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IBM > TEMAS 4 Y 5. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR I Y II > Flashcards

TEMAS 4 Y 5. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR I Y II Flashcards

1
Q

En qué se centran los métodos y técnicas de biología molecular

A

Estructura, función y regulación de las mokecuals biológicas

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Q

Uso de ELISA

A

Identificación y cuantificación de analitos de naturaleza proteica

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3
Q

Tipos de ELISA

A

Directo
Indirecto
Sandwich
Competitivo

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4
Q

Uso de Elisa directo

A

Analizar la respuesta inmune a un determinado antígeno

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5
Q

Uso de Elisa Indirecto

A

Determinar concentración total de Ac en una muestra

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6
Q

Uso de ELISA tipo sandwich

A

Analizar muestras complejas
No es necesario purificar el Ag previamente

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7
Q

Uso de ELISA competitivo

A

Detectar Ag de pequeño tamaño o en muy bajas concentraciones en la muestra

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8
Q

Pasos del lector de microplato

A
  • TMB: color azul
  • Stopper (H2SO4) : color amarillo
  • Mezclar 10 min
  • Meter en espectrofotómetro 450 nm
  • Recta de calibrado (rango 0 - 0.1)
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9
Q

Nombres que se le da a la técnica del Western Blot

A

Protein blotting
Imnunoblotting

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10
Q

Cómo funciona el Western Blot

A
  • Muchas cosas, pero separación por electroforesis
  • Las proteínas grandes de mueven menos
  • Se pasa a membrana (inmunoensayo) y se le pone Ac primario y secundario, fluoróforo (luz en banda)
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11
Q

Qué moléculas sirven para el inmunoensayo medio húmedo de Western Blot

A

Moléculas grandes

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12
Q

Ventajas y desventajas del inmunoensayo semi seco

A

Más rápido pero se puede secar y estropear la muestra

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13
Q

Pasos de la hibridación en el WB

A
  • Hibridación de proteína diana con Ac primario
  • Hibridación de Ac primario con Ac secundario marcado con peroxidasa de rábano
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14
Q

Pasos del revelado en WB

A
  • Peroxidasa de rábano catalizada la oxidación de luminol en peróxido de hidrógeno
  • Luminol emite señal luminosa
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15
Q

Qué le ocurren a las proteínas en el WB

A

Se desnaturalizan

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16
Q

Aplicaciones biomédica del WB

A
  • Prueba conformatoria del VIH
  • Prueba definitiva de Creutzfeldt-Jakob
  • Dx de Turalemia
  • Enf de Lyme, VHB, HSV-2
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17
Q

Cómo está la muestra en la inmunoprecipitación de proteínas

A

Completamente lisada

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18
Q

Pasos de la inmunoprecipitación de proteínas

A
  • Lisa muestra
  • Añade Ac con bola magnética para mol específicas
  • Se pasa imán
  • Se limpia lo no pegado
19
Q

Uso de la inmunoprecipitación de proteínas

A

Aislar y concentrar una proteína particular de la muestra

20
Q

Cómo están las muestras en el Dot Blot

A

En condiciones nativas
No se usa Ac monockonales

21
Q

En qué se basa la PCR

A

Replicación exponencial de un fragmento de ADNg o ADNc mediante ciclos que constan de 3 temperaturas

22
Q

Componentes PCR (7)

A
  • Cadena de ADNg o ADNc que sirva de molde
  • Enzima ADNpol
  • Cofactores necesarios para la actividad correcta de la ADN polimerasa
  • Desoxinucleótidos (dNTP) para la síntesis del producto de PCR
  • Oligonucleótidos o primers
  • Taq polimerasa
  • Termociclador
23
Q

Funcionamiento PCR

A
  • Eleva la temperatura
  • Se desnaturalizan los fragmentos
  • Se baja un poco la temperatura y se anillan los primers
  • De nuevo se disminuye hasta que funcione la Taq
    polimerasa y alargue esos fragmentos de ADN
24
Q

Pasos de la PCR (4)

A
  • Inicio de la desnaturalización
  • Ciclos de amplificación (3)
  • Amplificación final
  • Almacenamiento temporal
25
Q

Ciclos de amplificación de la PCR (3)

A
  • Temp de desnaturalización - 95º
  • Temp de alineamiento - 50º
  • Temp de extensión - 72º
26
Q

Fórmula para la cantidad de producto de PCR

A

P = 2^nxT
n = nº ciclos
T= nº copias iniciales de la molécula molde

27
Q

Tipos de PCR (4)

A
  • Convencional
  • Cualitativa
  • Semicuantitativa
  • Cuantitativa
28
Q

PCR convencional

A

Tras terminar termociclador, se realiza electroforesis en gel de agarosa o acrilmida

29
Q

PCR cualitativa

A

Detecta presencia o no de un gen
Usado en forense

30
Q

PCR semicuantitativa

A

Expresión génica de una persona
Sobre todo ARNm

31
Q

PCR cuantitativa

A

Cuantifica en números absolutos ADN en una muestra
Usado para cargas virales de covid
Usa ARNm

32
Q

Modelos en los que se basa la RT-PCR

A
  • Fluoróforos: primera dan señal que se cuantifica
  • Sondas específicas marcadas con fluorocromos: primer da señal ante sonda
  • Agentes intercalantes fluorescentes (Sybergreen)
33
Q

Técnicas de hibridación de ácidos nucléicos (4)

A
  • Southern blot y northern blot
  • Enzimas de restricción
  • Hibridación de la sonda
  • Hibridacion in situ FISH
34
Q

Southern blot: qué hace y cómo

A
  • Analiza ADN previamente digerido con enzimas de restricción
  • Se ponen en un gel de agarosa y se traspasan aún blotting para hibridarlos con sondas específicas
35
Q

Northern blot

A

Similar al SB pero se analiza ARN y no se usan enzimas de restricción

36
Q

Enzimas de restricción: cómo se nombran

A

1- género bacteria de la que extrajo
2y3 - especie
4 - cepa o estirpe
5 - endonucleasa

37
Q

Hibridacion de la sonda: procedimiento y actividades que conbina

A
  • Procedimiento Nick translation
  • DNAsa 1: suprime nucleotide al azar en una de las dos candenas
  • ADNpol: incorporan nuevos nucleótidos por complementariedad
38
Q

Hibridación in situ FISH: tipo de método y cómo funciona

A
  • Método inmunohistoquímico
  • Sondas son marcadas con fluorescencia
39
Q

Cómo se realiza el FISH

A

Directamente sobre tejidos, con sondas de ADN directamente sobre las muestras

40
Q

Procedimiento del FISH (4)

A
  • Colocar hibridación en porta
  • 37º en cámara Punnet por 16-72 horas
  • Colorante para núcleos y se revela
  • Se observa al microscopio genes determinados
41
Q

Aplicaciones del FISH (2)

A
  • detectar mutaciones en ADN
  • indentificacion ARNm subcelular en la fijación del tejido
42
Q

3DISCO: qué hace

A
  • Hace que muestras biológicas sean transparente usando disolventes orgánicos para igualar el índice de refracción del tejido y medio circundante
  • Se examinan mediante microscopía de fluorescencia
43
Q

Pasos de la 3DISCO (3)

A
  • deshidratación inicial, con tetrahidrofurano
  • extracción de lípidos mediante incubación en diclorometano
  • emparejamiento del índice de refracción con Éter dibencíclico
44
Q

Brainbow: cómo funciona

A

Fluorescencia para marcar, en el cerebro
humano, cualquier tipo de neuronas, incluido su axón, y ver cuál es el destino de cada
neurona desde el inicio

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