técnicas moleculares Flashcards
para que as técnicas moleculares são usadas
- mapeamento cromossômico
- detecção de doenças genéticas
- diagnósticos pré-natais
- análise de portadoras de doenças ligadas ao sexo
- medicina forence
o que é PCR
reação em cadeia in vitro que simula a fase S do cilco celular, replicando uma sequência-alvo do DNA, pela ação da Taq polimerase
E, com o uso de um termoacelerador, uma molécula de DNA pode ser replicada. Assim, pode-se decidir quantas vezes a molécula será replicada, o que garante uma boa quantidade de material genético. o resultado final é visualizado por eletroforese em gel agarose po poliacrilamda,corados com brometo de etídio.
é usada em casos de estupros, corpos queimados e heterogenidade genética.
qual a técnica usada para a identificação de áreas cromossômicas alteradas
FISH
explique a técnica FISH
- hibridização fluorecente in situ
- interrompe a metáfase celular
- desnatura as células e as marca com um fragmento fluorescente
- esse fragmento se liga a uma das fitas e, então, se observa as células na microscopia de fluorescência
como a FISH pode ser usada para detectar síndrome de willians
utiliza-se a iluminofluorecencia para identificar a deleção do gene 7q23 no cromossomo 7, identificando a ausencia da produção de elastina, que possibilita a aparição das características da síndrome
quais são os passos necessários para se obter uma análise molecular
- coleta de material
- extração de DNA
- eletroforese
- amplificação do DNA, ou parte dele (ação de enzimas de restrição que separam o gene ou exon de interesse), por técnica PCR
- eletroforese em gel Agrose ou policrilmainda para análise molecular
que doença pode ser analisada com a aplicação de tecnicas moleculares que usam enzima de restrição para se adquirir somente uma parte do DNA, explique
distrofia muscular de duchenne (DMD)
seu gene é muito grande, 2,5 milhões de pares de base e 79 exons
quais as alterações ceulares observadas na DMD
- infiltrado de células gordurosas no tecido muscular
- células musculares com núcleos centrais
explique por que na DMD as células musculares estão mais suscetíveis a danos mecânicos
há ausência da distrofina, pois o gene que codifica ela é defeituoso na DMD.
a distrofina é crucial para a integridade do citoesqueleto e estabilização da membrana celular, o que permite a contração celular.
assim, na DMD a célula fica vulnerável a danos, o que possibilita a infiltração de gordura nas fibras musculares, prejudicando a contração. logo, com o tempo, causa deterioração muscular e perda de função muscular dos membros, cardíaca e respiratória.
quais são as características físicas e posturais observadas na DMD
- braços para atrás para manter o equilibrio
- panturrilhas com aparencia de hipertrofia
- manobra de gowers
explique como é feita a análise molecular da DMD pela PCR
- corta-se o gene com a utilização de enzimas de restrição
- assim, se separa os exons mais frequentes deletados e esses são amplificados
- o material coletado é usado para a eletroforese para analisar a deleção de exons
- quanto mais exons faltar, é mais possível a pessoa ter DMD
qual a enzima é usada para abrir a molécula de DNA na PCR
Taq polimerase
explique o que fibrose cística
- distúrbio autossomico recessivo, que acontece por deleção de 3 bases nitrogenadas no exon 10 na posição 508 da área de trnascrição, no gene 7q31.2 do cromossomo 7
- isso afeta a codificação da CRTF, o que compromete a cndutância transmembrana, não permitindo a passagem o Cl pela membrana
- assim, causa obstrução pulmonar e deficiencia na produção de enzimas pancreaticas
explique a análise molecular da fibrose cística
- é feita por PCR para identificar a deleção de 3 bases no exon 10 na posição 508 no par de cromossomos 7
o que é terapia gênica
- manipulação de genes para corrigir defeitos gnéticos
- estratégia terapêutica que usa transferencia de material para modificar o genoma da célula-alvo, expressando o gene transferido
