Tema 17: OTRAS BIOTECNOLOGIAS REPRODUCTIVAS DE USO EN CARNÍVOROS Flashcards
- Fecundación in vivo
¿que necesitamos?
¿cómo funciona?
¿fases?
- Ovocito competente capaz de reanudar la
meiosis y proseguirla hasta la metafase II - Fecundado
- Inicia proceso de segmentación y completar su
desarrollo embrionario hasta -> blastocisto - La competencia del ovocito depende de que
tenga lugar un proceso de maduración:- Maduración nuclear
- Maduración citoplasmática
- Maduración molecular
- Fecundación in vivo: Maduración MOLECULAR
- Tras la descarga preovulatorio de LH (reinicio de
meiosis en ovocitos 1º) hasta metafase II
Metafase I → anafase-telofase I → Metafase II - Todos aquellos cambios asociados con el proceso
de replicación celular - Un ovocito en metafase II ya ha expulsado el 1º
corpúsculo polar y está listo para ser fecundado.
- Fecundación in vivo: Maduración citoplasmática
- Migración de los gránulos corticales que bloquean
la polispermia tras la fecundación - Ovocito adquiere el MPGF (factor promotor de
maduración) para generar pronúcleo masc - Estructuralmente (para luego desarrollo embrio)
- Redistribución de las mitocondrias -
- Modificaciones del citoesqueleto
- Modificaciones de la membrana plasmática
- Fecundación in vivo: Maduración Nuclear
¿qué es?
Proceso de transcripción de ARNm para la síntesis de proteínas y la modificación de algunas de ellas
- Fecundación in vivo: Maduración Nuclear
DIFERENCIAS ENTRE ESPECIES
1) Las gatas ovulan ovocitos maduros y en metafase II por lo que el proceso de maduración tiene lugar ante de la ovulación: ¡La hormona predominante en el folículo preovulatorio de estas especies es el estradiol
2) En cánidos salvajes y domésticos suele producirse una luteinización preovulatoria de las
células de la granulosa -> aum P4 -> maduración menos intensa. La hormona predominante en el
folículo preovulatorio de estas especies es la P4
Los ovocitos se liberan en metafase I -> maduración nuclear ocurrirá en el oviducto y se completará en el 2º o 3º día postovulación -> Maduración in vitro en cánidos sean más complicados que en felinos (no funciona)
- Fecundación in vivo: COMPETENCIAS DE LOS ESPERMATOZOIDES
- Para poder fecundar el ovocito deben adquirir
motilidad progresiva en el epidídimo y mb
plasmática estable
1)Deposición en el útero
2) Cambios q promueven el proceso d capacitación
3) Los q colonicen el reservorio oviductal (+ prob de fecundar el ovocito)
4) Capacitados para expresar ligandos apropiados
5) Reconocer y unirse a los receptores de la zona
pelúcida (los no capacitados previam no pueden)
6) Reacción acrosómica y penetran a través de la
zona pelúcida
7) Se fusionan con la mb vitelina del ovocito ->
pronúcleo masculino
- PRODUCCIÓN DE EMBRIONES IN VITRO
FIV (in vitro): producir embriones a partir de ovocitos sin fecundar en un lab simulando las condiciones fisiológicas del oviducto
ICSI: inyecta directamente en el interior del ovocito el espermatozoide (felinos silvestres o salvajes) (muchos sufren teratospermia / consanguinidad)
En ambos casos
1) Cultivan los cigotos in vitro hasta que alcanzan
los estadios de mórulas o blastocistos.
2) Se transfieren a las hembras receptoras o se
mantienen en criopreservación
- PRODUCCIÓN DE EMBRIONES IN VITRO: OBTENCIÓN OVOCITOS (IN SITU)
Hembras donantes VIVAS
1. Protocolo de superovulación
1.1 Dosis eCG y hCG a las 80h
1.2 FSH porcina 4 días + hCG
2. Ttos con gonadotropinas: respuesta inmunitaria
neutralizante (FSH no genera ac)
3. En felinos puede hacerse recogida a partir de
folículos preovulatorios x aspiración por
laparoscopia o laparotomía (8 a 20 ovocitos q
deben fecundarse de forma inmediata)
4. En caninos esto no es posible (ovocitos
obtenibles solo de oviducto
5. En la perra se realiza un flushing mediante OHT
(ya no es in situ)
- PRODUCCIÓN DE EMBRIONES IN VITRO: OBTENCIÓN OVOCITOS (EX SITU)
Hembras donantes MUERTAS
1. Ovocitos foliculares a partir de los ovarios post-
mortem o en la OVE
2. Hembras no están en fase de estro -> No
crecimiento folicular en los ovarios
3. Ovocitos inmaduros -> maduración in vitro lab
4. Ovocitos inmaduros se obtienen x aspirado,
disección (+ frecuente) o fileteado del ovario (los
obtendremos (no) competentes)
- PRODUCCIÓN DE EMBRIONES IN VITRO:
SELECCIÓN DE OVOCITOS ¿Cuales son aptos?
- APTOS
- Forma esférica,
- Citoplasma homogéneo oscuro
- Zona pelúcida intacta
- Diámetro superior 100 micrómetros
- Varias capas compactas en la zona del cúmulo
- PRODUCCIÓN DE EMBRIONES IN VITRO:
SELECCIÓN DE OVOCITOS (medio de cultivo)
- Se cultivan en un medio básico rico en esteroides, antioxidantes, gonadotropinas, sustratos energéticos y nutrientes, factores de crecimiento y proteínas.
- Medio de cultivo en microgotas:
- Recubierto con aceite mineral para evitar
evaporaciones - Gotas de rojo fenol (indicadoras de ph)
- ácido naranja
- basico violeta
- Recubierto con aceite mineral para evitar
- Se incuban a (para mantener ph a 7.4)
- 38ºC (temperatura corporal)
- Atmósfera cte con un 5% de CO2
- PRODUCCIÓN DE EMBRIONES IN VITRO: SELECCIÓN DE ESPERMATOZOIDES (El EYACULADO)
- Se obtiene en la especie canina mediante extracción manual y en la especie felina
mediante electroeyaculación - Fallecidos /castrados : flushing del conducto
deferente del epidídimo o una disección del tejido testicular
- PRODUCCIÓN DE EMBRIONES IN VITRO: SELECCIÓN DE ESPERMATOZOIDES (Técnicas para selección de espermatozoides competentes)
1)SEPARACIÓN POR GRADIENTES PERCOLL: técnica que separa las células en función de la densidad (sust de mayor densidad sedimentan: sp viables) (se añade esas sust al eyaculado y se centrifuga)
2)SWIM UP
- Aislar el pellet y extraer el resto de líquidos del
tubo
- Aspiramos a 2 cm de la superficie del liquido
para recoger los mejores espermatozoides pq
al ser viables nadan hacia arriba
Tasa éxito canina <20% y felina 40 - 70%
- ICSI (cuando, ventajas e inconvenientes)
- Se realiza tras producirse la maduración in vivo o
in vitro de los ovocitos
VENTAJA - NO requerir espermatozoides capacitados ni
capaces de producir la reacción acrosómica xq se
introd dctmente el núcleo del sp en el citoplasma
del ovocito - La ICSI tiene una serie de ventajas frente a la FIV:
- Solo es necesario 1 espermatozoide
- Útil en casos de oligospermia, teratospermia o
astenozoospermia. Muchos felinos domésticos
y no domésticos sufren teratospermia.
INCONVENIENTE -> Equipo específico que permita hacer micromanipulaciones
- ICSI ( diferencias entre espacies)
Fe: con mala calidad espermática puede obtener descendencia (con FIV no)
Ca: = problema: 8% de los ovocitos inyectados llegan a formar 2 pronúcleos, y el 42% de los que tenían pronúcleo femenino mostraban una descondensación de la cromatina espermática.
