer 1

Estructura, función y regulación de las mokecuals biológicas

Question 2

Uso de ELISA

Answer 2

Identificación y cuantificación de analitos de naturaleza proteica

Question 3

Tipos de ELISA

Answer 3

Directo
Indirecto
Sandwich
Competitivo

Question 4

Uso de Elisa directo

Answer 4

Analizar la respuesta inmune a un determinado antígeno

Question 5

Uso de Elisa Indirecto

Answer 5

Determinar concentración total de Ac en una muestra

Question 6

Uso de ELISA tipo sandwich

Answer 6

Analizar muestras complejas
No es necesario purificar el Ag previamente

Question 7

Uso de ELISA competitivo

Answer 7

Detectar Ag de pequeño tamaño o en muy bajas concentraciones en la muestra

Question 8

Pasos del lector de microplato

Answer 8

• TMB: color azul
• Stopper (H2SO4) : color amarillo
• Mezclar 10 min
• Meter en espectrofotómetro 450 nm
• Recta de calibrado (rango 0 - 0.1)

Question 9

Nombres que se le da a la técnica del Western Blot

Answer 9

Protein blotting
Imnunoblotting

Question 10

Cómo funciona el Western Blot

Answer 10

• Muchas cosas, pero separación por electroforesis
• Las proteínas grandes de mueven menos
• Se pasa a membrana (inmunoensayo) y se le pone Ac primario y secundario, fluoróforo (luz en banda)

Question 11

Qué moléculas sirven para el inmunoensayo medio húmedo de Western Blot

Answer 11

Moléculas grandes

Question 12

Ventajas y desventajas del inmunoensayo semi seco

Answer 12

Más rápido pero se puede secar y estropear la muestra

Question 13

Pasos de la hibridación en el WB

Answer 13

• Hibridación de proteína diana con Ac primario
• Hibridación de Ac primario con Ac secundario marcado con peroxidasa de rábano

Question 14

Pasos del revelado en WB

Answer 14

• Peroxidasa de rábano catalizada la oxidación de luminol en peróxido de hidrógeno
• Luminol emite señal luminosa

Question 15

Qué le ocurren a las proteínas en el WB

Answer 15

Se desnaturalizan

Question 16

Aplicaciones biomédica del WB

Answer 16

• Prueba conformatoria del VIH
• Prueba definitiva de Creutzfeldt-Jakob
• Dx de Turalemia
• Enf de Lyme, VHB, HSV-2

Question 17

Cómo está la muestra en la inmunoprecipitación de proteínas

Answer 17

Completamente lisada

Question 18

Pasos de la inmunoprecipitación de proteínas

Answer 18

• Lisa muestra
• Añade Ac con bola magnética para mol específicas
• Se pasa imán
• Se limpia lo no pegado

Question 19

Uso de la inmunoprecipitación de proteínas

Answer 19

Aislar y concentrar una proteína particular de la muestra

Question 20

Cómo están las muestras en el Dot Blot

Answer 20

En condiciones nativas
No se usa Ac monockonales