TEMA 7 - Células B: Reordenamiento, Repertorio, Activación Flashcards
¿Cuántos tipos de subpoblaciones de células B existen?
2
¿Cómo se denominan las subpoblaciones de células B?
B1 y B2
¿Qué marcadores expresan las células B1?
Mac1+ CD23- CD5+
¿En qué momento del desarrollo se generan las células B1?
estadios iniciales del desarrollo (fetal)
¿Dónde se generan las células B1?
hígado fetal
¿Las células B1 se generan después del nacimiento?
no
¿De qué células proceden las células B1?
células madre distintas de las c B2
¿Qué porcentaje de las células B totales constituyen las células B1?
5%
¿Cómo se renuevan las células B1?
autorrenovación
¿Dónde se autorrenuevan las células B1?
tejidos linfoides periféricos
¿Qué dos factores inducen la autorrenovación de las células B1?
IL-10 y el antígeno que reconocen
¿Qué marcadores expresan las células B2 o convencionales?
Mac1- CD23+ CD5-
¿Dónde se generan las células B2?
médula ósea
¿Las células B2 se generan después del nacimiento?
sí
¿Cómo se renuevan las células B2?
se reemplazan en médula ósea
¿A qué equivale el repertorio de anticuerpos?
distintas especificidades de anticuerpos que un individuo puede producir
¿Cuántos anticuerpos distintos puede producir un individuo?
más de 10^9
¿Dónde reside la información para generar el repertorio de anticuerpos?
en el ADN de cada individuo
¿Qué proporción del genoma se necesitaría para generar el repertorio de anticuerpos si cada anticuerpo estuviera codificado por un gen?
1/3
¿Cuándo se genera el repertorio de anticuerpos?
durante la maduración de las células B en la médula ósea
¿En qué se basa la generación del repertorio de anticuerpos?
en el reordenamiento
¿Cómo se denomina también al reordenamiento?
recombinación somática de segmentos génicos
¿En qué células se produce el reordenamiento?
células productoras de anticuerpos
¿En qué cromosoma se encuentran los locus de la cadena pesada de las inmunoglobulinas?
cromosoma 14
¿Cuántos segmentos V tiene la cadena pesada de las inmunoglobulinas?
65
¿En cuántas familias se agrupan los segmentos V de la cadena pesada de las inmunoglobulinas?
7
¿Cuántos segmentos D tiene la cadena pesada de las inmunoglobulinas?
27
¿Cuántos segmentos J tiene la cadena pesada de las inmunoglobulinas?
6
¿En qué cromosoma se encuentran los locus de la cadena ligera kappa de las inmunoglobulinas?
cromosoma 2
¿Cuántos segmentos V tiene la cadena ligera kappa de las inmunoglobulinas?
40
¿En cuántas familias se agrupan los segmentos V de la cadena ligera kappa de las inmunoglobulinas?
7
¿Cuántos segmentos D tiene la cadena ligera kappa de las inmunoglobulinas?
0
¿Cuántos segmentos J tiene la cadena ligera kappa de las inmunoglobulinas?
5
¿En qué cromosoma se encuentran los locus de la cadena ligera lambda de las inmunoglobulinas?
cromosoma 22
¿Cuántos segmentos V tiene la cadena ligera lambda de las inmunoglobulinas?
30
¿En cuántas familias se agrupan los segmentos V de la cadena ligera lambda de las inmunoglobulinas?
8
¿Cuántos segmentos D tiene la cadena ligera lambda de las inmunoglobulinas?
0
¿Cuántos segmentos J tiene la cadena ligera lambda de las inmunoglobulinas?
4
¿Qué codifica el segmento L?
señal de inicio de la traducción y péptido líder
¿Cuántos pares de bases tiene el segmento L?
60-90
¿Cuántos aminoácidos tiene el péptido líder?
20-30
¿Qué característica presentan los aminoácidos del péptido líder?
altamente hidrofóbicos
¿Qué codifica el segmento V?
regiones variables
¿Qué porcentaje de identidad tienen los segmentos de una misma familia?
70-80%
¿Qué fenómeno explica la existencia de familias de segmentos V?
duplicación
¿Qué dos regiones incluye V?
HV1 y HV2
¿Cuántos pares de bases tiene el segmento V?
300
¿Cuántos aminoácidos tiene el segmento V?
100
¿Qué codifica el segmento D?
regiones de diversidad
¿Qué codifica el segmento J?
regiones de unión
¿Qué regiones incluyen la CDR3?
D y J
¿Qué es la CDR3?
región de mayor contacto con el antígeno
¿Qué codifica el segmento C?
regiones constantes
¿A quién se le otorgó el premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1987?
Susumu Tonegawa
¿Por qué se le otorgó el premio Nobel de Fisiología o Medicina a Susumu Tonegawa en 1987?
por su descubrimiento del principio genético para la generación de diversidad de anticuerpos
¿Qué técnica se utiliza para estudiar el reordenamiento de los genes de las inmunoglobulinas?
Southern blot
¿Qué regiones codifican la región variable de la cadena ligera?
V y J
¿Qué regiones codifican la región variable de la cadena pesada?
V D y J
¿Dónde tiene lugar el reordenamiento?
únicamente en células somáticas de linaje B
¿En qué orden se produce la recombinación somática de la cadena pesada µ?
reordenamiento de D y J en cadena pesada-reordenamiento VDJ en cadena pesada-unión de Cµ por procesamiento
¿En qué orden se produce la recombinación somática de la cadena ligera kappa o lambda?
reordenamiento de V y J en cadena ligera-unión de C por procesamiento
¿En qué se basa el mecanismo del reordenamiento?
en secuencias de señal de recombinación (RSS)
¿Qué otro nombre reciben las secuencias de señal de recombinación?
RSS
¿Cómo se produce el reordenamiento?
el reordenamiento está guiado por secuencias flanqueantes en el ADN. Escisión. Ligación
¿Qué estructura presentan las secuencias de señal de recombinación?
heptámero-espaciador-nonámero
¿Qué secuencia de nucleótidos presenta el heptámero?
CACAGTG
¿Cuántos nucleótidos constituyen el espaciador?
12 ó 23
¿Qué secuencia de nucleótidos presenta el nonámero?
ACAAAAACC
¿Qué regla rige las secuencias de señal de recombinación?
regla 12/23
¿Qué enuncia la regla 12/23?
un segmento flanqueado por un espaciador de 12 nucleótidos solo se puede recombinar con un segmento flanqueado por un espaciador de 23 nucleótidos
¿Qué fenómeno excepcional viola la regla 12/23?
uniones D-D en la cadena pesada
¿Qué proteínas están implicadas en el reordenamiento?
recombinasas RAG1 y RAG2 ADN ligasa IV ADN-PK heterodímero Ku70-Ku80
¿Las proteínas implicadas en el reordenamiento se expresan de forma ubicua?
no
¿Dónde se expresan las proteínas implicadas en el reordenamiento?
específicas de células B
¿Qué espaciador flanquea VH y JH en la cadena pesada?
23
¿Qué espaciador flanquea DH en la cadena pesada?
12
¿Qué espaciador flanquea Vk en la cadena ligera kappa?
12
¿Qué espaciador flanquea Jk en la cadena ligera kappa?
23
¿Qué espaciador flanquea Vl en la cadena ligera lambda?
23
¿Qué espaciador flanquea Jl en la cadena ligera lambda?
12
¿Cuántos mecanismos de generación del repertorio de anticuerpos existen antes del encuentro con el antígeno?
3 Enumere los mecanismos de generación del repertorio de anticuerpos antes del encuentro con el antígeno.
¿Cuántas cadenas ligeras kappa distintas se pueden generar?
200
¿Cuántas cadenas ligeras lambda distintas se pueden generar?
120
¿Cuántas cadenas ligeras totales se pueden generar?
320
¿Cuántas cadenas pesadas distintas se pueden generar?
11000
¿Cuántas combinaciones de cadenas pesadas y ligeras se pueden generar?
3.2*10^6
¿En qué consiste la diversidad en la unión de segmentos génicos?
recombinación imprecisa-imprecisión en la rotura-diversidad de unión de nucleótidos añadidos
¿Qué dos tipos de nucleótidos se añaden durante la recombinación?
P (secuencias palindrómicas) y N (secuencias sin molde)
¿Qué enzima añade nucleótidos durante la recombinación?
TdT
¿Qué proporción de los reordenamientos no son productivos?
2 de cada 3
¿Qué dos factores regulan finamente el sistema de generación del repertorio de anticuerpos?
control de la expresión de RAG-1 y RAG-2-accesibilidad de segmentos génicos promotores y enhancers
¿Cuándo se produce la maduración de la afinidad por hipermutación somática?
después del encuentro con el antígeno
¿En qué consiste la maduración de la afinidad por hipermutación somática?
hipermutación somática de las regiones CDR de segmentos V reordenados
¿Qué tipo de antígenos inducen la maduración de la afinidad?
antígenos proteicos dependientes de células T cooperadoras (TD)
¿Dónde se produce la maduración de la afinidad por hipermutación somática?
en los centros germinales
¿Qué ocurre con el número de mutaciones con el tiempo?
mayor número de mutaciones
¿En qué isotipo se produce mayor número de mutaciones?
IgG
¿En qué tipo de inmunizaciones se produce mayor número de mutaciones?
inmunizaciones secundarias y terciarias
¿Cuál es la tasa de mutación en la maduración de la afinidad?
10^-3/par de bases/división celular ó 1/región V/división celular
¿Dónde se encuentran los puntos calientes de mutaciones?
en motivos RGWY
¿Qué significa R en el motivo RGWY?
R-purina
¿Qué significa Y en el motivo RGWY?
Y-pirimidina
¿Qué significa W en el motivo RGWY?
W-A o T
¿Qué enzima está implicada en la maduración de la afinidad por hipermutación somática?
AID
¿Qué significa AID?
Activation induced cytidine deaminase
¿Qué ocurre con las células que sufren mutaciones que dan lugar a la pérdida de actividad?
muerte celular
¿Qué efecto colateral tiene la activación de AID?
edición de otros genes diferentes de los de las inmunoglobulinas
¿Cuántos genes se han descrito mutados por AID?
hasta 300
¿Qué les ocurre a la mayoría de los genes mutados por AID?
son reparados por los sistemas de reparación celular
¿Qué les ocurre a una pequeña proporción de los genes mutados por AID?
escapan al control de los sistemas de reparación dando lugar a linfomas
¿Cuántas dianas de AID se han identificado que aparecen mutadas de forma recurrente en linfomas?
21
¿Qué tipo de respuesta inducen los antígenos timo independientes (TI)?
respuestas IgM de baja afinidad
¿Cuál es la primera señal para la activación de las células B por antígenos timo independientes (TI)?
antígeno unido a Ig
¿Cuál es la segunda señal para la activación de las células B por antígenos timo independientes (TI-II)?
células accesorias no derivadas del timo
¿Cuál es la segunda señal para la activación de las células B por antígenos timo independientes (TI-I)?
el propio antígeno vía TLRs por ejemplo Cite dos ejemplos de antígenos TI-I.
¿Qué característica estructural presentan los antígenos TI-II?
estructuras muy repetitivas
¿Cuál es la primera señal para la activación de las células B por antígenos timo dependientes (TD)?
antígeno unido a la Ig
¿Qué amplifica la señal del antígeno unido a Ig en la activación por antígenos timo dependientes?
correceptores de Ig
¿Cuál es la segunda señal para la activación de las células B por antígenos timo dependientes?
moléculas liberadas por células T cooperadoras (TH2)
¿Qué tipo de antígeno reconocen las células T cooperadoras (helper) foliculares que activan las células B en los centros germinales?
el mismo antígeno Enumere las etapas del reconocimiento encadenado.
¿Cuándo se describieron las células T cooperadoras (helper) foliculares?
en el año 2000
¿Cuándo se aceptó que las células T cooperadoras (helper) foliculares son las responsables de la activación de células B en folículos de centros germinales?
desde 2009
¿En qué consiste el cambio de isotipo o switching?
recombinación somática mediada por secuencias de ADN repetitivo: regiones switch (S)
¿Dónde se encuentran las secuencias de “switch”?
en regiones intrónicas
¿Qué secuencias contienen las regiones switch?
repeticiones de las secuencias GAGCT y GGGGGT Cite tres diferencias entre el cambio de isotipo y la recombinación de segmentos génicos de la región V.
¿Qué isotipos coexpresan las células B maduras?
IgM e IgD
¿A qué isotipos pueden cambiar las células B maduras tras su activación?
IgG IgE o IgA
¿Cambia la especificidad tras el cambio de isotipo?
no
¿Quiénes regulan el cambio de isotipo?
células T cooperadoras (TH2) y sus citoquinas
¿Qué secretan las células B naive tras su activación?
IgM
¿A qué se diferencian parte de las células B tras su activación?
células plasmáticas
¿Qué producen las células plasmáticas?
la forma secretada de IgM
¿Qué otro proceso sufren las células B tras su activación además de la diferenciación a células plasmáticas?
cambio de isotipo
¿Cómo se forman las formas de inmunoglobulina de membrana y secretada?
por procesos de splicing alternativo de los dominios citoplasmático y TM de anclaje a la membrana
¿Cuántos aminoácidos tiene el dominio TM?
25
¿Qué estructura presentan las formas de Igs de membrana?
monoméricas
¿Pueden las células B sintetizar simultáneamente Ig de membrana y secretada?
sí
¿Se produce la forma secretada de IgD?
raramente
¿Qué dos procesos tienen lugar en los centros germinales?
SHM (somatic hypermutation) y CSR (class-switch recombination)
¿Qué significa SHM?
somatic hypermutation
¿Qué significa CSR?
class-switch recombination
¿Qué otro nombre recibe el foco primario?
folículo primario
¿Qué células constituyen el foco primario o folículo primario?
células B que unen el antígeno y han sido atrapadas en la zona T de los tejidos linfoides secundarios donde se activan gracias a las células T cooperadoras
¿Qué otro nombre recibe el folículo secundario?
centro germinal
¿Qué células constituyen el folículo secundario?
células B que comienzan a proliferar diferenciarse…formando un folículo secundario en un centro germinal
¿Qué dos zonas se distinguen en el centro germinal?
zona oscura y zona clara
¿Qué células constituyen la zona oscura del centro germinal?
centroblastos: células B proliferando
¿Qué fenómeno tiene lugar en la zona oscura del centro germinal?
hipermutación somática
¿Cuántas bases se mutan por división celular en la zona oscura del centro germinal?
1 base/1000/división
¿Qué células constituyen la zona clara del centro germinal?
centrocitos: células B maduras con poca proliferación que morirán a menos que su Ig de superficie encuentre una célula T cooperadora
¿A qué se diferencian las células B maduras que han superado la selección en la zona clara?
células memoria o células plasmáticas
¿Qué células constituyen el manto del centro germinal?
células B no específicas de antígeno
¿Qué cuatro procesos experimentan las células B en el centro germinal?
hipermutación somática-selección de las células B de mayor afinidad-diferenciación a células plasmáticas-diferenciación a células memoria de las células B de mayor afinidad
¿Dónde se produce el desarrollo de las células B?
en los islotes hematopoyéticos del hígado fetal y posteriormente en la médula ósea
¿En qué semana de gestación comienza el desarrollo de las células B en el hígado fetal?
semana 8-9
¿En base a qué se definen los estadios de diferenciación de las células B?
reordenamiento y expresión secuencial de los genes de las cadenas pesadas y ligeras de las inmunoglobulinas y expresión de determinadas proteínas de superficie
¿Hasta qué estadio se diferencian las células B en la médula ósea?
células B inmaduras (IgM)
¿Qué dos procesos tienen lugar durante la diferenciación de las células B en la médula ósea?
selección negativa y tolerancia
¿Se produce una producción diaria continua de células B en la médula ósea?
sí
¿Qué ocurre con las células B tras su diferenciación en la médula ósea?
colonización de órganos linfoides periféricos
¿Cuánto tiempo viven las células B que no entran en los folículos?
2-3 días
¿Cuánto tiempo viven las células B que entran en los folículos?
3-8 semanas
¿Qué dos procesos sufren las células B en los órganos linfoides periféricos?
activación y memoria
¿Qué proteínas regulan el reordenamiento?
proteínas con expresión diferencial
¿En qué consiste la exclusión alélica?
solo se expresa la cadena pesada y ligera de uno de los dos cromosomas heredados
¿En qué consiste la exclusión isotípica?
cada clon de célula B solo produce un tipo de cadena ligera
¿A qué se debe la coexpresión de IgM e IgD?
a procesos de splicing alternativo
¿Tienen la misma especificidad IgM e IgD?
sí
¿Qué dos mecanismos inducen la selección negativa o la inducción de tolerancia de las células B inmaduras?
deleción clonal (apoptosis) si reconocen antígenos multivalentes propios-anergía (inactivación) si reconocen antígenos solubles monovalentes propios
¿Qué pueden hacer los linfocitos B inmaduros que reconocen antígenos propios con elevada avidez y van a ser delecionados para evitar la deleción?
reeditar su receptor utilizando una cadena ligera diferente que permita la expresión de un BCR que no reaccione frente a lo propio
¿Qué molécula expresan las células T cooperadoras (TH2) que sinergiza en la activación de células B?
CD40L
¿A qué familia pertenece CD40L?
familia del TNF
¿A qué receptor se une CD40L?
CD40 en la membrana de la célula B
¿Para qué proceso es necesario CD40L?
cambio de isotipo
¿Qué función tiene IL-4 en la activación de las células B?
sinergiza con CD40L para inducir la proliferación de células B
¿Qué tres interleucinas inducen el cambio de isotipo?
IL-4 IL-5 e IL-6
¿Qué regulan las citoquinas que inducen el cambio de isotipo?
el procesamiento alternativo del mRNA transcrito desde los sitios de switch
¿Dónde se encuentran los sitios de switch?
región 5´intrónica de cada gen C de la cadena pesada con excepción de Cd
¿Qué secuencias presentan los sitios de switch?
secuencias repetidas
¿Qué cuatro interleucinas inducen el cambio de isotipo de IgM a IgG1 IgG4 o IgE?
IL-4 IL-13 IL-10 e IL-21
¿Cuándo se observan respuestas positivas para IgG4?
tras exposiciones repetidas o prolongadas a ciertos tipos de antígenos Cite cuatro ejemplos de antígenos que inducen respuestas positivas para IgG4.
¿Qué patrón de expresión de receptores de quimiocinas presentan las células B que producen IgG4?
un patrón que favorece su salida de los centros germinales y su entrada en los tejidos
¿Se puede producir el cambio de isotipo de IgG1 a IgG4?
sí
¿Se puede producir el cambio de isotipo de IgE a IgG4?
no
¿Cómo se denominan los dominios en los que se organiza la cromatina para minimizar las interacciones inapropiadas entre genes?
TADs
¿Qué significa TAD?
Topologically Associating Domains
¿Cuántos sub-TADs existen en el locus variable de Igh en el estadio pre-pro-B?
3
¿Qué contienen los sub-TADs del locus variable de Igh?
uno contiene los segmentos DHJH los otros dos contienen los segmentos VH
¿Qué factor de transcripción une la región IGCR1?
CTCF
¿Qué función tiene CTCF?
guiar el inicio de la recombinación de segmentos D con J
¿Dónde se localiza la región VH en el estadio pre-pro-B?
periferia nuclear
¿A qué tipo de cromatina corresponden las regiones localizadas en la periferia nuclear?
cromatina inactiva
¿Dónde se localizan los segmentos DH y JH en el estadio pre-pro-B?
próximos al centro del núcleo
¿Qué ocurre con los segmentos VH en el estadio pro-B?
se colocan próximos a los DH y JH
¿Qué factor de transcripción regula el reposicionamiento de los segmentos VH en el estadio pro-B?
PAX-5
¿Qué ocurre con la localización de los loci tras la recombinación?
se internaliza
¿Por qué mecanismos está regulado el proceso de exclusión alélica?
modificación de histonas-accesibilidad de la cromatina-localización nuclear-actividad transcripcional y DNA looping tras el emparejamiento de alelos
¿Cuándo se produce el emparejamiento de alelos?
previo a la acción de RAG
¿Qué provoca RAG durante el emparejamiento de alelos?
que un alelo se proyecte fuera de su posición habitual en el cromosoma siendo este el primer alelo reordenado
¿Qué ocurre si una célula B tiene una recombinación fallida?
va a intentar reordenar en el otro cromosoma para tener una recombinación productiva
¿Cuándo puede morir una célula que quiere ser célula B?
al principio intentando coger una cadena µ
¿Qué es la selección negativa o selección clonal?
el principal mecanismo de tolerancia central
¿En qué consiste la selección negativa o selección clonal?
en la propia médula ósea se reconocen células B que reaccionan contra péptidos propios y estas células reciben señales de muerte celular
¿Qué son las células B anérgicas?
células B que reconocen péptidos propios pero no son capaces de responder de manera eficiente contra ellos
¿Qué ocurre cuando las señales de muerte celular no son suficientemente intensas?
la célula sale de la médula en forma anérgica
¿Qué significa que una célula B sea anérgica?
que es capaz de reconocer algo pero no es capaz de recibir señales de proliferación
¿Qué cantidad de anticuerpos IgM expresan las células B anérgicas?
no expresan los suficientes anticuerpos IgM
¿Qué ocurre con la célula B si sufre una deleción clonal?
muerte celular
¿Qué ocurre con la célula B si sale a la periferia en forma de célula B anérgica?
es capaz de reconocer antígenos propios pero no es capaz de responder
¿Qué sintetiza la célula B para poder proliferar tras una recombinación productiva?
una pseudocadena ligera
¿Qué dos segmentos componen la pseudocadena ligera?
lambda 5 y Vpre-B
¿Con qué cadena se une la pseudocadena ligera?
con µ
¿A dónde se dirige el complejo formado por la pseudocadena ligera y µ?
a la membrana
¿Para qué sirve la expresión del complejo pseudocadena ligera-µ en la membrana?
para que la célula B pueda recibir señales
¿Qué proceso tiene lugar después de que la célula B recibe señales de proliferación?
reordenamiento de la cadena ligera
¿Dónde se produce la selección negativa por deleción o anergia?
en la médula ósea
Enumere los mecanismos de generación del repertorio de anticuerpos antes del encuentro con el antígeno.
existencia de múltiples segmentos génicos que se combinan al azar-diversidad combinatoria de cadenas pesadas y ligeras-diversidad en la unión de segmentos génicos
Cite dos ejemplos de antígenos TI-I.
LPS bacteriano Brucella abortus
Cite cuatro ejemplos de antígenos TI-II.
polisacárido de pneumococo flagelina polimerizada de salmonella dextrano ficoll conjugado con hapteno
Cite tres diferencias entre el cambio de isotipo y la recombinación de segmentos génicos de la región V.
todos son productivos (localización intrónica)-las enzimas y señales implicadas son distintas-es un fenómeno que ocurre tras la estimulación antigénica
Cite cuatro ejemplos de antígenos que inducen respuestas positivas para IgG4.
antígenos alimentarios parásitos proteínas terapéuticas o ciertos autoantígenos
