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Tecno Repro > Tema 4: PRODUCCION DE EMBRIONES IN VIVO (Ru) > Flashcards

Tema 4: PRODUCCION DE EMBRIONES IN VIVO (Ru) Flashcards

1
Q

¿Que es la transferencia de embriones?

A

Transferencia e implantación de embriones de vacas de elevado potencial genético (hembras donantes) al útero de vacas de menor potencial genético (hembras receptoras)

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2
Q

Requisitos para las hembras donantes
SANITARIOS

A

(1) SANITARIOS
- Explotación y animales libres de aquellas enf infecciosas transmisibles controladas por las campañas de erradicación:
- Brucelosis
- Tuberculosis
- Leucosis
- Perineumonía
- Desparasitación 2 meses previo a la superovulación
- No presentar patología que afecte a los resultados

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3
Q

Requisitos para las hembras donantes
GENÉTICOS

A

(2) GENÉTICOS
- Mejores índices genéticos
- Seleccionar los caracteres de mayor importancia $
- Vacuno de carne y leche:
- Cantidad y calidad de los productos
- Duración de la vida productiva
- Nº de cel somáticas
- Descartar animales portadores de :
- Enf transmisibles
- Carácter culón en carne
- Enf asoc a genes recesivos

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4
Q

Requisitos para las hembras donantes
NUTRICIONALES

A
  • CC >2.5
  • Alimentación adecuada a su estado productivo
  • Evitar excesos o deficiencias nutricionales
  • Si existe déficit de energía
    • Menor resp ovárica
    • Menor nº de embriones transferibles
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5
Q

Requisitos para las hembras donantes
REPRODUCTIVOS

A
  • Antecedentes de buena fertilidad y fecundidad
  • Funcionalidad ovárica normal -> haber tenido 3
    celos a intervalos regulares y normales
  • Transcurridos min 60 días desde ultimo parto (óptimo 90 - 150) para garantizar invol uterina
  • Multíparas: mayor resp ovárica + mayor
    mortalidad embrionaria
  • Nulíparas : menor resp ovárica + menor
    mortalidad embrionaria
  • Mínimo 40 días transcurridos desde tto anterior
    de super ovulación
  • Examen clínico del aparato genital
    • No lesiones vaginales
    • No infección uterina
    • Tamaño normal de los cuernos y cervix
    • No alteraciones ováricas
    • No adherencias
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6
Q

MANEJO DE HEMBRAS DONANTES

A

**Podemos obtener embriones desde que la vaca entra en la pubertad, no requiere CC concreto ni un desarrollo completo

  1. En explotaciones de origen
    1.1 Más económico
    1.2 Rigurosidad en la detección
    de celo y admin de hmnas
    ( x el ganadero)
    1.3 Instalaciones específicas
    1.4 Difícil programación y nº de
    desplazamientos a la expl.
  2. Agrupamiento en centros de
    transferencia de embriones
    2.1 Contagio de enf entre
    vacas de distintas explo
    2.2 Facil admin hmnas, control
    del celo y planif del trabajo
    2.3 Mejores resultados
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7
Q

Hembras receptoras
¿cual es la mejor opcion?

A
  1. Condiciones sanitarias
    óptimas
  2. Normalidad estructural y
    genital
  3. Adaptadas al ambiente ->
    Rústicas
  4. 1ª Opción: novillas vírgenes de
    15 - 18 meses con buen
    desarrollo corporal
  5. 2ª Opción: Vacas de segundo
    parto
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8
Q

¿Por qué se utiliza la transferencia de embriones?

A

Existen una serie de factores que limitan el progreso genético en el ganado bovino:
- Tiempo entre partos consecutivos
- Baja tasa reproductiva (1/2 descendientes al año)
- Prolongado intervalo generacional

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9
Q

Objetivos de la transferencia de embriones

A

1- Aumentar el numero de descendientes obtenidos de las hembras de mayor valor genético
2- Acortar el intervalo generacional

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10
Q

¿Qué es superovulación?

A

Proceso de estimulación ovárica que se realiza con el fin de obtener ovulaciones múltiples a partir de vacas donantes de ovulación simple.

Dentro de la actividad de la producción de embriones:
- PRODUCCION IN VIVO: se recuperan embriones vivos de vacas donantes y se transfieren a vacas receptoras
- PRODUCCION IN VITRO: se recuperan ovocitos de vacas donantes, se fecundan in vitro y se implantan en vacas receptoras

+ Habitual in vivo : 6 embriones / recogida (poco)

El sexaje y el genotipado de los embriones comenzó a realizarse al introducirse la técnica de
MICROMANIPULACIÓN DE EMBRIONES

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11
Q

¿QUÉ ES UN EMBRIÓN?

A

En embriología y reproducción: Tras completarse el proceso de fecundación y hasta el momento final de la organogénesis hablamos de embriones

Transferencia de embriones: Los estadios de desarrollo recuperables y transferibles con
facilidad (desde la fase de mórula hasta la de blastocisto, incluida). Para que esto ocurra, el embrión debe estar en el útero pero no puede haberse implantado.

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12
Q

APLICACIONES DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES E INCONVENIENTE

A

1- Mejora Genética:
- Selección de indv en f(x) del
fenotipo
- Reduce el intervalo
generacional
- Permite aumentar la
producción de sementales
- Fomenta la conservación ex
situ
2- Control de enfermedades
(mayoría de IA/monta)
3- Facilita el intercambio de
animales entre zonas
geográficamente alejadas

Inconvenientes:
- Disminuye la variabilidad
genética (obj ppal es reducir el
nº de ppantes en proceso
reprod)
- Aumenta los problemas
reproductivos asoc a la
consanguinidad

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13
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? Pasos generales

A
  1. Elección de donante
  2. Superestimulación ovárica
  3. Ovulación
  4. Inseminación
  5. Recogida y evaluación de embriones
  6. Embriones en medios adecuados
  7. Transferencia embrionaria a hembras receptoras
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14
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : SUPERESTIMULACIÓN DE LA FUNCIÓN OVÁRICA DE HEMBRAS DONANTES

A

Consiste en aumentar el nº de ovocitos fecundados y de embriones transferibles producidos con capacidad suficiente para producir o continuar las gestaciones.

Convertimos animales de ovulación simple -> ovulación múltiple

Proceso:
1. Admin sust con capacidad
para estimular el crecimiento
folicular (actividad FSH) e
inducir la luteólisis (en la
etapa + favorab d la oleada)
2. Tras la lisis los folículos
dominantes se convierten en
folículos preovulatorios
3. Se liberan los ovocitos
fecundables al oviducto

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15
Q

¿QUÉ HORMONAS SE USAN EN LA SUPEROVULACIÓN?

A

(1) Para la estimulación del crecimiento folicular
A. GONADOTROPINA
CRORIÓNICA EQUINA (eCG)
- Dejó de emplearse por su
prolongada vida media
(40h)
- Proporciona grandes
cantidades de ácido siálico
y reduce el número de
inyecciones a administrar
(1 inyección)
- Durante esas 40 horas de
efecto es capaz de estimular
variar oleadas de
crecimiento
- Al crecer nuevos folículos
oleada tras oleada, se elevan
los estrógenos y empieza a
subir la P4
- Buenas resp pero bajo nº de
embriones transferidos
B. FSH
- Duración 5h
- Vida corta ( 2 inyec/ dia 4-7d)
- Viene del ganado porcino
C. GnRH/hCG : para sincronizar
folículos y ovulación de
los folículos dominantes
D. P4: se combina para generar
un ambiente óptimo durante
el crecimiento

(2) Para inducir la luteólisis: PGF2 alfa (aparición de
celo en 36 a 48 h)

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16
Q

SUPEROVULACIÓN: TTO x pasos y su problema

A
  1. Comienza a mitad de ciclo (8 -
    12 d)
  2. Escoge 1 opción
    2.1 1 dosis eCG
    2.2 8 dosis de FSH (intervalos
    de 12h)
  3. 3 - 4 días después : PGF2 alfa -> lisis de CL
  4. Detección de celo
  5. Insem a las 12 - 24h de su inicio

Problema:
- Tasa de respuesta no suele ser homogénea
- % respuesta alta (ttadas cdo
no habia CL en el ovario)
- % respuesta baja (ttadas cdo
SÍ lo habia)
- % NO RESPUESTA

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17
Q

Factores endógenos EN LA SUPEROVULACIÓN

A
  1. Edad
  2. Partos
  3. Raza
  4. Situación folicular
    4.1 Nº de folículos antrales que
    estén presentes en el
    ovario en el momento de
    inicio de tto
    4.2 Presencia / ausencia del FD
  5. Situación lactacional ¿Cuándo momento óptimo para la superovulación?:
    5.1 Una vez superado el pico
    de lactación
    5.2 Cuando aumenta la CC
    5.3 Cuando se invierte la curva
    del balance energético
    balance energético positivo
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18
Q

Factores endógenos: SITUACIÓN FOLICULAR

A
  1. El número de folículos ≥ 3 mm muy variable entre indv (6 – 56) influyendo en la respuesta al
    tratamiento.
  2. La secreción endógena de gonadotropinas es inversa al
    número de folículos antrales en crecimiento.

3.Cuando el tratamiento se inicia sin conocer la etapa de la
oleada puede coincidir con la presencia de un folículo
dominante

19
Q

Factores exógenos EN LA SUPEROVULACIÓN

A
  1. Características de las Hormonas
    1.1 Mezcla LH y FSH f(x) > solo
    FSH
    1.2 FSH >eCG (xq da + embrios
    viables)
  2. Protocolo de administración
    (defin x):
    2.1 Dosis total administrada
    2.2 Duración de tratamiento si
    se realiza con FSH
    2.3 Intervalo entre admin de
    gonadotropinas y la
    aparición del celo
  3. Alimentación
  4. Manejo
  5. Estación
20
Q

SUPEROVULACIÓN: PROCEDIMEINTOS PARA MEJORAR LA RESPUESTA

A
  1. Inducir atresia folicular antes
    de tto (con estrógenos y P4)
  2. Suprimir folículo dominante
    para garantizar empezar el
    protocolo con una nueva
    oleada ¿cómo?
    2.1 Punción y aspiración del
    contenido
    2.2 Provocando ovulación
    GnRH
  3. Favorecer reclutamiento (FSH
    7 días)
  4. Tto d hembras con actividad
    ovárica anormal
  5. Tratamiento durante el inicio
    de la oleada de crecimiento
    folicular
    5.1Detección de celo
    5.2 Sincronización de la
    ovulación
21
Q

PROTOCOLOS PPAL Y ALTERNATIVO:

PPAL

A

1) 9 días tras ap celo (nat o
induc) -> exploramos ov en
busca de FD
2) Suprimir FD con punción aspir
-> iniciar nueva oleada
3) 2 días después -> eco para ver
nº folic
4) FSH BID 4 días
5) a los 3 fías (24h antes de
acabar -> pgf2 -> lisis CL y ovul
6) en las sig 24 y 48h se detecta
celo e IA ITF (sin detect celo IA
7) ITF (sin detect celo) IA a las 48
y 72h
8) sobre el día 23 lavado uterino
y recoger embrios

22
Q

PROTOCOLOS PPAL Y ALTERNATIVO: ALTERNATIVO

A

1) Inicio: pgf2 (luteolisis) + Disp
P4 hasta día 12
2) 7d tras inicio: GnRH para
luteinizar FD o q ovule y se
forme un CL
3) día 9 tras inicio: empezamos
FSH BID 4 días
4) Dia 10 o 11: 2 inyec (cada
12h) pg
5)Dia 13: GnRH
6) Día 14: Doble IA BID
7) Día 20: lavado uterino
y recoger embrios

23
Q

SUPEROVULACIÓN: PROCEDIMEINTOS PARA SIMPLIFICAR EL TTO

A
  • 1 sola admin de FSH via SC
  • 2 admin FSH via SC en los animales menos sensibles a estrés x manejo
  • Formulas comerciales
    • Combinación de FSH - Polímeros biodegradables
    • Combinación de FSH - eCG

**Resultados suelen ser peores pero si dificil manejo para poner 8 inyecciones a intervalos de 12h es lo q hay

24
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? :
1)Superovulación
2)DETECCIÓN DEL CELO E INSEMINACIÓN
3) Recuperación de embriones
4) Transferencia de embriones
5) Conservación de embriones

A
  1. Extremar la vigilancia
    1.1 La vacas sometidas a
    superovulación tienen
    menos s. de celo
    1.2 10% hembras no lo
    manifiestan
  2. Antes de inseminar
    2.1 Comprobar la calidad del
    semen
    2.2 2 inseminaciones
    consecutivas
    - 1º a las 12h del inicio celo
    - 2º a las 24h del inicio del
    celo
25
Q

Recuperación de embriones:

A

NO QX: desde el ÚTERO
QX: desde el OVIDUCTO

se prefiere el menos invasivo

26
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : Recuperación de embriones (Pasos del proceso NO QX)

A

Método NO QUIRÚRGICO: Buscan recoger embriones que ya hayan completado su migración desde el oviducto al ÚTERO

  1. Momento de la realización
  2. Preparación de la donante
  3. Material y medios necesarios
  4. Objetivos de la recogida
  5. Búsqueda y selección
  6. Lavado de embriones
  7. Manejo
27
Q

Recuperación de embriones: Momento de la realización

A
  • A partir del día 4.5 - 5 desde
    inicio celo : embriones en el
    útero
  • A partir del día 6.5 - 7 : La
    mayoría de los embriones son
    mórulas muy compactas o
    blastocitos (soportan mejor la
    críopreservación)
  • A partir del día 7.5 - 8: gran
    parte de los embriones han
    eclosionado (no viables)
28
Q

Recuperación de embriones: Preparación de la donante

A
  1. Inmovilización en potro de
    contención
  2. Tranquiliz con xilacina +
    lidocaína epidural (reduc
    motilidad intrapélvica)
  3. Cola fijada lateralmente
    (facilitar limpieza y
    desinfección zona perineal)
  4. Manipulación del útero:
    elevando parte anterior 30 - 35
    cm y manteniendo rumen
    lleno
  5. Palpar ovarios para evaluar
    calidad de respuesta ¿FD o CL?
    -> repuesta menor
29
Q

Recuperación de embriones: Material y medios necesarios

A

MATERIAL
- Estéril y NO reutilizable
- 1º Cateterizamos cervix con la
sonda e inflamos el balón de
fijación contra la pared
- Objetivo: crear un
compartimento estanco y que
el líquido solo tenga la vía de
salida que emplearemos
para recoger los embriones
- Proceso actual: Colocar el balón en cuerpo craneal al cuello y mover el líquido con la mano hasta cada uno de los cuernos

MEDIOS
1. Medios isotónicos con
surfactante y tamponados
para mantener el ph
2. RL con %BSA
3. Medios isotónicos con suero
fetal o alb sérica

30
Q

Recuperación de embriones: Objetivos de la recogida

A
  1. Lavado efectivo
    • Liq debe alcanzar el 1/3
      superior del cuerno
      -Recuperar la totalidad del líq
      inyectado (el nº de
      embriones dependerá del
      vol de líq recuperado)
  2. Que no provoque lesiones
    endometriales
    • Ajustar muy bien el vol que
      introducimos en base a las
      proporciones de las
      dimensiones del tracto
      genital
31
Q

Recuperación de embriones: Búsqueda y selección

A

A. Observando una placa que
contenga unos pocos ml del
líquido extraído en la lupa
A.1 Lo pasamos x filtros y [] a
vol pequeños

B. International Embryo Technology Society (IETS): manual de clasif de embriones según CALIDAD y ESTADÍO (en base a eso se asigna un código de nº y letra)
- ESTADÍO
1. Ovocito
2. 2 - 16 cel
3. MORULA JOVEN
4. MORULA COMPACTA
5. BLASTOCISTOJOVEN
6. BLASTOCISTO
7. BLASTOCISTO EN EXPAN
8. Blastocisto eclosionado

- CALIDAD (esfericidad, 
  simetría y nº cel agrup (dctm 
   ppal))
   a. Clase 1:transferible y 
       congelable
        * esférico y simetrico + 
          blastomeros uniformes 
         \+ zona pelucida intacta + 
         masa embrionaria viable 
         con poco espacio 
          perivitelino
   b. Clase 2: transferible y NO
       congelable
            *minimo 50% mat cel 
               normal
   C. Clase 3: NO transferible y 
        NO congelable
   d. Clase 4: degenerados
32
Q

Recuperación de embriones: Lavado de embriones

A
  • Lavado y descontaminación
    bacteriana
  • Dilución de los embriones
    pasándolos por distintas
    placas con la misma solución
    que la del lavado (los 1º tienen
    tripsina y se va eliminando)
  • Objetivo: evitar la
    contaminación vírica al romper
    adherencias de las células del
    cúmulo
33
Q

Recuperación de embriones: Manejo

¿pajuelas? ¿conservacion?

A
  • Los embriones se envasa en pajuelas similares a las que se usan para IA
  • La transferencia se hace en fresco o pueden emplearse métodos de conservación como la congelación lenta o la vitrificación
34
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? Transferencia a receptoras

A
  1. Transferencia quirúrgica
  2. Transferencia no quirúrgica
  3. Sincronización
    • Transferencia en fresco:
      sincronizar con el celo de la
      donante
    • Embriones congelados: celos
      naturales o inducidos

Mejor técnica: novillas con embriones FRESCOS mediante transferencia QUIRÚRGICA

35
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : TRANSFERENCIA NO QX

A
  • La vaca debe estar en DIESTRO ( en IA en fase de estro o inicio de metaestro)
    FASE DEL DIESTRO: Día 7 tras el estro , el día del ciclo que conduerde con el estadío del embrión.
    Cuando el cuello uterino esta CERRADO y el moco denso dificulta su cateterización

METODO NO QUIRÚRGICO
- Vía transcervical
- Día 7 del ciclo (sincronía > 24h)
- Exploración previa de en q cuerno esta el CL
- Depositar embrión en la zona media del cuerno IPSILATERAL al CL (al cuerno q no tiene CL)
- Depende de FACTORES

36
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : Factores que influyen en la tasa de gestación
1. Receptoras

A
  1. Situación endocrina
  2. Nº de transferencias sobre la
    receptora ( + nº -> - %
    gestación)
  3. Edad / Nº de partos (novillas o
    vacas de 2 - 3)
  4. Raza (rústicas sufren menos
    estrés)
37
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : Factores que influyen en la tasa de gestación
2. Dependientes de la técnica

A
  1. Lugar de colocación ( 1/3 cr del cuerno ipsilateral al CL)

2.Destreza del operador

3.Duración de la transferencia (manipulaciones largas -> inflamación y difícil inicio gestación)

4.Esterilidad del proceso

38
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : Factores que influyen en la tasa de gestación
3. Dependientes del procedimiento de conservación

A
  1. Recogida - congelación
    (cuanto menor sea este
    intervalo + % gestación)
  2. Calidad del embrión tras la congelación - descongelación

3.Indv de procedencia (vaca-toro)

39
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : 5) Conservación de embriones

A

Corto plazo:
- Menos de 12 h si se
mantienen los embriones a
Tª ambiente
- 12-24 h si se mantienen en
refrigeración a 4ºC

Largo plazo:
- Congelación / Vitrificación
- Conservan ANTES de haber
transcurrido 2h desde la
recogida

Métodos:
- Congelación
- Descongelación
- Vitrificación

40
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : 5) Conservación de embriones
CONGELACIÓN

A

**Reducir Tª de forma lenta y progresiva
1. Evitar la formación de cristales de hielo de GRAN TAMAÑO que rompan las mb cel

  1. Enfriamiento a bajas velocidades en el que se añaden bajas [crioprotectores] (8 - 10%)

3.Pasos
1) Periodo de equilibrado (5 a
10 min al aire libre
para q se adapte a la Tª
ambiente)
2) Descenso a punto
crioscópico de la solución:
(-5º o -9 º)-> empieza a
congelarse
3) Inducción a la cristalización
“ seeding” : evita
reacción exotérmica en la
que el embrion se congela
y al mismo tiempo libera
calor
4) Enfriamiento lento : Bajar Tº
hasta los -33º o - 40º a una
vel de 0.3 - 0.6 ºC / min
5) Inmersión en N líquido (- 196º)

41
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : 5) Conservación de embriones
CONGELACIÓN
Ventajas e inconvenientes

A

Ventajas
- Laboratorios venden medios comerciales (muy estandarizado)
- Fácil de aprender

Inconvenientes
- Caro (requiere congeladorprogramable)
- Requiere tiempo

42
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : 5) Conservación de embriones
DESCONGELACIÓN

A

POR ETAPAS
1. Sacar pajuela dele estanque y
calentar a 30 º 30 s
2. Secar la pajuela y vaciar el
contenido en sol de
crioprotector + sacarosa
3. Lavados de 5 min en
soluciones de [ ] decrecientes
de crioprotector y cte de
sacarosa
4. Lavar en una cuarta solución
de PBS para rehidratar el
embrión
5. Evaluar calidad e introducción de la pajuela

EN UNA ETAPA (sin sacar al embrión)
1. Se coloca el embrión en un
pequeño volumen en la parte
media de la pajuela
2. Se le rodea por otro pequeño
volumen, en los extremos, de
crioprotector y sacarosa
3. Se pega un golpe a la pajuela
para que se mezclen ambas
partes
4. Descongelar a 37º
5. Inmediatamente después
transferimos el embrión, por
lo que la rehidratación se
completa en el útero
6. Simplifica el proceso pero
peores resultados

43
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : 5) Conservación de embriones
VITRIFICACIÓN

A

*Inducción de una viscosidad extrema en la solución de manera que impida la formación
de cristales de hielo tanto a nivel intra como extracelular.

  1. Es un proceso de enfriamiento a VELOCIDADES ELEVADAS y a ELEVADAS [CRIOPROTECTOR PENETRANTE]
  2. Debemos buscar la [ ] de crioprotector no toxica para el embrión y eficaz
    • Reducir las dosis de
      crioprotectores añadiendo
      etilenglicol + galactosa
  3. Impide la formación de
    cristales de hielo
  4. Tiempo de equilibrado es muy
    reducido + enfriamiento
    ultrarápido indtrod pajuelas
    directm en N líquido (vel
    descenso de 250ºC/min)
  5. Desvitrificación es también
    muy rápida y casi instantánea
  6. Factores que condicionan resultado:
    • Velocidades de enfriamiento
      y calentamiento
    • Viscosidad del medio
    • Volumen
  7. Sistemas : abiertos ( introd al embrión contactando directamente con el N líquido-> “media pajuela” o “vitrificación directa”) o cerrados -> “ punta pipeta” o “pipeta sellada”
44
Q

¿CÓMO SE REALIZA LA TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES? : 5) Conservación de embriones
VITRIFICACIÓN
Ventajas e inconvenientes

A

Ventajas
- Muy rápido
- No se necesita comprar nada

Inconvenientes
- No estandarizado
- Requiere entrenamiento
(transferencia en máximo 20-
30”)
- Menos útil en campo

Tecno Repro (14 decks)

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